一种保护南美白对虾肝肠的复合菌剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种保护南美白对虾肝肠的复合菌剂及其应用。所述复合菌剂包括多形拟杆菌菌粉、胆汁酸和多苞桉桉树精油，三者的质量比为2

【技术实现步骤摘要】
一种保护南美白对虾肝肠的复合菌剂及其应用


[0001]本专利技术属于水产养殖
，具体涉及一种保护南美白对虾肝肠的复合菌剂及其应用。
技术背景
[0002]南美白对虾属杂食性种，因其营养丰富、味道鲜美、做法多样，在中国深受广大民众喜爱，具有较高的经济价值，也因此在我国开始大规模养殖。但南美白对虾在养殖的过程中，容易出现肝胰腺疾病或出现发黄的现象，主要原因有：虾塘底部有机物增多；水体金属含量过高；水体缺少某种微量元素，导致对虾的消化不良，营养物质缺乏；营养物质代谢不彻底，造成对虾肝胰腺负担；南美白对虾本身不分泌胆汁酸，对脂肪吸收能力差，即使出现很小的应激，也会影响肝胰腺的消化吸收，随之带来肝胰腺出现发黄或疾病。而且到了南美白对虾快速生长期和养殖中后期，容易出现白便的问题，白便其实是对虾肝胰腺排出的病变组织、粘液和毒液，肠道脱落的粘膜以及少部分正常的粪便成分。因此，为了更好的促进南美白对虾的生长，开发一种天然、高效、无害的制剂十分必要。

