一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，步骤为：（1）采用超高压液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法


[0001]本专利技术涉及饲料检测
，尤其是涉及一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法。

技术介绍

[0002]喹诺酮类药物是一类具有抗菌作用的人工合成药物，具有抗菌谱广、抗菌力强、毒副作用小、价格低廉等特点，作为饲料添加剂被广泛用于养殖业中，以预防和治疗畜禽和鱼类细菌感染性疾病。由于对药物知识了解不够，甚至为经济利益驱使，不规范用药、滥用兽药、饲料中违禁添加药物的情况屡见不鲜。饲料中的药物通过动物代谢经排泄物排出或直接进入水体而在土壤、水体、植物中残留，加之喹诺酮类药物本身具有一定毒性，其潜在的致癌性及致病菌耐药性产生，严重影响着人类的生存环境，最终影响人类的健康。因此，为确保动物源性食品质量安全，开发饲料中喹诺酮类药物残留的检测方法至关重要。
[0003]目前，喹诺酮类药物的检测方法主要有酶联免疫法、胶体金免疫层析法、电化学法、毛细管电泳-电化学发光法、高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、液相色谱-高分辨质谱法等。例如，在中国专利文献上公开的“一种兽药中喹诺酮类药物残留的检测方法”，其公告号CN106908560A，采用液相色谱-串联质谱法测定兽药中的喹诺酮类药物残留，方法测定底限为50μg/kg。
[0004]由于饲料中基质成分复杂，且待测的喹诺酮类药物含量低，因此要求检测方法具有良好的选择性和高灵敏度，而现有技术中的喹诺酮类药物的检测方法在灵敏度和准确性上仍有所不足，限制了在饲料检测中的应用。

