EB病毒抗原表位及其应用制造技术

本发明专利技术提供了EB病毒抗原表位及其应用，所述抗原表位包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:1～6具有80％以上同一性、且具有相同或相似EB病毒抗原表位功能的氨基酸序列。本发明专利技术SEQ ID NO:1～6所示的EB病毒抗原表位免疫原性强，通过腺相关病毒载体转染入树突细胞，抗原基因在树突细胞中表达，通过直接或交叉提呈的途径将抗原蛋白提呈至T细胞，从而诱导出能够特异性杀伤EB病毒的杀伤性T细胞，在EB抗原阳性疾病的治疗领域具有重要意义。疗领域具有重要意义。疗领域具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
EB病毒抗原表位及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程
和生物工程
，涉及EB病毒抗原表位及其应用，尤其涉及EB病毒抗原表位及其在制备EB病毒阳性淋巴瘤治疗药物中的应用。

技术介绍

[0002]最近几年，免疫治疗逐渐进入人们的视野，基于传统的和新兴的免疫学理论的研究成果也逐步向临床应用转化，其中通过人工诱导在体外分化获得的免疫细胞具有广泛的杀伤作用，已经作为辅助治疗手段或部分适应症病人的主要治疗手段应用于临床。
[0003]腺相关病毒(Adeno-associated virus，AAV)作为基因治疗的载体，在治疗B型血友病(Hemophilia B)、假肥大性肌营养不良(DMD)等基因缺陷病方面取得了令人振奋的结果。AAV是一种小病毒，能够高效感染人类和其他灵长类动物，由于在人体中引起的免疫反应弱，已经作为一种高效的转基因载体广泛应用于基础研究和临床研究。AAV既能够感染有分裂能力的细胞又能够感染没有分裂能力的细胞，并且相较于慢病毒(Lentivirus)和逆转录病毒(Retrovirus)，AAV对宿主染色体的插入概率低，安全性更高。AAV的包装系统包括主质粒和包装质粒，其中，主质粒包含AAV包装时最重要的DNA元件ITR序列、启动子序列和目标基因序列，包装质粒包括cap和rep表达基因和其他辅助蛋白的表达基因。目前，包装AAV最常用的细胞为293细胞系，包括HEK293、HEK293T和HEK293F等，包装效率达109/μL。研究发现，AAV的某些亚型对单核细胞以及单核细胞分化而来的树突细胞具有较好的感染能力。
[0004]EBV(Epstein-Barr virus)是一种常见的人易感病毒，嗜淋巴细胞，属于γ-DNA疱疹病毒。EBV在人群中分布广泛，多或在幼年感染并终身携带，流行病学研究发现，有超过90％的人外周血抗EBV抗体阳性。目前的研究发现，霍奇金(Hodgkin
’
s)淋巴瘤和弥漫大B(Burkitt
’
s)淋巴瘤都与EBV感染有关。同时，B细胞和上皮细胞都是EBV的主要靶细胞。EBV感染B细胞主要通过结合B细胞膜表面的gp350和CD21进行，EBV感染B细胞后表达的蛋白主要包括EBNA1、EBNA3A、EBNA3B、EBNA3C、LMP-1、LMP-2A、LMP-2B等。EBV表达的蛋白功能和分布具有以下特点：LMP-1和LMP-2属于跨膜蛋白，通常表达于B淋巴细胞膜表面，EBNA1、2、3属于核蛋白，一般与DNA复制和转录以及病毒包装有关。EBV感染B细胞后通过表达一系列蛋白，刺激B淋巴细胞的增生和转化。另外，EBV的感染细胞不仅包括外周血B淋巴细胞，还包括骨髓细胞，已经有研究发现，EBV阳性的病人在完成骨髓移植后，B淋巴细胞呈EBV阴性。
[0005]临床样本检测结果发现，EBV与淋巴瘤具有相关性，尤其与霍奇金淋巴瘤具有显著的相关性。对于弥漫大B淋巴瘤，有10％左右的患者呈EBV阳性，并且老年人居多。临床统计发现，EBV阳性的淋巴瘤，相较于EBV阴性的淋巴瘤，呈现出高龄化和恶性化的趋势。非霍奇金淋巴瘤，如T细胞淋巴瘤和自然杀伤细胞淋巴瘤，都有EBV阳性的病人，在T细胞淋巴瘤中，EBV的感染往往集中于淋巴结，并且为继发感染，即病人在出现淋巴瘤之前，已经感染并携带有EBV，当病人出现T细胞淋巴瘤时，潜伏的EBV病毒发生扩增扩散进而感染淋巴结，加剧了淋巴瘤的恶化程度，导致病人的生存期中位数只有短短数月。
[0006]目前，EBV阳性淋巴瘤病人采用抗病毒治疗联合放化疗的治疗方案，同时施加抗
CD70的单抗药物，原因在于CD70高表达于EBV感染的细胞表面，抗CD70抗体可以有效激活EBV阳性淋巴细胞的杀伤作用。丁酸盐联合放化疗对于降低或消除肿瘤的生长也具有一定的作用。总之，EBV阳性是淋巴瘤不良预后的独立因素，将EBV作为抗原，诱导T细胞发挥杀伤作用是目前的研究热点。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供了EB病毒抗原表位及其应用，所述EB病毒抗原表位通过腺相关病毒载体转染入树突细胞，构建的树突细胞疫苗分化成为抗原提呈细胞能够有效诱导靶向EB病毒抗原的杀伤性T细胞的产生，在EB抗原阳性疾病的治疗领域具有重要意义。