技术实现思路

[0003]本专利技术提供了一种保护南美白对虾肝肠的复合菌剂及其应用。所述复合菌剂安全可靠，能够促进南美白对虾顺利转肝，恢复和保护南美白对虾的肝肠健康。
[0004]为实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0005]本专利技术提供了一种保护南美白对虾肝肠的复合菌剂，所述复合菌剂包括多形拟杆菌菌粉、胆汁酸和多苞桉桉树精油。
[0006]进一步的，所述多形拟杆菌菌粉是由保藏编号为CGMCC No.20818的多形拟杆菌GL-02通过培养发酵干燥制得的。
[0007]进一步的，所述多形拟杆菌菌粉的制备方法为：将多形拟杆菌GL-02挑取至GAM液体培养基中，35℃厌氧环境下活化48h，将得到的活化菌液取1mL再次接种到50mL GAM液体培养基中培养24-76h，将培养液10000rpm/min离心5min后，将菌株沉淀物用其质量10-12倍体积的无菌生理盐水重悬，再次10000rpm/min离心5min，使用其质量5倍体积的无菌生理盐水二次重悬；然后选择脱脂牛奶作为保护剂，并利用真空冷冻干燥法制备成多形拟杆菌GL-02菌粉。
[0008]进一步的，所述多形拟杆菌GL-02菌重悬液的菌含量不小于1
×
109CFU/mL。
[0009]进一步的，所述复合菌剂的菌含量不少于5
×
108CFU/g。
[0010]进一步的，所述复合菌剂中多形拟杆菌菌粉、胆汁酸和多苞桉桉树精油的质量比为2-3∶2-3∶1。
[0011]本专利技术提供了所述的复合菌剂在用于制备南美白对虾饲料添加剂中的应用。
[0012]进一步的，所述复合菌剂的使用量为1公斤饲料添加10-25g复合菌剂。
[0013]进一步的，所述复合菌剂的使用方法为：将所述复合菌剂直接混合到南美白对虾
的养殖饲料中，每天3次，连续投喂20-30天。
[0014]进一步的，所述复合菌剂的添加量为1公斤南美白对虾的养殖饲料添加10-25g复合菌剂。
[0015]进一步的，所述复合菌剂能够恢复南美白对虾的肝脏和肠道健康，减少空肠。
[0016]进一步的，所述复合菌剂能够促进对虾顺利转肝。
[0017]进一步的，所述复合菌剂能够增加南美白对虾的体长增长。
[0018]本专利技术与现有技术相比，具有以下优点和有益效果：
[0019]本专利技术从猪的粪便中分离出一株多形拟杆菌GL-02，该菌不会对动物人体造成伤害，也不会影响环境；本专利技术利用多形拟杆菌GL-02菌粉与胆汁酸、多苞桉桉树精油制备成一种全新的复合菌剂，将其直接添加到南美白对虾的养殖饲料中，既能增强南美白对虾脂肪的消化吸收能力，保证其肝脏吸收和贮存充足的营养物质和能量，又能促进南美白对虾顺利转肝；该复合菌剂中的胆汁酸、桉树精油以及多形拟杆菌GL-02菌粉均具有且保持很好的活性，能够促进对虾肝脏将进入机体的霉菌毒素、抗生素及重金属等毒素排出体外，减少有毒有害物质对肝胰腺的损害。复合菌剂中的多形拟杆菌不仅能够促进脂肪的分解，减少脂肪的堆积，还可以增加对虾对矿物质的吸收。
附图说明
[0020]图1为所述多形拟杆菌GL-02的菌落图片。
[0021]图2为养殖中出现问题的南美白对虾，左侧为黄肝问题，中间为肠道较细的问题，右侧为白便问题。
[0022]图3为使用所述复合菌剂后的南美白对虾；左侧为投喂5天后的南美白对虾，右侧为投喂20天后的南美白对虾。
[0023]图4为未使用所述复合菌剂养殖30天的虾苗。
[0024]图5为使用所述复合菌剂养殖30天的虾苗。
具体实施方式
[0025]以下结合具体实施例对本专利技术的技术方案做进一步详细的说明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。
[0026]实施例1：
[0027]1、多形拟杆菌GL-02的筛选
[0028]取10g健康猪粪便和100mL无菌水混匀，过滤去除杂质后制成粪便稀释液，然后继续向稀释液中添加无菌水，制备成10-1
、10-2
、10-3
、10-4
、10-5
稀释液；再分别取10-2
、10-3
、10-4
、10-5
稀释液涂布至GAM琼脂培养基中，在含有80％N2、10％CO2和10％H2的厌氧环境下，35℃培养48h，选取明显的菌落进行多次纯化后得到单菌落，将得到的单菌落命名为GL-02，冷冻保藏。其中，GAM琼脂培养基配方为：10.0g蛋白胨，3.0g大豆胨，10.0g月示胨，13.5g血清消化粉，2.2g牛肉浸粉，5.0g酵母浸粉，1.2g牛肝浸粉，3.0g葡萄糖，3.0g氯化钠，2.5g磷酸二氢钾，5.0g可溶性淀粉，0.3g L-半胱氨酸，0.15g硫乙醇酸钠，15.0g琼脂，1mL 0.1％维生素K1溶液，3mL氯化血红素溶液，100mg卡那霉素，1000mL蒸馏水，pH 7.1。
[0029]如图1所示，所述菌株GL-02在GAM琼脂培养基上的菌落呈圆形或类圆形，黄色，直
径0.5-2.5mm，表面光滑无光泽，中间微凸，不透明，边缘较整齐。
[0030]2、多形拟杆菌GL-02的鉴定
[0031]提取所述菌株GL-02的基因组DNA，并以此为模板，使用16S rRNA通用引物进行PCR扩增，获得16S rRNA扩增序列后测序，然后将该序列进行Blast比对，结果显示菌株GL-02与GenBank基因库中的多形拟杆菌Bacteroides thetaiotaomicron同源性最高，因此判定菌株GL-02为多形拟杆菌。
[0032]将筛选到的多形拟杆菌GL-02进行菌种保藏，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；保藏日期：2020年09月25日；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种保护南美白对虾肝肠的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂包括多形拟杆菌菌粉、胆汁酸和多苞桉桉树精油。2.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，所述多形拟杆菌菌粉是由保藏编号为CGMCC No.20818的多形拟杆菌GL-02通过培养发酵干燥制得的。3.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂的菌含量不少于5
×
108CFU/g。4.根据权利要求1所述的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂中多形拟杆菌菌粉、胆汁酸和多苞桉桉树精油的质量比为2-3∶2-3∶1。5.权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹爱智，娄倩倩，籍立民，
申请(专利权)人：山东龙昌动物保健品有限公司，
类型：发明
国别省市：