一种用于同源重组修复缺陷检测的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于同源重组修复缺陷检测的试剂盒，利用多探针靶向捕获技术结合二代测序技术，用于富集和检测25个基因的变异情况，25个基因包括ARID1A、BRCA1、BRCA2、POLG、ATR、BRIP1、MSH2、RAD51C、ATM、MLH1、MRE11A、RAD50、ATRX、CHECK1、MUTYH、RAD51D、BAP1、CHECK2、NBN、SMARCB1、BARD1、FANCE、PALB2、WRN、BLM。BLM。

【技术实现步骤摘要】
一种用于同源重组修复缺陷检测的试剂盒


[0001]本专利技术涉及分子生物学和医学领域，具体涉及一种用于重组修复缺陷检测的试剂盒。

技术介绍

[0002]癌症的发展需要一系列的病变阶段，它的发展过程由基因变异所主导，包括DNA、RNA、蛋白质等多个层面的病变，其中DNA的改变是癌症发生的重要因素，包括单核苷酸变异，小的插入和缺失，大的结构性变异等常见的变异形式。随着对癌症的不断深入，同源重组缺失（HRD）机制在不同癌种当中的重要性不断被发现。超过50%的高级别浆液性卵巢癌患者存在明显的DNA修复基因缺失，20-25%前列腺癌存在BRCA1/BRCA2或其它同源重组通路中涉及的基因失活突变。DNA在复制过程中，正常细胞通过同源重组机制修复DNA双链断裂，从而保持正常的生长周期，而癌症细胞中由于同源重组基因发生变异，从而发生同源重组缺失，导致DNA修复发生损伤，从而引起基因不平衡和肿瘤的无限增长。例如，BRCA1或者BRCA2突变的细胞，缺少野生基因型，从而导致DNA同源重组修复缺失，导致基因发生变异，从而导致癌症发生。
[0003]新一代测序技术的发展，为现代基因组学的研究打开了新的局面，然而基因组测序的成本和分析的复杂程度还是让研究人员倍感困难，目标序列捕获技术的出现，缓解了这些问题。目标序列捕获测序是针对已知的特定基因组区域设计探针后进行的测序。外显子组捕获测序则是其中的一个特例，它是专门针对基因组中全部外显子区域的研究。多基因全外显子测序是利用序列捕获技术将多基因全外显子区域DNA捕捉并富集后进行高通量测序的基因组分析方法。由于其具有对常见和罕见变异高灵敏度，能发现外显子区绝大部分疾病相关变异以及仅需要对约1%的基因组进行测序等优点，促使多基因全外显子测序成为如孟德尔疾病等疾病的致病基因最有效的策略，也被运用于复杂疾病易感基因的研究和临床诊断中。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术中存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于同源重组修复缺陷检测的试剂盒及其用途。
[0005]为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：一种用于同源重组修复缺陷检测的试剂盒，包含对25个基因进行的深度测序，包括如下基因：ARID1A、BRCA1、BRCA2、POLG、ATR、BRIP1、MSH2、RAD51C、ATM、MLH1、MRE11A、RAD50、ATRX、CHECK1、MUTYH、RAD51D、BAP1、CHECK2、NBN、SMARCB1、BARD1、FANCE、PALB2、WRN、BLM；该试剂盒包含建库试剂盒、杂交试剂盒、探针试剂盒和接头盒。
[0006]作为本专利技术进一步的方案：所述试剂盒的组分和含量包括建库试剂盒1盒、杂交试剂盒1盒、探针试剂盒1盒、接头试剂盒1盒，所述检测试剂盒供16人份检测应用，试剂盒的保存温度为-25℃~-15℃。
[0007]作为本专利技术进一步的方案：所述的建库试剂盒可进行DNA的片段化末端修复、连接反应和扩增富集。
[0008]作为本专利技术进一步的方案：所述的建库试剂盒包括1管末端修复反应液300μl、1管连接反应液500μl、1管连接酶100μl、1管扩增反应液1000μl、1管扩增引物200μl。
[0009]作为本专利技术进一步的方案：所述的杂交试剂盒可进行杂交捕获和杂交后清洗 。
[0010]作为本专利技术进一步的方案：所述的杂交试剂盒包括1管封闭液40μl、1管Cot-1 DNA 100μl、1管杂交缓冲液170μl、1管杂交增强液54μl、1瓶2
×
磁珠清洗液5ml、1管10
×
清洗缓冲液1 600μl、1管10
×
清洗缓冲液2 400μl、1管10
×
清洗缓冲液3 400μl、1管10
×
清洗缓冲液4 800μl。