[0008]为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种EB病毒抗原表位，所述抗原表位包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:1～6具有80％以上同一性、且具有相同或相似EB病毒抗原表位功能的氨基酸序列；
[0010]SEQ ID NO:1：
[0011]MEHDLERGPPGPRRPPRGPPLSSSLGLALLLLLLALLFWLYIVMSDWTGGALLVLYSFALMLIIIILIIFIFRRDLLCPLGALCILLLMITLLLIALWNLHGQALYLGIVLFIFGCLLVLGLWIYLLEILWRLGATIWQLLAFFLAFFLDLILLIIALYLQQNWWTLLVDLLWLLLFLAILIWMYYHGQRHSDEHHHDDSLPHPQQATDDSGHESDSNSNEGRHHLLVSGAGDGPPLCSQNLGAPGGGPDNGPQDPDNTDDNGPQDPDNTDDNGPHDPLPQDPDNTDDNGPQDPDNTDDNGPHDPLPHSPSDSAGNDGGPPQLTEEVENKGGDQGPPLMTDGGGGHSHDSGHGGGDPHLPTLLLGSSGSGGDDDDPHGPVQLSYYDLX；
[0012]SEQ ID NO:2：
[0013]MSMNPVCLPVIVAPYLFWLAAIAASCFTASVSTVVTATGLALSLLLLAAVASSYAAAQRKLLTPVTVLTAVVTFFAICLTWRIEDPPFNSLLFALLAAAGGLQGIYVLVMLVLLILAYRRRWRRLTVCGGIMFLACVLVLIVDAVLQLSPLLGAVTVVSMTLLLLAFVLWLSSPGGLGTLGAALLTLAAALALLASLILGTLNLTTMFLLMLLWTLVVLLICSSCSSCPLSKILLARLFLYALALLLLASALIAGGSILQTNFKSLSSTEFIPNLFCMLLLIVAGILFILAILTEWGSGNRTYGPVFMCLGGLLTMVAGAVWLTVMSNTLLSAWILTAGFLIFLIGFALFGVIRCCRYCCYYCLTL；
[0014]SEQ ID NO:3：
[0015]MEPDVPPGAIEQGPADDPGEGPSTGPRGQGDGGRRKKGGWFGKHRGQGGSNPKFENIAEGLRALLARSHVERTTDEGTWVAGVFVYGGSKTSLYNLRRGTALAIPQ本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.EB病毒抗原表位，其特征在于，所述抗原表位包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:1～6具有80％以上同一性、且具有相同或相似EB病毒抗原表位功能的氨基酸序列。2.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子包括权利要求1所述的抗原表位的编码基因，或包括与权利要求1所述的抗原表位具有相同或相似EB病毒抗原表位功能的蛋白的编码基因；优选地，所述核酸分子包括SEQ ID NO:7～12所示的核酸序列和/或SEQ ID NO:7～12的互补序列。3.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体为含有权利要求2所述的核酸分子的腺相关病毒载体；优选地，所述腺相关病毒载体包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9或AAV10中的任意一种，优选为AAV2、AAV2/YF3或AAV6中的任意一种。4.一种腺相关病毒，其特征在于，所述腺相关病毒为转染有权利要求3所述的表达载体和辅助质粒的哺乳细胞。5.一种权利要求4所述的腺相关病毒的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)将权利要求3所述的表达载体与辅助质粒和转染试剂共转染哺乳细胞，培养一段时间后进行细胞裂解；(2)将细胞裂解液加入氯化铯溶液中进行超速离心，收集含有腺相关病毒的氯化铯溶液；(3)将含有腺相关病毒的氯化铯溶液进行透析处理...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵文威，明东，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：