一株汉逊德巴利酵母菌株及其在制备水果保鲜剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一株汉逊德巴利酵母菌株及其在制备水果保鲜剂中的应用。该菌株分类命名为汉逊德巴利酵母‘NDB‑001’Debaryomyces hansenii‘NDB‑001’，于2020年5月7日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：M2020106。研究发现汉逊德巴利酵母Debaryomyces hansenii‘NDB‑001’悬浮液可有效抑制葡萄孢菌的生长；可有效延长苹果、水蜜桃、樱桃、草莓、葡萄、柑橘、桑葚、荔枝等水果的贮藏时间。本发明专利技术为水果保鲜提出了一条可行的技术途径，对于维持水果采后品质，减少贮藏损失，促进该行业的可持续发展具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一株汉逊德巴利酵母菌株及其在制备水果保鲜剂中的应用
本专利技术属于农产品保鲜领域，具体涉及一株汉逊德巴利酵母菌株Debaryomyceshansenii‘NDB-001’及其在制备水果保鲜剂中的应用。
技术介绍
水果在采摘、加工、贮藏以及运输过程中容易造成机械损伤，病原菌极易通过伤口侵染果实造成腐烂。我国每年约有8×103万吨水果因采后病害而无法销售，损失高达800亿元。水果采后病害严重制约了我国水果产业的发展。目前，防治水果采后病害应用最广泛的仍然是化学药剂，但存在成本高、污染环境、危害人体健康和破坏生态平衡等不足。随着科学的发展和人们安全意识的提高，运用新型绿色、环保的生物防治技术控制果蔬采后病害已成为当下研究的热点。在多种生防菌中，酵母菌因具有遗传稳定、安全性高、营养需求低、增值速度快等优点，成为防治果蔬采后病害的主要生防菌，具有广阔应用前景。大量研究表明，酵母菌作为拮抗菌的主要作用方式包括其对病原菌的寄生作用、分泌抗真菌化合物、诱导寄主产生抗性和营养与空间竞争。研究发现，某些酵母可以产生抑菌物质，在不接触植物组织的情况下直接抑制病原菌的生长从而达到防治水果采后病害的效果。拮抗酵母产生的抑菌物质包括挥发性和非挥发性两种。挥发性抑菌物质主要是一些醇类以及酯类物质。已有研究表明，柠檬克勒克酵母(Kloeckeraapiculate)中分离到的2-苯基乙醇能够防治柑橘青霉病；安诺拉毕赤酵母(Pichiaanomala)产生的挥发性抗菌物质(如乙醇和乙酸乙酯)能够抑制灰霉病菌；掷孢酵母(Sporidioboluspararoseus)在培养基中产生的挥发性有机化合物能够显著抑制灰霉病菌分生孢子萌发以及菌丝体的生长。分泌抑菌物质的拮抗酵母克服了其在商业化应用过程中难以保持细胞活力和防治效果这一难题，同时产生挥发性抗菌物质的拮抗酵母为通过生物熏蒸防治水果采后病害提供了可能性，这为防治水果采后病害打开了新思路。参考文献如下：[1]胡浩.西藏罗伦隐球酵母对水果采后病害的防治效果及相关机制研究[D].杭州：浙江大学,2016.[2]LiuP,ChengY,YangM,LiuY,ChenK.Mechanismsofactionfor2-penicillium,moldsofcitrusfruits[J].BMCMicrobiology,2014,14(1):242.[3]HuangR,CheHJ,ZhangJ,YangL,JiangDH,LiGQ.EvaluationofSporidioboluspararoseusstrainYCXT3asbiocontrolagentofBotrytiscinereaonpost-harveststrawberryfruits[J].BiologicalControl,2012,62(1):53-63.[4]KwasiborskiA,BajjiM,RenautJ,DelaplaceP,JijakliMH.IdentificationofmetabolicpathwaysexpressedbyPichiaanomalaKh6inthepresenceofthepathogenBotrytiscinereaonapple:newpossibletargetsforbiocontrolimprovement[J].PlosOne,2014,9(3):e91434.