[0011]作为本专利技术进一步的方案：所述的探针试剂盒包括16管25基因的探针，每管4μl。
[0012]作为本专利技术进一步的方案：所述的接头盒包括16个index接头，每个接头1管，每管4μl。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术设计合理，结构简单，运用捕获探针技术实现了同时检测25个基因的目的；本专利技术将同源重组修复缺陷检测相关的25个基因整合在一个试剂盒内，使用更方便而且成本更低。
具体实施方式
[0014]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0015]一种用于同源重组修复缺陷检测的试剂盒，包含建库试剂盒、杂交试剂盒、探针试剂盒和接头试剂盒。
[0016]建库试剂盒，包括包装盒体，建库试剂盒衬垫和试剂管，所述建库试剂盒衬垫设置在建库试剂盒包装盒体的内部并且衬垫上设有容器孔，试剂管包括1管末端修复反应液300μl、1管连接反应液500μl、1管连接酶100μl、1管扩增反应液1000μl、1管扩增引物200μl。
[0017]杂交试剂盒，包括包装盒体、杂交试剂盒衬垫、试剂管和试剂瓶，所述的杂交试剂盒衬垫设置在杂交试剂盒包装盒体的内部并且衬垫上设有容器孔，试剂管包括1管封闭液40μl、1管Cot-1 DNA 100μl、1管杂交缓冲液170μl、1管杂交增强液54μl、1管10
×
清洗缓冲液1 600μl、1管10
×
清洗缓冲液2 400μl、1管10
×
清洗缓冲液3 400μl、1管10
×
清洗缓冲液4 800μl，试剂瓶包括1瓶2
×
磁珠清洗液5ml。
[0018]探针试剂盒，包括包装盒体、探针试剂盒衬垫和试剂管，所述探针试剂盒衬垫设置在探针试剂盒包装盒体的内部并且衬垫上设有容器孔，试剂管包括16管25基因的探针，每管4μl。
[0019]接头试剂盒，包括包装盒体、接头试剂盒衬垫和试剂管，所述接头试剂盒衬垫设置在接头试剂盒包装盒体的内部并且衬垫上设有容器孔，试剂管包括16个index接头，每个接头1管，每管4μl。
[0020]本试剂盒中所述的特异性接头是指可以通过反应加在目的片段两端的特异性序列标签。试剂盒中，接头有16种，不同的样本添加不同的特异性序列标签。特异性序列标签可以使用二代测序测出，用以区分不同的样本。
[0021]本专利技术试剂盒的组分和含量包括：建库试剂盒1盒：1管300μl/管的末端修复反应液，1管500μl/管的连接反应液，1管100μl/管的连接酶，1管1000μl/管的扩增反应液，1管200μl/管的扩增引物。
[0022]杂交试剂盒1盒：1管40μl/管的封闭液，1管100μl/管的Cot-1DNA，1管170μl/管的杂交缓冲液，1管54μl/管的杂交增强液，1瓶5ml/瓶的2
×
磁珠清洗液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于同源重组修复缺陷检测的试剂盒，其特征在于：对25个基因进行的深度测序，包括如下基因：ARID1A、BRCA1、BRCA2、POLG、ATR、BRIP1、MSH2、RAD51C、ATM、MLH1、MRE11A、RAD50、ATRX、CHECK1、MUTYH、RAD51D、BAP1、CHECK2、NBN、SMARCB1、BARD1、FANCE、PALB2、WRN、BLM；该试剂盒包含建库试剂盒、杂交试剂盒、探针试剂盒和接头盒。2.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的组分和含量包括建库试剂盒1盒、杂交试剂盒1盒、探针试剂盒1盒、接头试剂盒1盒，所述检测试剂盒供16人份检测应用，试剂盒的保存温度为-25℃~-15℃。3.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于：所述建库试剂盒包含可进行DNA的片段化末端修复、连接反应和扩增富集。4.根据权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于所述建库试剂盒的组分和含量包括1管300μl/管的末端修复反应液、1管500μl/管的连接反应液、1管100μl/管的连接酶、1管1000μl/管的扩增反应液、1管200μl/管的扩...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘赟，
申请(专利权)人：宁波爱她基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：