一种重组乳铁蛋白的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种重组乳铁蛋白的制备方法及应用，包括以下步骤：S1：将奶山羊的羊乳汁放入离心机，去除上层脂肪和下层沉淀，取中间层清液，用HCL将其PH调至4.5

【技术实现步骤摘要】
一种重组乳铁蛋白的制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及乳铁蛋白生产
，特别涉及一种重组乳铁蛋白的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]乳铁蛋白是一种铁结合性糖蛋白，因其生物活性功能广泛，已被应用于医药开发、食品加工、保健品生产等领域。目前，国内外市场上销售的乳铁蛋白及其相关产品主要从牛乳中分离纯化所得。因其来源的限制，天然乳铁蛋白的产量己经无法满足人们日益增长的需求。因此，利用转基因技术生产重组乳铁蛋白作为天然乳铁蛋白的替代品，己经成为研宄和开发乳铁蛋白的主要途径。但目前市场上销售的乳铁蛋白主要从牛乳中提取，而面对庞大的消费市场，单从牛乳中分离纯化乳铁蛋白已无法满足市场需求。研究表明，重组乳铁蛋白表达产物可以从转基因羊乳汁中提取，提取获得的和浓缩的转基因乳清抑菌试验显示均有抑菌活性。因此，如何高效、低成本的从转基因羊乳汁中提取重组乳铁蛋白成为亟待解决的问题。

