一种基于Y型探针组的等温指数扩增方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种基于Y型探针组的等温指数扩增方法及其应用。所述等温指数扩增方法包括如下步骤：将Y型探针组、靶标核酸、切刻内切酶和聚合酶混合，所述Y型探针组的主探针和辅助探针与靶标核酸互补配对后，引发所述切刻内切酶和聚合酶辅助的等温链置换扩增反应，得到游离的单链核酸，同时所述单链核酸作为引物继续引发扩增反应，实现等温指数扩增。所述方法能够快速、简单高效地扩增出目标核酸序列，且特异性较高。将其用于检测新型冠状病毒时，能够提高检测的效率和准确度。提高检测的效率和准确度。提高检测的效率和准确度。

【技术实现步骤摘要】
一种基于Y型探针组的等温指数扩增方法及其应用


[0001]本专利技术涉及核酸检测领域，具体涉及一种基于Y型探针组的等温指数扩增方法及其应用，尤其涉及一种基于Y型探针组的等温指数扩增方法在检测新型冠状病毒中的应用。

技术介绍

[0002]传统的病毒检测方法主要是病毒培养分离法和免疫学检测法。病毒培养分离法周期长，不适合大量标本的检测鉴定；免疫学检测法其主要原理是基于传统血清学诊断，难以实现对潜伏期或发病初期的准确判断，难以实现在一次反应中同时对多种病毒进行分型和鉴定。
[0003]二代测序技术对于新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的发现和研究，包括分类，溯源，蛋白研究，疫苗开发等起着非常重要的作用。但是在临床病人诊断中并没有大量用到二代测序技术，其主要原因为测序所需要时间相对更长，操作复杂，价格昂贵，不适用于大规模的快速筛查使用。荧光定量PCR技术是目前SARS-CoV-2最重要的检测手段，该技术具有良好的敏感性和特异性，但是现在临床应用多为单重病毒检测，实时荧光定量PCR反应中引物越多，不稳定因素也相应地增加，检测的重复性和灵敏性就会本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于Y型探针组的等温指数扩增方法，其特征在于，所述等温指数扩增方法包括如下步骤：将Y型探针组、靶标核酸、切刻内切酶、dNTPs和聚合酶混合，所述Y型探针组的主探针和辅助探针与靶标核酸互补配对；而后在所述切刻内切酶和聚合酶的作用下进行等温链置换扩增反应，得到游离的单链核酸，同时所述单链核酸作为引物继续进行扩增反应，实现等温指数扩增。2.根据权利要求1所述的等温指数扩增方法，其特征在于，所述Y型探针组的主探针与辅助探针的3
′
末端互补配对的核苷酸个数为2～4个；优选地，所述与辅助探针的3
′
末端互补配对的核苷酸为主探针自5
′
端起的第15～20个核苷酸；优选地，所述主探针的3
′
末端修饰有磷酸基团；优选地，所述辅助探针扩增延伸后形成的长链上包括切刻内切酶的酶切位点。3.如权利要求1或2所述的等温指数扩增方法在核酸扩增和/或核酸检测中的应用。4.一种利用如权利要求1或2所述的等温指数扩增方法检测新型冠状病毒的试剂盒。5.根据权利要求4所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括Y型探针组、切刻内切酶、聚合酶、dNTPs和纳米金核酸生物传感器；优选地，所述Y型探针组的主探针和辅助探针的3
′
末端互补配对的核苷酸个数为4个；优选地，所述Y型探针组的主探针上10～15nt的核苷酸与新型冠状病毒的核酸序列互补配对，所述Y型探针组的辅助探针上10～15nt的核苷酸与新型冠状病毒的核酸序列互补配对。6.根据权利要求5所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述Y型探针组的主探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；优选地，所述Y型探针组的辅助探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。7.根据权利要求5或6所述的检测新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，所述纳米金核酸生物传感器包括顺次相连的样品垫、结合垫、硝...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋兴宇，王斗，王雪栋，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
国别省市：