荧光标记的鼻内递送制造技术

本发明专利技术提供了一种CNS疾病的诊断方法，包括向受试者施用视网膜完整性的荧光标记并生成受试者眼睛的图像，其中，还提供了通过鼻内给药递送荧光标记，以及在此方法中使用的鼻内给药的视网膜完整性的荧光标记。此外，本发明专利技术还提供了一种药物组合物，其包含结合至2kDa或更小的化合物的膜联蛋白或其功能性片段或衍生物，其中，药物组合物包含在浓度至少为mg/ml下结合的膜联蛋白或其功能性片段或衍生物。下结合的膜联蛋白或其功能性片段或衍生物。下结合的膜联蛋白或其功能性片段或衍生物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】荧光标记的鼻内递送


[0001]本专利技术涉及用于诊断CNS疾病的荧光标记。

技术介绍

[0002]视网膜评估可以提供关于许多系统性疾病的存在和严重性的信息。例如，凋亡的视网膜细胞的检测(DARC)描述了一种监测视网膜细胞死亡速率的技术，最近完成了诊断青光眼的I期临床试验(科尔迪罗等，2017年)，目前正在一系列神经退行性疾病进行中的II期临床试验，包括青光眼、与年龄有关的黄斑变性、视神经炎和唐氏病(作为阿尔茨海默氏病的模型)。该技术目前包括静脉内施用一种称为Anx776的新型荧光剂，新型荧光剂包含内源蛋白Annexin A5的改良版，其与近红外荧光团Dy-776荧光结合(科尔迪罗等，2017)。
[0003]DARC利用眼睛的独特光学特性，可以使用荧光标记的人膜联蛋白V衍生物直接观察患者的单神经细胞凋亡。膜联蛋白V是一种人蛋白，其具有在存在钙的条件下与磷脂酰丝氨酸(PS)结合的能力。PS存在于每个细胞的质膜中，但是，凋亡细胞在质膜的外部小叶中表达PS。膜联蛋白V与暴露的PS结合，从而识别细胞凋亡。
[0004]对于DARC的I期和II期临床试验，Anx776均通过静脉给药。通过共聚焦扫描激光检眼镜(cSLO)成像用于检测视网膜疾病的其他荧光分子也主要通过静脉注射给药。例如，荧光素钠和吲哚菁绿(ICG)通常静脉给药以标记视网膜脉管系统，以识别与年龄相关性黄斑变性(AMD)有关的异常血管生长(血管生成)和渗漏(约齐克等，2005)。
[0005]静脉给药的使用需要直接的医学监督，意味着除非怀疑可疑病理，否则不会对患者进行常规评估。因此，需要可用于评估视网膜的替代技术，以使患者能够更广泛地进行此类评估，并可能更早地诊断视网膜和神经退行性疾病。

