DNA正四面体-滚环扩增产物双交联水凝胶的制备方法技术

本发明专利技术建立了一种DNA正四面体—滚环扩增产物双交联水凝胶的制备方法。该方法将快速自组装成的DNA正四面体（TDN）和滚环扩增（RCA）产物相结合，仅需10min即可获得双交联水凝胶，解决了RCA技术制备DNA水凝胶耗时长的问题。同时，TDN的双链结构大大增强了水凝胶网络的机械强度，并为染料、药物等包埋物的高效搭载提供嵌合位点。此外，双交联水凝胶微观上具有由纳米花密集交联形成的蜂巢状结构，其致密度与纳米花的粒径大小可通过TDN浓度和RCA反应时间进行调节，实现了微观形貌可控。本发明专利技术实现了快速制备具有包埋物搭载高效、形貌可控、通用性强等优点的TDN

【技术实现步骤摘要】
DNA正四面体-滚环扩增产物双交联水凝胶的制备方法


[0001]本专利技术属于生物材料领域，具体涉及一种DNA正四面体-滚环扩增产物双交联水凝胶的制备方法。

技术介绍

[0002]基于RCA技术制备核酸水凝胶的方法存在耗时长、水凝胶机械强度低，不易搭载包埋物，导致可利用率低的问题。同时，RCA水凝胶的微观结构呈纳米花单一形貌，制备过程种难以对其大小及形貌结构进行调控，极大的限制了DNA水凝胶的推广应用。通过引入核酸自组装的DNA正四面体（TDN）高级结构能够有效弥补RCA技术制备核酸水凝胶的不足，为DNA水凝胶的制备提供了新的思路。一方面，由于TDN能够快速自组装，且以刚性的DNA双链为主要结构，因此直接解决了仅通过RCA技术制备DNA水凝胶耗时长、长单链产物机械强度低的问题，仅需10min即可获得高粘弹性的双交联水凝胶。另一方面，DNA水凝胶的合成对核酸链的长度和浓度具有一定的依赖性，通过将RCA长单链产物与TDN结合的方式显著降低了单一核酸结构制备DNA水凝胶所需的核酸量，从而进一步克服了核酸人工合成成本高对DNA水凝胶应用开发的限制。此外本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA正四面体—滚环扩增产物双交联水凝胶的制备方法，其特征在于，所述DNA正四面体—滚环扩增产物双交联水凝胶的制备体系包括由滚环扩增反应获得的长单链DNA产物和四条DNA单链Tar、Tbr、Tcr、Tdr自组装形成的DNA正四面体；所述滚环扩增反应包括锁式探针；所述锁式探针上编辑有靶标特异性适配体的互补序列，以使滚环扩增产物中含有靶标特异性的适配体序列。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述四条DNA单链Tar、Tbr、Tcr、Tdr具有以下结构：1）各条DNA单链序列由三个链间两两互补序列A、B、C，两个非互补短铰链序列a、b，一个非互补长铰链序列c，以及一个连接臂序列X组成；2）各条DNA单链序列中序列A、B、C是长度17nt且无重复的核酸序列，序列a、b是长度2nt且无重复的核酸序列，序列c是长度6nt的重复T核酸序列，序列X是长度为18nt与RCA长单链DNA产物中各单元序列互补的核酸序列；3）各条DNA单链序列由5
’
端至3
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端方向，是按照序列A、序列a、序列B、序列b、序列C、序列c和序列X的顺序依次排列的核酸序列。3.根据权利要求1-2所述的制备方法，其特征在于，所述四条DNA单链Tar、Tbr、Tcr、Tdr中还包括下述结构：1）所述DNA单链Tar中Tar-A序列与Tcr-A序列互补，Tar-B序列与Tbr-B序列互补，Tar-C序列与Tdr-C序列互补；2）所述DNA单链Tbr中Tbr-A序列与Tdr-A序列互补，Tbr-C序列与Tcr-C序列互补；3）所述DNA单链Tcr中Tcr-B序列与Tdr-B序列互补，Tar-B序列与Tbr-B序列互补，Tar-C序列与Tdr-C序列互补。4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，四条DNA单链Tar、Tbr、Tcr、Tdr中为如下结构：1）所述Tar序列包括序列表中的SEQ ID NO：3所示核酸序列和/或SEQ ID NO：3所示核酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加的核酸序列；2）所述Tbr序列包括序列表中的SEQ ID NO：4所示核酸序列和/或SEQ ID NO：4所示核酸序列经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加的核酸序列；3）所述Tcr序列包括序列表中的SEQ ID NO：5所示核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：许文涛，黄昆仑，张洋子，谢银侠，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：