猪冷冻精液基础稀释液及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种猪冷冻精液基础稀释液，包括葡萄糖、柠檬酸、胆固醇、L

【技术实现步骤摘要】
猪冷冻精液基础稀释液及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于农业生物育种
，具体涉及一种猪冷冻精液稀释液配方。

技术介绍

[0002]过去几十年来由于大量国外猪种的引入和大规模饲养，导致我国地方猪品种数量锐减，而且品种内血统数也在不断减少，遗传多样性降低，使很多地方猪品种濒临灭绝。近年来随着保护地方品种资源的意识提高，开始采取多种措施对地方猪品种进行保护，而对公猪精液进行冷冻保存，则是一种方便有效的保存手段。冷冻精液是生物安全系数更高的精液来源。可在闲时储备，平衡供需。因为鲜精保存时间短，在旺季时供不应求，但在闲时却产能过剩导致闲置浪费。冷冻精液可以把合格的精液全部冻存，把不合格的精液及时清除，提高精液质量，平衡淡旺季的需求，也可以随时进行跨区域调配，平衡不同生产区域的需求，具有便捷运输的优点。也可以节约成本增加成效，降低公畜的饲养存栏量。冻精集成技术可以提高种公畜的利用率接近100 %，大幅减少种公畜的饲养存栏数量，节约场地建设、饲养管理成本等，还可以减少建设用地，减少粪污排放，缓解环保的压力。同样也是保种育种的重要手段。冷冻精液具有可长期保存的特点，可以延长种公畜遗传物质的使用时间，不受种公畜死亡等限制，在保留和恢复精液供应、血统更新、引种等方面均有重要意义，一直是保种育种的重要手段。
[0003]20世纪80年代后期我国大量引进国外品种猪后，为追求高产肉量和短期经济效益，养猪户纷纷转向养殖外来品种猪，地方猪的饲养数量急剧下降。现阶段，猪精液的冷冻制作及保存关键技术研究受到了全球养猪业重视和关注，我国猪冷冻精液的研究虽然在技术上已经取得了一定的突破，但是也有很多研究报道了猪特别是地方猪品种的冷冻精液制作在技术上还有待进一步完善。由于地方猪品种精子的生物学特性，其精液冷冻制作技术要求不完全与商业猪的冷冻精液制作技术相同，主要是地方猪品种的精子在冷冻、解冻过程中更容易受到损伤。
[0004]因此，深入系统地研究猪精液冷冻机理和生产过程的关键技术，探讨影响猪冻精活力及受精能力的因素，进一步改进猪精液冷冻技术及操作方法，已成为猪育种的关键技术问题，尤其是国内地方种猪育种生产中渴望解决的急迫问题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种猪冷冻精液基础稀释液配方及其制备方法，另一目的是提供该配方具体应用，以弥补现有技术的不足。
[0006]为达到上述目的，本专利技术采取的技术方案为：一种猪冷冻精液基础稀释液，包括葡萄糖、柠檬酸、胆固醇、L-脯氨酸、Tris和双蒸馏水。
[0007]进一步的，所述胆固醇优选为猪肝脏来源胆固醇。
[0008]进一步的，所述猪冷冻精液基础稀释液，包括葡萄糖15.98
±
0.5 g/L、柠檬酸
19.67
±
0.5 g/L、胆固醇4.83
±
0.2 g/L、L-脯氨酸3.45
±
0.2 g/L、Tris 35.2
±
0.5 g/L和双蒸馏水 1 L。
[0009]一种猪冷冻精液冻存液中，除上述猪冷冻精液基础稀释液外，还包括以体积分数计，20% 新鲜卵黄、1
×
10
6 IU/L青霉素、1
×
10
6 IU/L链霉素和3%-4%甘油和1%-2% Equex.STM。
[0010]一种猪保鲜精稀释液中，除上述猪冷冻精液基础稀释液外，还包括等渗脱脂牛奶，添加等渗脱脂牛奶的量与猪冷冻精液基础稀释液体积比为1：1，再利用0.22 um的滤菌膜过滤。
[0011]进一步的，所述等渗脱脂牛奶为市面上流通的脱脂牛奶即可。
[0012]上述猪冷冻精液基础稀释液的制备方法为：称取葡萄糖、柠檬酸、Tris，猪肝脏来源胆固醇、 L-脯氨酸，双蒸馏水，将它们放入烧杯内混合，加热，使上述物质完全溶解并降温。
[0013]上述猪冷冻精液冻存液的制备方法包括：首先称取葡萄糖、柠檬酸、Tris，猪肝脏来源胆固醇、 L-脯氨酸，双蒸馏水，将它们放入烧杯内混合，加热，使上述物质完全溶解并降温后，再取该稀释液加入新鲜卵黄、青霉素、链霉素，混匀后降温，静置沉淀存放, 取上清液离心后，去掉离心后稀释液的表面油膜并加入甘油、Equex.STM抗冻剂，即为冻存液。
