一种魁蚶免疫调节和抗肿瘤多糖及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种魁蚶多糖及其制备方法和用途，本发明专利技术提供的一种魁蚶多糖JNY2PW，其特征在于，所述多糖含量为90-95wt％，其单糖组成为葡萄糖，该多糖的重均分子量为7.0

【技术实现步骤摘要】
一种魁蚶免疫调节和抗肿瘤多糖及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于医药及保健食品
，具体涉及一种魁蚶多糖及其制备方法和用途。

技术介绍

[0002]生物体内活性物质的研究是研制功能药物、保健食品和生物制品的基本前提。多糖作为主要活性物质之一，是一种由10个以上的单糖通过脱水缩合形成糖苷键聚合而成的高分子糖链。多糖被发现参与许多生物学过程，如细胞之间通讯，胚胎发育，细菌或病毒感染以及体液免疫和细胞免疫。近年来，对多糖的研究涉及多个领域如临床医药、生物燃料、化妆品、营养保健品。多糖的多种生物学功能活性及多糖资源的开发与利用成为人们近代研究的热点。
[0003]我国是海洋贝类养殖和加工大国,海洋贝类中,扇贝、鲍鱼、牡蛎、魁蚶等是“药食同源”的海之珍品。海洋贝类多糖是广泛存在于海洋贝类体内的一种生物活性物质,海洋环境的特殊性赋予海洋多糖不同于陆地多糖的独特的合成途径,使其具有新颖的结构和功能。研究表明，海洋贝类多糖具有抗衰老、抗病毒、抗肿瘤、调节免疫、治疗糖尿病等多种生物活性。海洋贝类多糖成分复杂,其单糖组成有葡萄糖、氨基葡萄糖、半乳糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖、甘露糖等,因其成分复杂,结构多变,导致其生物学活性存在差异。
[0004]魁蚶(Arca inflata Reeve)属于软体动物门，瓣鳃纲，蚶目，蚶科，是我国资源丰富的海产贝类之一。魁蚶个大体肥，肉质鲜美，古书中记载魁蚶有“令人能食、益血色、消血块和化痰积”之功效，营养价值和经济价值很高，是我国及亚洲沿海地区重要的经济贝类之一。通过查阅相关文献资料发现，国内外学者对魁蚶中的蛋白类成分进行了一些研究，从魁蚶中表征和表达了一种具有抗菌活性和免疫调节活性的多肽，从魁蚶中发现了两种具有抗肿瘤活性的多肽。而对魁蚶中多糖及其生物活性的研究较少，仅对魁蚶中存在葡糖氨基葡聚糖进行了报道，但对其连接方式，分子量范围和药理活性未作深入研究。故魁蚶多糖将高价值利用魁蚶这一海洋生物资源，扩大多糖结构资源的同时具有重大经济意义，为合理、高效利用海洋资源提供理论依据。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供魁蚶中多糖的提取方法。
[0006]本专利技术的另一目的在于提供新发现的魁蚶多糖。
[0007]本专利技术的再一目的在于提供上述魁蚶多糖在制备抗肿瘤、免疫调节药物或特医食品或功能食品中的应用。
[0008]本专利技术所采取的技术方案是：
[0009]一种魁蚶中多糖的提取方法，该方法包括以下操作步骤：
[0010]1)前处理：将新鲜魁蚶剥壳取斧足，用水清洗干净；
[0011]2)缓冲液提取：将清洗好的魁蚶斧足加入PBS缓冲液中，使用高速组织匀浆机匀浆
处理，匀浆液置于冰上使用超声破碎仪破碎提取；离心后收集提取液。
[0012]3)盐析：将提取液浓缩后，加入硫酸铵使硫酸铵体积浓度为a％，静置，收集上清液；再向上清液中加入硫酸铵使硫酸铵体积浓度为b％，静置，收集沉淀，即得粗多糖；其中30＜a≤70＜b≤100。
[0013]4)纯化：对上述粗多糖进行纯化，即得魁蚶多糖。
[0014]进一步的，步骤2)中所述缓冲液提取的具体操作为用3～10倍体积的30-100mM PBS缓冲液对魁蚶斧足进行低温匀浆、低温超声破碎提取，匀浆时间为30～60s，提取时间20～60min，匀浆和超声破碎温度为4℃。
[0015]进一步的，步骤3)中所有所述浓缩为-40～-80℃减压冷冻浓缩，所有所述静置的时间为10～28h。
[0016]进一步的，步骤3)中30＜a≤70，70＜b≤100。
