基于SNP标记鉴定蓝鳍金枪鱼的引物、方法和试剂盒技术

本发明专利技术提供基于蓝鳍金枪鱼的物种特异性SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的成套引物，其包括基于所述SNP分子标记而设计的一对PCR扩增引物和一条循环探针。所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.1所示序列中第808位的G碱基或位于SEQ ID No.2所示序列中第220位的A碱基。本发明专利技术还提供基于成套引物建立的鉴定蓝鳍金枪鱼的方法和试剂盒。本发明专利技术的成套引物、方法以及试剂盒能够快速鉴定或鉴别蓝鳍金枪鱼，具有操作简便、取样量低、检测周期短、方法特异性好、灵敏度高等特点。灵敏度高等特点。灵敏度高等特点。

【技术实现步骤摘要】
基于SNP标记鉴定蓝鳍金枪鱼的引物、方法和试剂盒


[0001]本专利技术属于水产品物种鉴别、检测的
，具体涉及基于蓝鳍金枪鱼的物种特异性SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的引物、方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]金枪鱼种类很多，包括蓝鳍金枪鱼(Thunnusthynnus)、马苏金枪鱼(Thunnusmaccoyii)、黄鳍金枪鱼(Thunnusalbacares)、大目金枪鱼(Thunnusobesus)和长鳍金枪鱼(Thunnusalalunga)等，其中蓝鳍金枪鱼、马苏金枪鱼等的经济价值最高，蓝鳍金枪鱼等高档金枪鱼甚至占市场份额的60％以上，在国内金枪鱼的主要销售形式为生鱼片、寿司等。由于不同物种金枪鱼价格差异很大，尤其是多数金枪鱼产品均采用去头去皮切块切片的销售方式，无法用形态学方法鉴别金枪鱼产品，导致金枪鱼市场上标签错乱和以次充好的问题较为严重。
[0003]用低值金枪鱼假冒高值蓝鳍金枪鱼的不法行为尤为突出，蓝鳍金枪鱼在所有金枪鱼类中体型最大，因其脂肪含量高、肉质鲜美，是金枪鱼类中的上品。然而，蓝鳍金枪鱼每年渔获量并不高，其主要销售方式为切片销售，缺乏外部形态学特征，不易鉴定其真伪，不法商家以次充好，甚至通过染色的方式，以低价值的其他金枪鱼生鱼片冒充高价值的蓝鳍金枪鱼生鱼片，获取暴利，扰乱了市场秩序，破坏了商业诚信，损害了消费者利益。
[0004]现阶段常用的鉴别方法是基于DNA条形码技术的分子生物学方法，该方法具有较为准确等优点，但必须依赖克隆、测序、比对等较为繁琐的步骤，检测时间较长。因此，急需开发能够快速、准确地鉴定蓝鳍金枪鱼及其制品的试剂和方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的一方面在于提供一种基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的成套引物和探针，所述成套引物包括基于所述蓝鳍金枪鱼的物种特异性SNP分子标记而设计的一对PCR扩增引物和一条循环探针。所述蓝鳍金枪鱼的物种特异性SNP分子标记是通过蓝鳍金枪鱼、马苏金枪鱼、黄鳍金枪鱼、大目金枪鱼、长鳍金枪鱼等不同物种、不同海域的样本经2b-RAD简化基因组测序、筛选、比对、验证而获得的。
[0006]优选地，所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.1所示序列中第808位的G碱基。成套引物中的所述一对PCR扩增引物包括上游引物和下游引物，上游引物的序列是或包含5
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GGGCTATCTGTTTCCTCCTG-3
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，下游引物的序列是或包含5
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CTGAAGTAATCTGAAGGATG-3
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；所述循环探针的序列是5
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ctctcct(G)aa-3
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，所述循环探针的5
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端标记有荧光报告基团6-FAM，3
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端标记有荧光淬灭基团Eclipse。
[0007]优选地，所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.2所示序列中第220位的A碱基，成套引物中的所述一对PCR扩增引物包括上游引物和下游引物，上游引物的序列是或包含5
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GGAGGCACATACACTCATGAAACA-3
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，下游引物的序列是或包含5
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CTCAGTATCATCCCATGATGAACAA-3
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；所述循环探针的序列是5
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，所述循环
探针的5
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端标记有荧光报告基团6-FAM，3
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端标记有荧光淬灭基团Eclipse。
[0008]另一方面，本专利技术的目的还在于提供基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的方法，其包括：(I)基于所述SNP分子标记设计的一对PCR扩增引物和所述一条循环探针；(II)从待鉴定对象的肌肉组织中提取DNA；(III)利用所述一对PCR扩增引物和所述循环探针，以步骤(II)中所提取的DNA为模板进行实时荧光PCR反应。
[0009]优选地，根据本专利技术的基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的方法，所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.1所示序列中第808位的G碱基，所述一对PCR扩增引物中的上游引物的序列是或包含5
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GGGCTATCTGTTTCCTCCTG-3
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，下游引物的序列是或包含5
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CTGAAGTAATCTGAAGGATG-3
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；所述循环探针的序列是5
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ctctcct(G)aa-3
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，5
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端标记有荧光报告基团6-FAM，3
