五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯的筛选方法及其用途技术

本发明专利技术涉及五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯的筛选方法及其用途，该方法利用液质联用纯化分离系统分离五倍子中各成分并通过体内外实验筛选五倍子中治疗宫颈炎的活性成分。体内药理研究表明：没食子酸乙酯对宫颈炎大鼠有明显的治疗作用。没食子酸乙酯可以改善宫颈炎大鼠阴道红肿的情况，减少宫颈分泌物，抑制宫颈脏器指数的增加；病理组织切片结果显示没食子酸乙酯可减轻炎性细胞的浸润，加速修复宫颈粘膜上皮；酶联免疫吸附（ELISA）试验表明没食子酸乙酯可以抑制宫颈炎大鼠肿瘤坏死因子

【技术实现步骤摘要】
五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯的筛选方法及其用途


[0001]本专利技术属于医药领域，涉及五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯的筛选方法及其用途。

技术介绍

[0002]宫颈炎和非特异性宫颈炎的研究属于疾病病因不明的性传播感染(sexually transmitted infection,STI)医学研究领域。近年来，宫颈炎的发病率呈持续上升的趋势，且患病人群越来越趋于年轻化。由于宫颈管黏膜上皮为单层柱状上皮，抗感染能力较差，易发生感染。宫颈感染从下生殖道(阴道)开始，然后发展为盆腔炎、上生殖道(子宫和输卵管)和腹腔上升感染。临床多见的宫颈炎是急性子宫颈管黏膜炎，若急性子宫颈炎未经及时诊治或病原体持续存在，可导致慢性子宫颈炎症；严重者会导致进一步的不孕和异位妊娠。研究表明，宫颈炎是病原体侵入损伤部位所致，常见病原体分为性传播疾病病原体和内源性病原体。性传播疾病病原体包括淋病奈瑟菌及沙眼衣原体，内源性病原体包括葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌以及滴虫、念珠菌、阿米巴原虫等。临床上的治疗药物主要是抗生素，由于抗生素滥用和假阳性诊断导致耐药病原体的出现，该疾病的复发率呈逐渐上升的趋势。
[0003]五倍子为漆树科植物盐肤木(Rhus chinensis Mill.)、青麸杨(Rhus potaninii Maxim.)或红麸杨(Rhus punjabensis Stew.var.sinica(Diels)Rehd.et Wils.)叶上的虫瘿，主要由五倍子蚜寄生而形成。它主要分布于四川、贵州、云南、陕西、广西等地，其主要成分为没食子酸和鞣质，其中没食子鞣质含量高达50％～70％。临床研究发现，五倍子具有止泻、抗菌、抗炎、抗氧化、抗病毒、抗衰老和降血糖等药理作用，此外还有抗癌、抗生育、清除自由基等作用。夏尔热
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依布拉合木等人在《维吾尔医治疗300例慢性宫颈炎的临床报告》一文中报道外用复方没食子栓剂治疗慢性宫颈炎；曾佳烽(专利号：CN201210129001.7)等人发现多花野牡丹提取物中包含2％～15％的氨基酸、1％～7％的没食子酸、1％～8％的柠檬酸、2％～10％的蔗糖和0.5％～3.5％的有机铝，通过与载体材料结合制成凝胶剂、栓剂、乳剂、霜剂或洗剂可用于预防和治疗宫颈炎、宫颈糜烂。
[0004]天然产物一直是新药研究和开发的宝贵资源。五倍子作为传统中药，从中寻找治疗宫颈炎的活性物质并探究治疗机制，为五倍子的进一步开发利用提供思路，同时也为临床上宫颈炎的诊断治疗提供新策略。没食子酸乙酯是从五倍子中分离出来的一种酚酸类化合物。目前有关筛选五倍子中抗炎活性的成分及没食子酸乙酯在治疗宫颈炎方面的应用未见报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于，提供一种五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯的筛选方法及其用途，该方法利用液质联用纯化分离系统分离五倍子中各成分并通过体内外实验筛选五倍子中治疗宫颈炎的活性成分。体内药理研究表明：没食子酸乙酯对宫颈炎大鼠有明显的治疗作用。没食子酸乙酯可以改善宫颈炎大鼠阴道红肿的情况，减少宫颈分泌物，抑制宫颈
脏器指数的增加；病理组织切片结果显示没食子酸乙酯可减轻炎性细胞的浸润，加速修复宫颈粘膜上皮；酶联免疫吸附(ELISA)试验表明没食子酸乙酯可以抑制宫颈炎大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达，促进分泌表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)。
[0006]本专利技术所述的一种五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯的筛选方法，按下列步骤进行：
[0007]a、选用漆树科植物盐肤木、青麸杨或红麸杨叶上的虫瘿作为五倍子药材；