技术实现思路

[0003]本专利技术为了解决现有技术的问题，提供了一种能够降低生产成本，提升生产效率的重组乳铁蛋白的制备方法。
[0004]具体技术方案如下：一种重组乳铁蛋白的制备方法，包括以下步骤：
[0005]S1：将奶山羊的羊乳汁放入离心机，去除上层脂肪和下层沉淀，取中间层清液，用的HCL将其PH调至4.5-4.7左右，再放入离心机，除去酪蛋白沉淀，取上层乳清；
[0006]S2：将乳清与缓冲液于容器中混勾，并在磁力搅拌器上边搅拌边缓慢加入硫酸铵固体，至硫酸铵饱和度为80％，用氨水将溶液调至7.0，搅拌后保留沉淀物，并用超纯水将沉淀物溶解；
[0007]S3：将用超纯水溶解后的沉淀物加入到容器，并加入缓冲液，用磁力搅拌器搅拌透析液，并用氯化钡检测透析液中透析出来的硫酸根离子，直至将硫酸铵全部透析出来。
[0008]作为优选方案，步骤S1中，所述离心机温度设定为5℃，转速为9000rpm，PH为4.6。
[0009]作为优选方案，步骤S2中，搅拌时间为30分钟，温度为5℃，搅拌转速为9000rpm。
[0010]作为优选方案，步骤S3中，搅拌的时间为20小时。
[0011]作为优选方案，所述缓冲液为PBS缓冲液。
[0012]作为优选方案，PBS缓冲液包括NaCl和KCl。
[0013]一种基于权利要求1所述的重组乳铁蛋白在婴幼儿奶制品中的应用，所述重组乳铁蛋白有利于铁元素的吸收，降低铁离子对婴幼儿肠道的刺激。
[0014]本专利技术的技术效果：本专利技术的一种重组乳铁蛋白的制备方法能够从奶山羊的乳汁中提取重组乳铁蛋白，扩大了重组乳铁蛋白的提取来源；此外，提取步骤简单、高校，有效降低了重组乳铁蛋白的提取成本。
具体实施方式
[0015]下面，结合实例对本专利技术的实质性特点和优势作进一步的说明，但本专利技术并不局限于所列的实施例。
[0016]本实施例的一种重组乳铁蛋白的制备方法，包括以下步骤：S1：将奶山羊的羊乳汁放入离心机，去除上层脂肪和下层沉淀，取中间层清液，用的HCL将其PH调至4.5-4.7左右，再放入离心机，除去酪蛋白沉淀，取上层乳清；S2：将乳清与缓冲液于容器中混勾，并在磁力搅拌器上边搅拌边缓慢加入硫酸铵固体，至硫酸铵饱和度为80％，用氨水将溶液调至7.0，搅拌后保留沉淀物，并用超纯水将沉淀物溶解。S3：将用超纯水溶解后的沉淀物加入到容器，并加入缓冲液，用磁力搅拌器搅拌透析液，并用氯化钡检测透析液中透析出来的硫酸根离子，直至将硫酸铵全部透析出来。通过上述技术方案，能够从奶山羊中提取重组乳铁蛋白，操作方法简单，成本较低。
[0017]本实施例中，步骤S1中，所述离心机温度设定为5℃，转速为9000rpm，PH为4.6，从而使羊乳汁的脂肪和沉淀能够充分分离。本实施例中，步骤S2中，搅拌时间为30分钟，温度为5℃，搅拌转速为9000rpm，从而能够充分析出沉淀物。本实施例中，步骤S3中，搅拌的时间为20小时。本实施例中，所述缓冲液为PBS缓冲液。本实施例中，PBS缓冲液包括NaCl和KCl。
[0018]一种重组乳铁蛋白在婴幼儿奶制品中的应用，重组乳铁蛋白有利于铁元素的吸收，降低铁离子对婴幼儿肠道的刺激。运铁蛋白在胃内极酸性条件下无法发挥运载铁离子的功能，但乳铁蛋白能在动物肠道中运载铁离子。乳铁蛋白载肠道中可以通过它的N基和C基末端的两个铁结合位点可逆地与铁结合，并能维持铁元素在十二指肠细胞的吸收。铁离子的摄入对肠道有刺激作用，乳铁蛋白结合铁可明显减缓此不良反应。婴儿的胃肠道可将母乳中乳铁蛋白分子完整吸收，肠细胞吸收乳铁蛋白的同时吸收大量的铁，有利于对母乳中铁元素的吸收。由于羊乳中的铁元素的生物效价较高，一方面，由于乳铁蛋白具有广谱抗菌、抗病毒和调节肠道菌群的重要生理功能，可以通过其抗菌作用调节婴幼儿肠道内菌群，为有益菌-双歧杆菌提供优势的环境，促进益生菌生长。乳铁蛋白还可以显著增加其淋巴组织和小肠可变薄层中CD4+和CD8+T细胞及Ig M(+)和IgA(B)B细胞，诱导小肠黏膜细胞产生白细胞介素-18和γ干扰素，提高小肠粘膜的免疫功能。
[0019]本实施例的一种重组乳铁蛋白的制备方法能够从奶山羊的乳汁中提取重组乳铁蛋白，扩大了重组乳铁蛋白的提取来源；此外，提取步骤简单、高校，有效降低了重组乳铁蛋白的提取成本。
[0020]需要指出的是，上述较佳实施例仅为说明本专利技术的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本专利技术的内容并据以实施，并不能以此限制本专利技术的保护范围。凡根据本专利技术精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本专利技术的保护范围之内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组乳铁蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：将奶山羊的羊乳汁放入离心机，去除上层脂肪和下层沉淀，取中间层清液，用HCL将其PH调至4.5-4.7左右，再放入离心机，除去酪蛋白沉淀，取上层乳清；S2：将乳清与缓冲液于容器中混勾，并在磁力搅拌器上边搅拌边缓慢加入硫酸铵固体，至硫酸铵饱和度为80％，用氨水将溶液调至7.0，搅拌后保留沉淀物，并用超纯水将沉淀物溶解；S3：将用超纯水溶解后的沉淀物加入到容器，并加入缓冲液，用磁力搅拌器搅拌透析液，并用氯化钡检测透析液中透析出来的硫酸根离子，直至将硫酸铵全部透析出来。2.根据权利要求1所述的重组乳铁蛋白的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩金志，张寒，陈帅，徐改变，
申请(专利权)人：苏州星资生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：