本发明专利技术公开了一种定量测定血液中阿比特龙的方法及应用，采用直接蛋白沉淀法，经离心后进样测定，通过阿比特龙的标准曲线得出血浆中阿比特龙的浓度或含量。本发明专利技术提供的定量测定血浆中阿比特龙的方法及应用，利于高通量处理样本，无毒害，操作安全；具有良好的特异性、灵敏度、精密度和准确度，血浆基质不影响分析结果，样品消耗量少，前处理过程简单、经济、快速，分析时间短，分析效率高，提取回收率高，可用于阿比特龙的新制剂开发、治疗药物监测、药物相互作用研究等，具有极高的应用价值。具有极高的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
一种定量测定血液中阿比特龙的方法及应用
[0001]本专利技术涉及化学药物分析
，更具体的说是涉及一种定量测定血液中阿比特龙的方法及应用。
技术介绍
[0002]阿比特龙(ABTL)为CYP17抑制剂，临床上以醋酸阿比特龙(阿比特龙乙酰酯)，且与泼尼松联用，主要治疗既往接受含多烯紫杉醇化疗转移去势难治性前列腺癌患者。目前，阿比特龙的不良反应包括：心血管疾病史高血压、低血钾症、由于盐皮质激素过量液体潴留，肾上腺素皮质功能不全，肝毒性等。此外食物对醋酸阿比特龙的吸收有显著影响；且阿比特龙在肝损患者中应根据阿比特龙暴露量进行个体化给药，同时阿比特龙血浆蛋白结合率高，可能会置换其它蛋白结合药物。
[0003]目前，国内关于阿比特龙在犬血浆中检测方法的报道较少，多数集中于临床样品检测。由于临床样品浓度较低，报道的方法多采用液液萃取法以浓缩样品，和/或使用梯度洗脱较长的分析时间，以追求极致的灵敏度。但是液液萃取法前处理工序长，毒性相对较大，成本较高。
[0004]犬作为制剂开发的主要试验动物种属，常常用于阿比特龙的制剂开发；基于以上进行剂量调整、制剂研发、血浆蛋白结合率等相关药物，及药物间相互作用等方面的研究；因此，建立一种高效、快速、准确、灵敏度适宜的犬血浆中阿比特龙浓度检测方法成为了本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现思路
[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种定量测定血液中阿比特龙的方法及应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种定量测定血液中阿比特龙的方法，具体包括：
[0008]S1：样品前处理
[0009]取血液样品，并在血液样品中加入内标工作液，涡旋振荡后离心，取上清液进样至液质联用仪中；
[0010]S2：测定阿比特龙的含量
[0011]分别根据设定的色谱条件和质谱条件测定所述上清液，分别得到色谱图和质谱图，并依据阿比特龙的标准曲线得出样品中阿比特龙的含量。
[0012]上述技术方案的有益效果：通过样品的前处理方法以及后续的测定方法，能够实现样品中阿比特龙高效、快速、准确的测定，而且检测灵敏度高，检测成本低；
[0013]进一步，相比于液液萃取法、固相萃取法等方法，直接蛋白沉淀的方法使用的试剂和耗材廉价，同时操作步骤简单方便，且降低人工成本，因此更加经济快速。
[0014]优选的，所述血液样品为血浆或者血清，且所述血液样品与所述内标工作液的体积比为1：10。
[0015]优选的，所述涡旋振荡时间5min；所述离心时间10min。
[0016]优选的，所述内标工作液为阿比特龙D4乙腈溶液，具体配置过程包括：
[0017]S10：内标储备液：阿比特龙D4固体以二甲亚砜溶解或甲醇并定容，获得内标储备液；
[0018]S11：内标工作液：取内标储备液，以乙腈为溶剂进行逐级稀释得到内标工作液。
[0019]进一步，通过逐级稀释得到10ng/mL的所述内标工作液。
[0020]优选的，步骤S2中所述色谱条件为，流动相A：0.5％甲酸-10mM甲酸铵水溶液；流动相B：乙腈；色谱柱：AgilentZORBAX Eclipse Plus-C18，规格2.1
×
50mm，5μm；流速：0.1～1.0mL/min；柱温：10～40℃；等度洗脱比例：40～80％；自动进样温度：0～30℃；进样量：0.50～20.0μL；分析时间：1.00～10.0min。
[0021]优选的，步骤S2中所述质谱条件为，离子化模式：电喷雾离子化，正离子模式；阿比特龙的离子对：350.3
→
156.1；阿比特龙D4的离子对：354.2
→
160.1；离子源参数：GS1＝10～60psig，GS2＝10～60psig，CAD＝1～20psig，CUR＝10～50psig，TEM＝100～550℃，IS＝2000～5500V，EP＝1～15V，CXP＝1～16V。
