一种精确定量检测自噬流的方法技术

本发明专利技术公开了一种精确定量检测自噬流的方法，步骤如下：(1)构建EGFP/LC3HIBIT共表达载体，EGFP和LC3HIBIT分别用于独立的启动子，互不影响；(2)通过瞬转或筛选单克隆的方法，获得EGFP和LC3

【技术实现步骤摘要】
一种精确定量检测自噬流的方法


[0001]本专利技术属于分子生物
，具体涉及一种精确定量检测自噬流的方法。

技术介绍

[0002]自噬是细胞内物质进行周转的重要过程。细胞可以通过自噬和溶酶体，消除、降解和消化受损、变性、衰老和失去功能的细胞、细胞器和变性蛋白质与核酸等生物大分子。为细胞的重建、再生和修复提供必须原料，实现细胞的再循环和再利用。它既是体内的「垃圾处理厂」，也是「废品回收站」；它既可以抵御病原体的入侵，又可保卫细胞免受细胞内毒物的损伤。
[0003]LC3B是细胞自噬过程中的关键基因。在细胞内LC3B被具有蛋白内切酶活性的Atg4在羧基端剪切生成胞质的LC3-I,然后通过磷脂酰乙醇胺结合形成LC3-II，并定位于自噬体的外膜和内膜。自噬体与溶酶体融合后，膜内结合的LC3-II被溶酶体蛋白酶降解。因此目前常用自噬标志物LC3的转换即LC3-II/LC3-I的比例检测细胞的自噬程度。
[0004]Promega公司在2017年开发出了HIBIT标签细胞，并把它应用与自噬的研究。如图1所示，通过外源表达载体使得细胞中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种精确定量检测细胞自噬流的方法，其特征在于，步骤如下：(1)构建EGFP/LC3HIBIT共表达载体，EGFP和LC3HIBIT分别受控于相互独立的启动子，两者之间的表达互不影响；(2)通过瞬时转染或构建稳定转染细胞系并筛选单克隆的方法，获得EGFP和LC3-HIBIT蛋白的共同表...

【专利技术属性】
技术研发人员：张昊星，李延鹏，李嘉恒，吴精博，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：