[0017]进一步的，将步骤4)中盐析后的粗多糖再进行阴离子交换柱层析，用含梯度浓度(0～1M)氯化钠的30mM PBS进行洗脱，采用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分，浓缩，冷冻干燥；然后用双蒸水溶解，离心，取上清液进行分子筛凝胶柱层析，用双蒸水进行洗脱，采用苯酚-硫酸法跟踪洗脱曲线，根据洗脱曲线收集糖部分，浓缩，冷冻干燥后获得魁蚶多糖JNY2PW。
[0018]进一步的，上述离子交换柱为DEAE离子交换柱。
[0019]进一步的，上述分子筛凝胶层析选用SephadexG100分子筛色谱柱。
[0020]一种魁蚶多糖JNY2PW，该多糖由葡萄糖组成，重均分子量为5.25
×
107Da，由
→
4)-α-D-Glcp-(1
→
和
→
4,6)-α-D-Glcp-(1
→
构成主链，支链末端由-α-D-Glcp-(1
→
构成，其结构为：
[0021][0022]魁蚶多糖JNY2PW，该多糖的提取方法为上述所述的提取方法。
[0023]魁蚶多糖JNY2PW在制备增强免疫力的药物或特医食品或功能食品中的应用。
[0024]魁蚶多糖JNY2PW在制备抗肿瘤药物或特医食品或功能食品中的应用。
[0025]本专利技术的有益效果是：
[0026]1.与传统水提醇沉法和Sevag除蛋白法提取多糖相比，本专利技术采用低温缓冲液提取，无需使用有毒的有机试剂，硫酸铵浓度由低到高进行分级盐析，对魁蚶多糖进行初步分离，同时高浓度硫酸铵能将极性大、水溶性好的多糖与极性小、水溶性差的脂质、疏水蛋白等低极性物质分离，使所提取的粗多糖的糖含量更高。且本制备工艺简单，无需使用有毒的
有机试剂如正丁醇，氯仿等，仅使用价格低廉的无机盐溶液处理，操作方便，无后续有毒有机试剂残留风险，适合大规模生产。
[0027]2.本专利技术利用离子交换层析和分子筛凝胶柱层析方法纯化魁蚶多糖，首次制备出一种魁蚶精多糖JNY2PW，并且对其理化性质、分子量、单糖组成等进行了系统的分析鉴定，并成功得出了该魁蚶多糖的特征结构。本专利技术提供了魁蚶中粗多糖、精多糖的制备方法及魁蚶多糖在调节免疫和抗肿瘤方面的活性研究，为魁蚶多糖在医药、保健品等领域的应用提供依据。
[0028]3.本专利技术中魁蚶多糖JNY2PW具有显著的免疫调节和抗肿瘤活性。经体外免疫活性检测显示，魁蚶多糖JNY2PW具有增强免疫作用。其能刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬功能，还能刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6、NO等细胞因子。上述制备方法制得的魁蚶多糖JNY2PW体内抗肿瘤活性试验显示，魁蚶多糖JNY2PW可明显抑制小鼠乳腺癌细胞增殖，具有良好的抗癌活性。结果显示用100mg/kg浓度的魁蚶多糖JNY2PW口服给药乳腺癌细胞(4T1)移植瘤小鼠14天后，小鼠瘤体积明显减小，抗癌效果与阳性药多柔比星相似，但对肝肾无毒副作用。该多糖显示出良好的抗肿瘤作用且低毒性。以往研究中，β-葡聚糖的免疫增强和抗肿瘤活性研究较多，对α-葡聚糖的免疫增强和抗肿瘤活性研究较少，本专利技术公开了一种魁蚶来源的葡聚多糖JNY2PW，其为一种α-葡聚糖，具有良好的免疫增强和抗肿瘤生物活性。
[0029]该方法制备的多糖，因其来源于天然海洋贝类，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种魁蚶多糖，所述多糖含量为90-95wt％。该多糖的单糖组成为葡萄糖。2.根据权利要求1所述的多糖，其特征在于，所述多糖的重均分子量为7.0
×
10
6-8.0
×
107Da，优选为5.25
×
107Da。3.根据权利要求1或2所述的多糖，其特征在于，该多糖的制备方法包括如下步骤：(1)将魁蚶去壳洗净后用30mM PBS缓冲液匀浆、超声提取，采用100％硫酸铵盐析，收集沉淀糖类部分；(2)将步骤(1)得到的糖类部分复溶于30mM PBS缓冲液，采用5000截留分子量的透析袋用水透...

【专利技术属性】
技术研发人员：于荣敏，李春磊，朱建华，宋丽艳，
申请(专利权)人：于荣敏，
类型：发明
国别省市：