[0008]b、将步骤a中五倍子药材粉碎过60目筛，称取100g药材粉末，以300mL蒸馏水为溶剂回流提取3次，每次提取2小时，合并提取液；
[0009]c、将步骤b得到的合并提取液，使用X Bridge C18色谱柱对五倍子中的各成分进行纯化，分离得到的五倍子中11种成分包含：没食子酸，一-O-没食子酰基葡萄糖，二-O-没食子酰基葡萄糖，双没食子酸，三-O-没食子酰基葡萄糖，没食子酸乙酯，四-O-没食子酰基葡萄糖，五-O-没食子酰基葡萄糖，六-O-没食子酰基葡萄糖，双没食子酸乙酯和七-O-没食子酰基葡萄糖；
[0010]d、通过体外实验筛选五倍子中抗炎活性成分：以脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞形成炎症模型，通过噻唑蓝法测定五倍子中各成分对RAW264.7巨噬细胞生长活力的影响以及通过酶联免疫吸附法检测RAW264.7细胞上清液中一氧化氮、白介素-6、白介素-1β和肿瘤坏死因子-α的表达以及流式细胞术检测RAW264.7细胞中活性氧表达的影响，实验筛选出五倍子中抗炎活性成分为没食子酸乙酯。
[0011]所述方法获得的五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯在制备治疗宫颈炎的药物中的用途。
[0012]本专利技术所述的一种五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯的筛选方法，该方法将五倍子药材粉碎过筛，回流提取，合并提取液，采用液质联用纯化分离系统分离并得到五倍子中11种成分，包含：没食子酸、一-O-没食子酰基葡萄糖、二-O-没食子酰基葡萄糖、双没食子酸、三-O-没食子酰基葡萄糖、没食子酸乙酯、四-O-没食子酰基葡萄糖、五-O-没食子酰基葡萄糖、六-O-没食子酰基葡萄糖、双没食子酸乙酯和七-O-没食子酰基葡萄糖。通过体外细胞活力实验，各成分对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞中一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达以及流式细胞术检测RAW264.7细胞中活性氧(ROS)表达的影响。我们发现没食子酸乙酯的安全浓度(细胞存活超过80％的概率)为25μg/mL，而且可以明显减轻由脂多糖(LPS)引起RAW264.7细胞中一氧化氮(NO)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达增加以及活性氧(ROS)升高的情况。体内药理研究表明：没食子酸乙酯对宫颈炎大鼠有明显的治疗作用。没食子酸乙酯可以改善宫颈炎大鼠阴道红肿的情况，减少宫颈分泌物，抑制宫颈脏器指数的增加；病理组织切片结果显示没食子酸乙酯可减轻炎性细胞的浸润，加速修复宫颈粘膜上皮；酶联免疫吸附(ELISA)试验表明没食子酸乙酯可以抑制宫颈炎大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达，促进分泌表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)。
[0013]本专利技术本专利技术所述的一种五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯的筛选方法，该方法中选用的是漆树科植物盐肤木(Rhus chinensis Mill.)、青麸杨(Rhus potaninii Maxim.)或红麸杨(Rhus punjabensis Stew.var.sinica(Diels)Rehd.et Wils.)叶上的虫瘿作为五倍子药材；
[0014]将五倍子药材粉碎过60目筛，称取100g药材粉末，以300mL蒸馏水为溶剂回流提取3次，每次提取2小时，合并提取液；
[0015]将得到的合并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种五倍子中抗炎活性成分没食子酸乙酯的筛选方法，其特征在于按下列步骤进行：a、选用漆树科植物盐肤木、青麸杨或红麸杨叶上的虫瘿作为五倍子药材；b、将步骤a中五倍子药材粉碎过60目筛，称取100 g药材粉末，以300 mL蒸馏水为溶剂回流提取3次，每次提取2小时，合并提取液；c、将步骤b得到的合并提取液，使用X Bridge C18色谱柱对五倍子中的各成分进行纯化，分离得到的五倍子中11种成分包含：没食子酸，一-O-没食子酰基葡萄糖，二-O-没食子酰基葡萄糖，双没食子酸，三-O-没食子酰基葡萄糖，没食子酸乙酯，四-O-没食子酰基葡萄糖，五-O-没食子酰基葡...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩博，王忠英，王秋平，杨文静，刘永浩，薛芮，王钰莹，于玮，张华，田星，陈文，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：