[0014]进一步的，上述制备方法中，混匀后降温至4℃，静置沉淀存放8 h
ꢀ-
12h, 该步骤能都将蛋黄中固态杂质充分沉降；取上清液3850 rpm
-ꢀ
4000 rpm离心90min后使用5ml移液器吸除表面油性杂质，此步骤能够将蛋黄中油性杂质彻底分离至稀释液的表面。
[0015]上述猪保鲜精稀释液的制备方法为：称取葡萄糖、柠檬酸、Tris，猪肝脏来源胆固醇、 L-脯氨酸、双蒸馏水，放入烧杯内混合，加热至98 ℃，使上述物质完全溶解并降温至35 ℃后与等渗脱脂牛奶体积比1:1混合即制成猪保鲜精稀释液。
[0016]利用上述猪冷冻精液基础稀释液进行猪冷冻精液制备的方法，包括以下步骤：（1）采精：采取猪中段精液并用滤纸过滤；采精的同时进行密度测定，原精密度小于1亿/ml的精液直接淘汰，大于1亿/ml的精液进行稀释调整；（2）稀释：步骤（1）采取的精液与所述猪保鲜精稀释液体积比1：1混合，后于17℃平衡，猪保鲜精稀释液提供充足的能源与营养物质，能最大程度的保持精子活力；（3）离心悬浮：将步骤（2）得到的混合精液稀释液进行离心，弃上清，再往沉淀里加入所述猪冷冻精液冻存液，静置10-15 min，使活力较好的精子上浮，以进一步淘汰活力不好的精子和死精；（4）灌装；（5）冷藏平衡：灌装后的精液放入4 ℃平衡柜内平衡3-4 h，以增加其稳定性，为冷冻做准备；（6）冷冻：平衡结束后，先测活力（≥90%）然后进行冷冻，使用冷冻曲线冷冻。
[0017]进一步的，所述步骤（2）后，还包括分析精子活力：混加稀释液的精液先轻轻混匀后再测活力，活力较差的直接舍弃，以达到运输后精子活力在90%以上的效果。
[0018]进一步的，所述步骤（3）中，离心条件为：转速为1850 rpm，时间为10 min。
[0019]进一步的，所述步骤（6）中使用冷冻曲线冷冻过程，不可过度偏移；所述冷冻曲线为开始温度5℃，-6℃ 200秒，-6℃ 60秒，-100℃ 160秒，-140℃ 80秒，-140℃ 180秒。
[0020]基于上述猪冷冻精液的解冻方法为：将冷冻的精液于37 ℃下水浴20 s，之后孵育10 min，再检测其活力。
[0021]上述猪冷冻精液基础稀释液，以及基于该稀释液配置的冻存液和保鲜精稀释液，能够应用于猪冷冻精液的制备，尤其是应用于中国地方品种猪的冷冻精液制备。
[0022]当然，适用于地方品种猪的精液冷冻技术也适用于进口品种猪及其他品种猪的精液冷冻技术。
[0023]本专利技术的优点和技术效果：本专利技术能有效维持地方品种猪鲜精在长途运输过程中的存活率（存活率可达95%以上本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪冷冻精液基础稀释液，其特征在于，该基础稀释液包括葡萄糖、柠檬酸、胆固醇、L-脯氨酸、Tris和双蒸馏水。2.如权利要求1所述的猪冷冻精液基础稀释液，其特征在于，所述胆固醇为猪肝脏来源胆固醇。3.一种猪冷冻精液冻存液，其特征在于，该冻存液以权利要求1或2所述猪冷冻精液基础稀释液为基础，还包括卵黄、青霉素、L链霉素和甘油，以及Equex.STM。4.一种猪保鲜精稀释液中，其特征在于，该猪保鲜精稀释液以权利要求1或2所述猪冷冻精液基础稀释液为基础，还包括等渗脱脂牛奶，添加等渗脱脂牛奶的量与所述猪冷冻精液基础稀释液体积比为1：1。5.如权利要求1所述的猪冷冻精液基础稀释液，其特征在于，该基础稀释液的制备方法为：称取葡萄糖、柠檬酸、Tris，猪肝脏来源胆固醇、 L-脯氨酸，双蒸馏水，将它们放入烧杯内混合，加热，使上述物质完全溶解并降温，即可。6.权利要求3所述的猪冷冻精液冻存液的制备方法，其特征在于，包括：首先称取葡萄糖、柠檬酸、Tris，猪肝脏来源胆固醇、 L-脯氨酸，双蒸馏水，将它们放入烧杯内混合，加热，使上述物质完全溶解并降温后，再取该稀释液加入新鲜卵黄、青霉素、链霉素，混匀后降温，静置沉淀存放, 取上清液离心后，去掉离心后稀释液的表面油膜并加入甘油、Equex.STM抗冻剂，即为冻存液。7.以权利要求1-4为基础，一种猪冷冻精液制...

【专利技术属性】
技术研发人员：张国梁，宋俊霖，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：