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的具有水果保鲜作用的生防酵母菌及其应用，并给出了该生防菌的培养和使用方法。该菌株分类命名为汉逊德巴利酵母‘NDB-001’Debaryomyceshansenii‘NDB-001’，于2020年5月7日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏地址为：中国武汉市武汉大学，保藏编号为CCTCCNO：M2020106。通过室内平板抑菌实验测定，结果表明：在很低的用量下，该生防酵母菌对引起水果腐烂病的葡萄孢菌具有很好的抑制作用。离体水果保鲜实验表明，该保鲜物质在很低的用量下可有效延缓苹果、水蜜桃、番茄等多种水果的衰老与病害，具有非常好的水果保鲜效果。该酵母菌能够用于制备低成本、无污染和无农药残留的天然保鲜剂。本专利技术的目的可以通过以下技术措施得以实现：一株具有水果保鲜功能的酵母菌菌株，该菌株分类命名为汉逊德巴利酵母‘NDB-001’Debaryomyceshansenii‘NDB-001’，于2020年5月7日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏地址为：中国武汉市武汉大学，保藏编号为CCTCCNO：M2020106。上述的酵母菌菌株在制备水果保鲜剂中的应用。上述的应用，其在于采用上述酵母菌菌株的悬浮液制成水果保鲜剂。优选的，将上述的酵母菌菌株振荡培养48h后低温离心收集菌体。用无菌水悬浮菌体沉淀并调节至合适浓度后制成保鲜剂。一种水果保鲜剂，该水果保鲜剂为振荡培养上述酵母菌菌株，离心收集菌体沉淀，用无菌水悬浮后制成的。一种水果保鲜方法，将上述酵母菌菌株的悬浮液置于水果箱进行水果保鲜。优选的，所述酵母菌悬浮液为用无菌水悬浮酵母菌菌体沉淀后制成的。本专利技术所述的水果为苹果、水蜜桃、樱桃、草莓、葡萄、柑橘、桑葚或荔枝。本专利技术技术方案的详细过程为：(1)水果保鲜物质的制备为了得到有高活性物质的保鲜物质，本专利技术将酵母菌振荡培养48h后，低温离心收集菌体。用无菌水悬浮菌体沉淀制成酵母菌悬浮液，调节至合适浓度即制成保鲜物质。(2)水果保鲜物质对几种病原菌的室内平板抑制作用测定为了测试保鲜物质对病原菌生长抑制作用的有效性，本专利技术量取一定量的保鲜物质，置于二分格培养皿的其中一半，另一半倒入培养基培养病原菌。以无菌水作为对照。通过菌丝生长速率法测定保鲜物质对病原菌的抑制效果。(3)离体水果保鲜测试为了测试保鲜物质对水果保鲜的有效性，本专利技术量取一定量的保鲜物质，置于接种有水果腐烂病菌水果的塑料盒中，以不放置本专利技术保鲜物质作为对照。保鲜膜封口后定期观察，并记录水果的发病情况。(4)水果保鲜剂的开发将该保鲜物质开发成天然商品保鲜剂。本专利技术的有益效果：本专利技术中的保鲜物质由能产生挥发性抑菌物质的汉逊德巴利酵母Debaryomyceshansenii‘NDB-001’制备而来，材料易得，成本低廉；只需将该酵母菌进行振荡培养后离心，用无菌水悬浮菌体沉淀即得，工艺简单，操作方便，大大降低了生产成本。室内平板抑制实验结果表明，100μL该保鲜物质(1x108cfu/mL)即可完全抑制葡萄孢菌的生长，抑制率达100％。离体水果保鲜实验中，将30mL该保鲜物质置于装有苹果的塑料盒中即可显著抑制引起灰霉病的葡萄孢菌生长，大大降低了采后苹果的病害率，贮藏到第14天时好果率高达78.2％，保鲜效果显著；当将保鲜物质的量增加至60mL时，其好果率可达90.7％。使用该保鲜物质后大大降低了采后苹果的病害率，提高了好果率，起到了显著的保鲜效果。实验结果表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株具有水果保鲜功能的酵母菌菌株，该菌株分类命名为汉逊德巴利酵母‘NDB-001’Debaryomyces hansenii‘NDB-001’，于2020年5月7日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO：M2020106。/n

【技术特征摘要】
1.一株具有水果保鲜功能的酵母菌菌株，该菌株分类命名为汉逊德巴利酵母‘NDB-001’Debaryomyceshansenii‘NDB-001’，于2020年5月7日送交中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCCNO：M2020106。


2.权利要求1所述的酵母菌菌株在制备水果保鲜剂中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，采用权利要求1所述酵母菌菌株的悬浮液制成水果保鲜剂。


4.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：窦道龙，田月娥，叶琴，沈丹宇，徐衡，胡白石，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32