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端标记有荧光淬灭基团Eclipse。所述实时荧光PCR反应的程序为：95℃预变性30秒；95℃变性5秒，55℃退火10秒，72℃延伸20秒，收集荧光信号，循环反应40次。
[0010]优选地，根据本专利技术的基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的方法，所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.2所示序列中第220位的A碱基，所述一对PCR扩增引物中的上游引物的序列是或包含5
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GGAGGCACATACACTCATGAAACA-3
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；所述循环探针的序列是5
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，所述循环探针的5
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端标记有荧光报告基团6-FAM，3
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端标记有荧光淬灭基团Eclipse。所述实时荧光PCR反应的程序为：95℃预变性30秒；95℃变性5秒，55℃退火10秒，72℃延伸20秒，收集荧光信号，循环反应40次。
[0011]本专利技术的目的还在于提供基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的试剂盒，其包括：基于所述SNP分子标记而设计的一对PCR扩增引物和一条循环探针。
[0012]优选地，根据本专利技术的试剂盒，所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.1所示序列中第808位的G碱基，所述一对PCR扩增引物中的上游引物的序列是或包含5
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GGGCTATCTGTTTCCTCCTG-3
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，下游引物的序列是或包含5
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端标记有荧光淬灭基团Eclipse。
[0013]优选地，根据本专利技术的试剂盒，所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.2所示序列中第220位的A碱基，所述一对PCR扩增引物中的上游引物的序列是或包含5
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GGAGGC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的成套引物，其特征在于：所述成套引物包括基于所述蓝鳍金枪鱼的物种特异性SNP分子标记而设计的一对PCR扩增引物和一条循环探针。2.根据权利要求1所述的基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的成套引物，其特征在于：所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.1所示序列中第808位的G碱基，所述一对PCR扩增引物中的上游引物的序列是或包含5
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GGGCTATCTGTTTCCTCCTG-3
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，下游引物的序列是或包含5
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；所述循环探针的序列是5
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端标记有荧光报告基团6-FAM，3
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端标记有荧光淬灭基团Eclipse。3.根据权利要求1所述的基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的成套引物，其特征在于：所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.2所示序列中第220位的A碱基，所述一对PCR扩增引物中的上游引物的序列是或包含5
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GGAGGCACATACACTCATGAAACA-3
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，下游引物的序列是或包含5
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；所述循环探针的序列是5
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cctgga(A)aca-3
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，所述循环探针的5
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端标记有荧光报告基团6-FAM，3
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端标记有荧光淬灭基团Eclipse。4.一种基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的方法，其包括：(I)基于所述SNP分子标记设计一对PCR扩增引物和一条循环探针；(II)从待鉴定对象的肌肉组织中提取DNA；(III)利用所述一对PCR扩增引物和所述循环探针，以步骤(II)中所提取的DNA为模板进行实时荧光PCR反应。5.根据权利要求4所述的基于SNP分子标记鉴定蓝鳍金枪鱼的方法，其特征在于：所述SNP分子标记包括位于SEQ ID No.1所示序列中第808位的G碱基，所述一对PCR扩增引物中的上游引物的序列是或包含5
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GGGCTATCTGTTTCCTCCTG-3
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，下游引物的序列是或包含5
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CTGAAGTAATCTGAAGGATG-3
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；所述循环探针的序列是5
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ctctcct(G)aa-3
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，所述循环探针的5
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端标记有荧光报告基团FAM，3
’
...

【专利技术属性】
技术研发人员：姚琳，曲梦，江艳华，郭莹莹，李娜，李风铃，王联珠，谭志军，卢立娜，柳淑芳，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院黄海水产研究所，
类型：发明
国别省市：