技术实现思路

[0006]根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了视网膜完整性的荧光标记，用于诊断中枢神经系统(CNS)疾病，其中，荧光标记通过鼻内给药递送。出人意料的是，本申请的专利技术人发现，鼻内施用荧光标记导致视网膜中荧光的快速积累，视网膜成像的结果与先前静脉施用相同荧光剂后获得的结果相同。
[0007]不受理论的束缚，专利技术人相信，鼻内递送的视网膜完整性的荧光标记被系统吸收到循环中。由于局部给药，视网膜完整性的荧光标记可能需要减少剂量，且与相同试剂的全身给药相比起效更快。
[0008]如本说明书所用，视网膜完整性的荧光标记是指用于查询视网膜细胞的健康和/或视网膜细胞和/或血管的完整性的荧光标记。例如，荧光标记可以识别和/或区分凋亡和坏死细胞，或识别血管渗漏或血管生成的区域。响应于激发，荧光标记发光且可以具有约400nm至约1000nm，优选约500nm至约900nm的发射波长。
[0009]视网膜完整性的荧光标记优选以适合局部递送，尤其是鼻内递送的形式提供。视网膜完整性的荧光标记可以以药物组合物的形式提供，可以以适合吸入的溶液、悬浮液或
干粉形式提供。包含视网膜完整性的荧光标记的药物组合物可以是无菌的，且可以包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。合适的载体和赋形剂是本领域技术人员所熟悉的，并且可以根据鼻内递送的预期途径进行优化。例如，包含视网膜完整性的荧光标记的组合物还可包含缓冲剂、粘合剂、防腐剂、增稠剂或抗氧化剂，如海藻糖。
[0010]在本专利技术的一些实施例中，视网膜完整性的荧光标记可以是视网膜血管完整性的荧光标记。通常，荧光标记将进入视网膜血管并在其中循环，从而易于观察到异常的血管生长(血管生成)和/或渗漏部位。
[0011]视网膜血管完整性的荧光标记可以具有约2kDa或以下，或1kDa或以下的分子量。在本专利技术的一些实施例中，视网膜血管完整性的荧光标记可具有约100Da、或约1kDa的分子量，优选约300Da至约800Da的分子量。
[0012]用于本专利技术的合适的视网膜血管完整性的荧光标记包括荧光团，特别优选的视网膜血管完整性的荧光标记包括荧光素钠和吲哚菁绿(ICG)。
[0013]如上所述，视网膜血管完整性的荧光标记将通过鼻内给药，且可以与相同标记静脉内给药的剂量相同或更少的剂量来给药。例如，荧光素钠可以约50mg/mL至约500mg/mL的浓度鼻内施用，优选约50mg/mL至约200mg/mL的浓度。在本专利技术的一些实施例中，荧光素钠可以约以100mg/mL浓度鼻内施用。可以以浓度为约1mg/mL至约100mg/mL，优选约25mg/mL至约100mg/mL鼻内施用ICG。在本专利技术的一些实施例中，ICG可以约50mg/mL鼻内施用。
[0014]在本专利技术的一些实施例中，视网膜完整性的荧光标记可以是视网膜细胞完整性的标记。通常，视网膜细胞完整性荧光标记包括荧光标签和细胞凋亡、坏死、细胞活性、细胞应激或蛋白质聚集中的一种或多种标记。
[0015]荧光标签是指响应激发而发光的化合物或分子(如荧光团)，其可以选择使用，因为信噪比提高，从而在遵守曝光安全标准的同时提高了图像分辨率和灵敏度，避免光毒作用。优选荧光标签在给药时几乎不引起炎症或不引起炎症。荧光标签可以具有红外或近红外范围的波长。荧光标签可以具有约400nm至约1000nm，优选约500nm至约900nm，更优选约700nm至约900nm的发射波长。
[0016]合适的荧光标签包括荧光素钠、吲哚菁绿(ICG)、姜黄素、IRDye700、IRDye800、Dy-776、Dy-488和D-781中的一种或多种。在本专利技术的优选实施例中，荧光标签是Dy-776。
[0017]可以使用用于将荧光标签与标记结合的标准技术来制备视网膜细胞完整性荧光标记。这样的标记可以从众所周知的来源获得，例如Dyomics。用于将标签与标记结合的适当技术是本领域已知的，并且可以由标签的制造商提供。
[0018]凋亡标记是指使经历凋亡的细胞与活细胞区分开的标记。此外，标记优选应能够从坏死细胞中区分凋亡细胞。例如，可以是特异性结合凋亡细胞但不结合活细胞或坏死细胞的化合物或分子。例如，凋亡标记包括膜联蛋白家族蛋白。膜联蛋白是在阳离子存在下可逆地结合到细胞膜上的蛋白质。特别地，膜联蛋白在钙存在的条件下能够结合磷脂酰丝氨酸(PS)。PS存在于每个细胞的质膜中，但是，凋亡细胞在质膜的外部小叶中表达PS。膜联蛋白与暴露的PS结合，从而识别细胞凋亡。可用于本专利技术的膜联蛋白可以是天然的或重组的。蛋白质可以是完整的，也可以是功能片段，也就是说，膜联蛋白的片段或部分特异性结合与整个蛋白质相同的分子。此外，可以使用此类蛋白质的功能性衍生物。特别地，膜联蛋白的功能片段或衍生物可以包括含有“膜联蛋白重复”的分子，是在单个膜联蛋白内和家族成员
之间均保守的约70个氨基酸的结构域。可获得多种膜联蛋白，如美国专利申请公开号2006/0134001A中描述的膜联蛋白。优选的膜联蛋白是膜联蛋白5，其在本领域众所周知的。其他可以使用的膜联蛋白包括膜联蛋白11、2和6。其他凋亡标记在本领域中是已知的，例如，包括突触标签素I的C2A结构域、杜拉霉素、基于非肽的靛红磺酰胺类似物，例如WC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记通过鼻内给药递送。2.根据权利要求1所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记为粉末、悬浮液或溶液形式。3.根据权利要求1或2所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记为视网膜血管完整性的标记。4.根据权利要求1至3中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记的分子量为约2kDa或更小。5.根据权利要求1至4中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记选自荧光素钠或吲哚菁绿(ICG)中的一种或多种。6.根据权利要求1或2所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记是视网膜细胞完整性的标记。7.根据权利要求1、2或6所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标记包括荧光标签和凋亡、坏死、细胞活性、细胞应激或蛋白质聚集中的一种或多种的标记。8.根据权利要求6或7所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标签具有约400nm至约1000nm的发射波长。9.根据权利要求6至8中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述荧光标签选自荧光素钠、吲哚菁绿(ICG)、姜黄素、IRDye700、IRDye800、Dy-776、Dy-488和D-781中的一种或多种。10.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述凋亡标记选自膜联蛋白、突触素I的C2A结构域、杜拉霉素、基于非肽的靛红磺酰胺类似物，如WC-II-89和ApoSense，如NST-732、DDC和ML-10，中的一个或多个。11.根据权利要求10所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述膜联蛋白选自膜联蛋白2、膜联蛋白5、膜联蛋白6、膜联蛋白11或膜联蛋白128中的一种或多种。12.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，坏死标记选自碘化丙啶(PI)、焦磷酸盐、抗肌球蛋白、草酸盐、金丝桃素、金丝桃素一元羧酸、棕榈酸、双-酰肼-双-DTPA棕榈酸、99mTc-焦磷酸盐、111-抗肌球蛋白、99mTc-葡萄糖酸盐和亚甲基蓝。13.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，细胞活性标记选自膜染料、线粒体染料、自噬染料、坏死染料和钙流中的一种或多种。14.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，细胞应激的标记选自脂质过氧化、谷胱甘肽(GSH)或活性氧(ROS)中的一种或多种，如超氧化物、过氧自由基、过氧化氢、羟基、过氧亚硝酸盐。15.根据权利要求6至9中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，所述蛋白质聚集的标记选自刚果红、姜黄素或硫黄素S中的一种或多种。16.根据权利要求1至15中任一项所述的用于诊断CNS疾病的视网膜完整性的荧光标记，其中，CNS疾病是炎性的(如关节炎或肉芽肿)、感染性的(如病毒、脑炎或细菌)、血管的
(如血管生成、闭塞或代谢)，或退化性的(如青光眼、与年...

【专利技术属性】
技术研发人员：本杰明，
申请(专利权)人：UCL商业有限公司，
类型：发明
国别省市：