[0022]上述技术方案的有益效果至少包括：上述色谱和质谱参数对阿比特龙的检测更具针对性，能够实现快速、经济的对阿比特龙含量进行检测，在针对犬进行阿比特龙方面的研究提供更有价值的数据。
[0023]优选的，步骤S2中所述阿比特龙的标准曲线通过以下步骤获得：
[0024]S21：通过阿比特龙标准曲线工作液制备阿比特龙标准曲线样品，按照步骤S1进样，分别记录分析物和内标峰面积，计算分析物和内标峰面积比值；
[0025]S22：对阿比特龙的理论浓度进行线性回归，得到阿比特龙的标准曲线；
[0026]进一步，所述步骤S21具体包括以下操作：
[0027]先称取阿比特龙，以二甲亚砜溶解并定容，配制成阿比特龙储备液；再以甲醇为溶剂，将阿比特龙储备液逐级稀释即得到阿比特龙标准曲线工作液；
[0028]以空白犬血浆样品为空白基质，通过阿比特龙标准曲线工作液制备不同浓度阿比特龙标准曲线样品，按照步骤S1进样，分别记录分析物和内标峰面积，计算分析物和内标峰面积比值。
[0029]进一步，逐级稀释得到阿比特龙标准曲线工作液浓度梯度在20～40000ng/mL之间；
[0030]进一步，阿比特龙标准曲线样品浓度梯度在1～2000ng/mL；
[0031]优选的，还包括步骤S3：质控样品的配制及测定
[0032]先称取阿比特龙，以二甲亚砜溶解并定容，配制成阿比特龙储备液；再以甲醇为溶剂，将阿比特龙储备液逐级稀释即得到质控工作液；
[0033]以空白犬血浆样品为空白基质，通过质控工作液制备不同浓度质控样品，按照步骤S1进样，以质控样品确定分析数据的可靠性。
[0034]进一步，配制成所述阿比特龙储备液的浓度约1mg/mL；
[0035]进一步，逐级稀释得到所述质控工作液浓度梯度在20～32000ng/mL；
[0036]进一步，所述质控样品的不同浓度为1.00ng/mL、2.50ng/mL、80.0ng/mL、800ng/mL和1600ng/mL；
[0037]进一步，所述的一种定量测定血液中阿比特龙的方法在阿比特龙临床前研究中的应用，以及在阿比特龙制剂开发中的应用。
[0038]由上述技术方案可知，本专利技术提供的一种定量测定血液中阿比特龙的方法，测定过程中不仅使用样本量少，灵敏度高；而且采用蛋白直接沉淀法，前处理简便、经济、快速，分析时间短，无残留，无基质干扰，适合高通量、能够快速检测犬血浆中微量阿比特龙的浓度或含量，为阿比特龙新制剂开发、阿比特龙的治疗药物监测、阿比特龙的药物间的相互作用等方面的研究提供有力的技术支持。
附图说明
[0039]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种定量测定血液中阿比特龙的方法，其特征在于，具体包括：S1：样品前处理取血液样品，并在血液样品中加入内标工作液，涡旋振荡后离心，取上清液进样至液质联用仪中；且所述血液样品为血浆或血清，且所述血液样品与所述内标工作液的体积比为1：10；所述内标工作液具体配置过程包括：S10：内标储备液：阿比特龙D4固体以二甲亚砜或甲醇溶解并定容，获得内标储备液；S11：内标工作液：取内标储备液，以乙腈为溶剂进行逐级稀释得到内标工作液。S2：测定阿比特龙的含量分别根据设定的色谱条件和质谱条件测定所述上清液，得到色谱图和质谱图，并依据阿比特龙的标准曲线得出血液样品中阿比特龙的含量。2.根据权利要求1所述的一种定量测定血液中阿比特龙的方法，其特征在于，所述涡旋振荡时间5min；离心时间10min。3.根据权利要求1所述的一种定量测定血液中阿比特龙的方法，其特征在于，步骤S2中所述色谱条件为：流动相A：0.5％甲酸-10mM甲酸铵水溶液；流动相B：乙腈；色谱柱：AgilentZORBAX Eclipse Plus-C18，规格2.1
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50mm，5μm；流速：0.1～1.0mL/min；柱温：10～40℃；等度洗脱比例：40～80％；自动进样温度：0～30℃；进样量：0.50～20.0μL；分析时间：1.00～10.0min。4.根据权利要求1所述的一种定量测定血液中阿比特龙的方法，其特征在于，步骤S2中所述质谱条件为：离子化模式：电喷雾离子化，正离子模式；阿比特龙的离子对：350.3
→
156.1；阿比特龙D4的离子对：354.2
→
...
【专利技术属性】
技术研发人员：汤泓，山莽挺，祝建平，张小健，鞠轶，廖涛梅，
申请(专利权)人：南京广祺医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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