技术实现思路

[0005]本专利技术是为了克服现有技术中的喹诺酮类药物的检测方法在灵敏度和准确性上仍有所不足，无法满足基质成分复杂且待测的喹诺酮类药物含量低的饲料检测要求的问题，提供一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，采用超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用法对饲料中的喹诺酮类药物进行测定，操作简单、定性定量分析准确，实现了对饲料中喹诺酮类药物的灵敏、快速、准确的测定。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，包括如下步骤：(1)建立待测喹诺酮类药物的精确质量数据库和质谱谱库：配置待测喹诺酮类药物的标准溶液，采用超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪确定待测喹诺酮类药物的精确质量数据库和质谱谱库；(2)样品前处理：将饲料用甲酸乙腈溶液提取，提取液经分子印迹整体柱固相萃取并洗脱后得到前处理后的样品；(3)样品检测：采用超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪对前处理后的样品进行检测；
(4)结果分析：将样品检测结果与建立的精确质量数据库和质谱谱库进行对比分析，当检测结果与精确质量数据库和质谱谱库信息匹配时，则确定样品中检测出待测喹诺酮类药物。
[0007]作为优选，所述喹诺酮类药物包括氧氟沙星、诺氟沙星、二氟沙星、氟罗沙星、奥比沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、环丙沙星、培氟沙星、依诺沙星、司帕沙星、洛美沙星。
[0008]作为优选，步骤(1)中所述精确质量数据库包括各待测喹诺酮类药物的色谱保留时间及一个前体离子和对待测喹诺酮类药物分别施加不同的碰撞能量后响应强度最高的两个特征碎片离子的精确质量数；质谱谱库包括对待测化合物分别施加不同碰撞能量后产生的二级质谱图。
[0009]作为优选，步骤(1)和(4)中超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪的色谱条件为：色谱柱：C
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色谱柱；柱温：29.5～30.5℃；进样量：10μL；流速：0.3～0.35mL/min；流动相：A为0.10～0.15wt％的甲酸水溶液，B为0.10～0.15wt％的甲酸乙腈溶液，洗脱梯度：1～8min，5～95vol％B；8～10min，95vol％B；10～10.01min，95～5vol％B；10.01～13.50min，5vol％B。
[0010]作为优选，步骤(1)和(4)中超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪的质谱条件为：毛细管电压为3.4～3.6kV；离子传输管温度为315～325℃；鞘气压力为38～42arb，辅助气压力8～12arb；扫描模式为全扫描/二级离子扫描，扫描范围为m/z 100～1000；一级质谱分辨率为70000FWHM，二级质谱分辨率为17500FWHM；轨道阱最大容量为1
×
106，最大注入时间为100ms；碰撞裂解气为高纯氮气，归一化碰撞能量为17.5eV、35.0eV、52.5eV。
[0011]作为优选，步骤(2)中的提取方法为：将粉碎后的饲料加入0.1～0.15wt％甲酸的乙腈-水溶液中，乙腈和水的体积比为(4～5)：1，饲料和甲酸的乙腈-水溶液的质量体积比为1g：(10～15mL)，涡旋混匀，振荡提取10～15min，取上清液离心10～15min，上清液即为提取液。
[0012]作为优选，步骤(2)中分子印迹整体柱的制备方法为：A)将4,6,8-三甲基-1H-喹啉-2-酮、5,7-二氯-4-羟基喹啉-3-羧酸、(CH3COO)2Zn
·
6H2O、甲基丙烯酸、4-乙烯吡啶、三甲基丙烯酸三羟甲基丙烷酯、二甲基甲酰胺、二甲亚砜及1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐混合，超声溶解5～10min；再加入偶氮二异丁腈，超声振荡10～20min，充氮气5～10min；B)将反应后的溶液注入下端封口的不锈钢柱，密封后50～60℃恒温聚合反应18～24h；C)将反应后的柱子以0.1～1.0mL/min的流速，先用乙腈冲洗5～10min；再用甲醇和乙酸的混合溶液冲洗10～15min，最后用甲醇冲洗3～5min，得到所述分子印迹整体柱。
[0013]作为优选，步骤A)中4,6,8-三甲基-1H-喹啉-2-酮、5,7-二氯-4-羟基喹啉-3-羧酸、(CH3COO)2Zn
·
6H2O、甲基丙烯酸、4-乙烯吡啶、三甲基丙烯酸三羟甲基丙烷酯、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐及偶氮二异丁腈的混合比例为：1mmol：(1～2mmol):(1～2mmol)：(3～6mmol)：(3～6mmol)：(25～35mmol)：(2～3mL)：(10～15mL)：(20～25mL)：(0.4～0.6g)。
[0014]作为优选，步骤(2)中的固相萃取和洗脱方法为：以0.5～1.0mL/min的流速依次用甲醇和水分别活化分子印迹整体柱3～6min，取0.5～1mL提取液上样后，以0.5～1.0mL/min
的流速用水淋洗柱体3～6min，再用体积比为(1～2)：1的甲醇/乙酸洗脱剂洗脱5～10min，收集洗脱液，40～50℃下氮气吹干后，将残渣溶解于0.5～1mL的0.10～0.15wt％的甲酸乙腈溶液中，过0.2～0.22μm滤膜后得到前处理后的样品。
[0015]本专利技术使用超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用法对饲料中的喹诺酮类药物进行检测，既具有串联四级杆的良好选择性和灵敏度，又可以实现线性线性离子阱增强二级碎片离子的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，包括如下步骤：（1）建立待测喹诺酮类药物的精确质量数据库和质谱谱库：配置待测喹诺酮类药物的标准溶液，采用超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪确定待测喹诺酮类药物的精确质量数据库和质谱谱库；（2）样品前处理：将饲料用甲酸乙腈溶液提取，提取液经分子印迹整体柱固相萃取并洗脱后得到前处理后的样品；（3）样品检测：采用超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪对前处理后的样品进行检测；（4）结果分析：将样品检测结果与建立的精确质量数据库和质谱谱库进行对比分析，当检测结果与精确质量数据库和质谱谱库信息匹配时，则确定样品中检测出待测喹诺酮类药物。2.根据权利要求1所述的一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，所述喹诺酮类药物包括氧氟沙星、诺氟沙星、二氟沙星、氟罗沙星、奥比沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、环丙沙星、培氟沙星、依诺沙星、司帕沙星、洛美沙星。3.根据权利要求1或2所述的一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，步骤（1）中所述精确质量数据库包括各待测喹诺酮类药物的色谱保留时间及一个前体离子和对待测喹诺酮类药物分别施加不同的碰撞能量后响应强度最高的两个特征碎片离子的精确质量数；质谱谱库包括对待测化合物分别施加不同碰撞能量后产生的二级质谱图。4.根据权利要求1所述的一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，步骤（1）和（4）中超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪的色谱条件为：色谱柱：C
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色谱柱；柱温：29.5~30.5℃；进样量：10μL；流速：0.3~0.35mL/min；流动相：A为0.10~0.15wt%的甲酸水溶液，B为0.10~0.15wt%的甲酸乙腈溶液，洗脱梯度：1~8min，5~95vol%B；8~10min，95vol%B；10~10.01min，95~5vol%B；10.01~13.50min，5vol%B。5.根据权利要求1或4所述的一种饲料中喹诺酮类药物的检测方法，其特征是，步骤（1）和（4）中超高压液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱仪的质谱条件为：毛细管电压为3.4~3.6 kV；离子传输管温度为315~325℃；鞘气压力为38~42arb，辅助气压力8~12arb；扫描模式为全扫描/二级离子扫描，扫描范围为m/z 100～1000；一级质谱分辨率为70000 FWHM，二级质谱分辨率为17500 FWHM；轨道阱最大容量为1
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106，最大注入时间为100ms；碰撞裂解气为高纯氮气，归一化碰撞能...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪行舟，代兵，李华，何艳，吕凯凯，
申请(专利权)人：浙江国正检测技术有限公司，
类型：发明
国别省市：