一种重组人分泌型DDRGK1的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种重组人分泌型DDRGK1的应用，本发明专利技术经过实验论证，合成重组人分泌型DDRGK1，并应用于制备治疗椎间盘退变、骨折或骨缺损的生物制剂药物，为骨相关疾病的治疗打开了新的思路并取得了较为坚实的科学证据，拓展了重组人分泌型DDRGK1在临床的进一步应用。展了重组人分泌型DDRGK1在临床的进一步应用。展了重组人分泌型DDRGK1在临床的进一步应用。

【技术实现步骤摘要】
一种重组人分泌型DDRGK1的应用


[0001]本专利技术属于骨与关节疾病治疗领域，特别涉及一种重组人分泌型DDRGK1的应用。

技术介绍

[0002]我国人口老龄化不断加剧，老年人口以每年5.2％的速度增加，2017年我国60岁以上老年人口超2.3亿，是世界上唯一一个老年人口过两亿的国家；预计到2050年，中国老年人口将达到4.8亿，约占届时全球老年人口的四分之一。与之相关的老龄人口健康问题也将给我国医疗带来巨大考验，其中以骨与关节疾病(骨关节炎、椎间盘退变、骨质疏松、骨折等)，在我国60岁以上老年人群的发病率高达80％。当然，在WHO的统计下，骨与关节疾病发病率排名第二，仅次于心血管疾病。同时，骨与关节疾病致残率高，导致人力资源丧失，加重医疗负担重。
[0003]目前对于骨与关节疾病的治疗已经出现阶梯治疗的概念，即病症较轻的予以药物，病症重，急症等情况采取有创性治疗，从创伤大小又有大多仅能解决部分问题的微创手术治疗(如：关节镜、椎间孔镜等)以及创伤较大但一般一劳永逸的终极手术治疗(如：关节置换、椎间融合等)。对于骨质疏松，往往仅能通过药物进行提升骨量的防治，目前没有有效的手术疗法。
[0004]DDRGK1由314个氮基酸组成，其中1-28为信号肽部分，决定DDRGK1在内质网定位或外分泌。DDRGK1(1-114)可与CDK5RAP3结合以调节NF-kB信号，参与内质网应激导致的细胞凋亡[Wu J,Lei G,Mei M,et al.A novel C53/LZAP-interacting protein regulates stability ofC53/LZAP and DDRGK domain-containing Protein 1(DDRGK1)and modulates NF-kappaB signaling.TheJournal of biological chemistry 2010；285:15126-36]。DDRGK1(118-216)与ASC1相互结合，在 Ufmylation系统蛋白相互作用下，实现ASC1的Ufmylation，介导雌激素受体α(ERα)激活后的信号转录[Yoo HM,Kang SH,Kim JY,et al.Modification of ASC1 by UFM1 is crucial for ERalphatransactivation and breast cancer development.Molecular cell 2014；56:261-74]。DDRGK1的Lys267与 UFM1结合，形成Lys-Gly共价交联，因此DDRGK1又被称为UFM1结合蛋白(UFBP1)[TatsumiK,Sou YS,Tada N,et al.A novel type of E3 ligase for the Ufm1 conjugation system.The Journal of biologicalchemistry 2010；285:5417-27]；同时DDRGK1(216-314)的Lys267同样是与UFL1的结合位点，在这一位点上UFL1催化UFM1与靶蛋白的连接。DDRGK1基因408位点G点突变为A可导致先天性脊柱骨骺发育不良，可能与DDRGK1可抑制SOX9的泛素化-蛋白酶降解有关 [Egunsola AT,Bae Y,Jiang MM,et al.Loss of DDRGK1 modulates SOX9 ubiquitination inspondyloepimetaphyseal dysplasia.The Journal of clinical investigation 2017；127:1475-84]。还发现DDRGK1 与IkBa的结合可影响NF-kB通路的活性[Xi P,Ding D,Zhou J,et al.DDRGK1 regulates NF-kappaB activity by modulating IkappaBalpha stability.PloS one 2013；8:e64231]。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种重组人分泌型DDRGK1的应用，本专利技术经过实验论证，合成的重组人分泌型DDRGK1可应用于制备治疗椎间盘退变、骨折或骨缺损的药物，为骨与关节疾病的治疗打开了新的思路并取得了较为坚实的科学证据，拓展了重组人分泌型 DDRGK1在临床的进一步应用。
[0006]本专利技术提供了一种重组人分泌型DDRGK1的应用，应用于制备治疗骨与关节相关疾病的药物。
[0007]所述重组人分泌型DDRGK1为切除1-28位点的DDRGK1蛋白从定位为细胞膜转变成分泌型的蛋白。
[0008]进一步的，所述重组人分泌型DDRGK1通过抑制髓核细胞内ROS，促进细胞外基质蛋白的二硫键形成，最终促进髓核及椎间盘修复。
[0009]进一步的，所述重组人分泌型DDRGK1促进骨髓间充质干细胞的成骨能力。
[0010]应用于制备治疗椎间盘退变或骨质疏松的药物。
[0011]应用于制备治疗骨折或骨缺损的药物。
[0012]所述药物以重组人分泌型DDRGK1为活性成分，配以药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成制剂使用。
[0013]所述制剂选自注射液、皮下埋植剂、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、缓释剂中的一种。
[0014]有益效果
[0015]本专利技术经过实验论证，合成重组人分泌型DDRGK1，并应用于制备治疗椎间盘退变或者制备治疗骨折或骨缺损的药物，为骨与关节疾病的治疗打开了新的思路并取得了较为坚实的科学证据，拓展了重组人分泌型DDRGK1在临床的进一步应用。
附图说明
[0016]图1为DDRGK1表达构建体示意图。
[0017]图2为DDRGK1分子排阻层析图谱。
[0018]图3为将野生型DDRGK1的1-28号位点切除后出现蛋白外分泌减少(左)，同时小鼠胚胎无法发育(右)。
[0019]图4为重组人分泌型DDRGK1对小鼠胫骨缺损模型的修复。
[0020]图5为重组人分泌型DDRGK1 250ng和600ng刺激大鼠BMSC细胞并诱导成骨的第7天ALP 染色(左)，重组人分泌型DDRGK1 250ng和600ng刺激大鼠BMSC细胞的第14天茜素红染色(右)。
[0021]图6为重组人分泌型DDRGK1的2ug挽救大鼠髓核原代细胞在ROS应激下，高密度培养的第21天阿尔新蓝染色。
[0022]图7为重组人分泌型DDRGK1的2ug挽救大鼠髓核原代细胞在ROS应激下，DCFH法的活性氧检测。
[0023]图8为重组人分泌型DDRGK1的30ug/ml使用DTNB、β-ME、叔丁基过氧化氢法，测定促进二硫键形成。
[0024]图9为重组人分泌型DDRGK1对ATDC5软细胞系的作用。
[0025]图10上图为m-BMSC在重组人分泌型DDRG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人分泌型DDRGK1的应用，其特征在于：应用于制备治疗骨与关节相关疾病的药物。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述重组人分泌型DDRGK1为切除1-28位点的DDRGK1蛋白从定位为细胞膜转变成分泌型的蛋白。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述重组人分泌型DDRGK1通过抑制髓核细胞内ROS，促进细胞外基质蛋白的二硫键形成，最终促进髓核及椎间盘修复。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述重组人分泌型DDRGK1促进骨...

【专利技术属性】
技术研发人员：周唐峻，夏莹，杨骁，秦安，曹禹，赵杰，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属第九人民医院，
类型：发明
国别省市：