一种用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法技术

本发明专利技术公开了一种用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法，样品直接在PVDF膜上一步完成烷基化修饰，省去换液、脱盐、冻干等步骤，所用试剂更为经济，环保，大大节省前处理时间。

【技术实现步骤摘要】
一种用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法
本专利技术属于药物分析领域，具体涉及一种用于生物技术药物N术端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法。
技术介绍
生物技术药物的N末端氨基酸序列分析是中国药典明确规定的内容，要求测定N端15个氨基酸。采用氨基酸序列分析仪测定蛋白质药物的N术端氨基酸基于Edman降解原理，从蛋白质的自由N端起，经过衍生、切割、转化等化学反应步骤，生成PTH-氨基酸。PTH-氨基酸在紫外光269nm处有最大吸收，经高效液相分离分析和保留时间最终确认氨基酸的排列顺序。在2015版中国药典三部收录的治疗类生物制品中2种促红素相关产品、3种干扰素α1b相关产品、4种干扰素α2a相关产品、11种干扰素α2b相关产品、4种表皮生长因子相关产品的N末端15个氨基酸序列分析包含了半胱氨酸的测定，另外还有大量药典未收录的生物技术药物N末端需测定半胱氨酸，如胰岛素以及类胰岛素相关产品。半胱氨酸在蛋白质中一般以二硫键形式存在，必须要将二硫键打开，并且进行烷基化修饰才有可能在氨基酸序列分析色谱图上检测到半胱氨本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法，其特征在于全部前处理只需约15分钟，更加方便、快捷、安全、环保，包括以下步骤：/n1)吸取10μL样品点在甲醇浸润过的PVDF膜上，风干或氩气吹干，洗涤数次；/n2)反应缓冲液配制：0.1M Tris-HCl缓冲液(pH8.4)含6M盐酸胍、0.02M DTT、0.2％4-乙烯基吡啶；/n3)将PVDF膜放入100μL上述反应液中，室温避光放置10分钟；/n4)取出PVDF膜，去离子水洗涤数次，风干后上样。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法，其特征在于全部前处理只需约15分钟，更加方便、快捷、安全、环保，包括以下步骤：
1)吸取10μL样品点在甲醇浸润过的PVDF膜上，风干或氩气吹干，洗涤数次；
2)反应缓冲液配制：0.1MTris-HCl缓冲液(pH8.4)含6M盐酸胍、0.02MDTT、0.2％4-乙烯基吡啶；
3)将PVDF膜放入100μL上述反应液中，室温避光放置10分钟；
4)取出PVDF膜，去离子水洗涤数次，风干后上样。


2.根据权利要求1所述的用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法，其特征在于：步骤1)直接在PVDF膜上完成反应，避免了换液，脱盐，冻干等...

【专利技术属性】
技术研发人员：方均建，董方霆，吴胜明，李惠，王德刚，赵俊清，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11