一种司美格鲁肽的合成方法技术

本发明专利技术涉及多肽合成领域，特别涉及一种司美格鲁肽的合成方法。本发明专利技术通过在常规的固相载体上，引入一个离子液体的Linker，然后通过固相合成法依次连接司美格鲁肽序列中相对应的氨基酸，裂解、纯化，得到司美格鲁肽精肽。本发明专利技术提供的方法，具有工艺简单，成本低、收率高的优点，相比于常规的化学合成方法来说，采用本发明专利技术的方法，通过增加离子液体Linker，通过阴离子的交换，完成改变了固相载体的特性，增加了树脂在溶剂中的溶胀性能，从而改善了固相合成的氨基酸残基的偶联效率，解决PS树脂本身的疏水性特性，避免肽链延长过程中的肽链聚集，从而解决司美格鲁肽本身序列由于β

【技术实现步骤摘要】
一种司美格鲁肽的合成方法


[0001]本专利技术涉及多肽合成领域，特别是GLP-1类似物司美格鲁肽的合成方法。
技术背景
[0002]司美格鲁肽是由诺和诺德公司研发的长效GLP-1类似物，只需要进行每周一次的皮下注射给药或者每天一次的口服给药。
[0003]从结构上看，司美格鲁肽需要在20位Lys接上两个AEEA、γ-谷氨酸和十八烷二酸脂肪链，其中2位采用非天然氨基酸氨基异丁酸。司美格鲁肽的序列结构如下：
[0004]H-His
1-Aib
2-Glu
3-Gly
4-Thr
5-Phe
6-Thr
7-Ser
8-Asp
9-Val
10-Ser
11-Ser
12-Tyr
13-Leu
14
-ꢀ
Glu
15-Gly
16-Gln
17-Ala
18-Ala
19-Lys
20
(AEEA-AEEA-γ-Glu-Octadecanedioic)-Glu
21-Ph e
22-Ile
23-Ala
24-Trp
25-Leu
26-Val
27-Arg
28-Gly
29-Arg
30-Gly
31-OH
[0005]司美格鲁肽现有的合成工艺，包括原研选择的生物发酵结合化学合成的方法完成产品的制备方法(CN101910193)。采用此方法合成，生物发酵方法制备 GLP-1(11-37)片段之后，N-末端氨基和Ser、Thr和Tyr侧链的羟基均没有进行保护，直接和侧链的OSu酯进行反应，容易导致多位点的反应，形成大量非预期的杂质，不利于后期的分离纯化，收率也比较低。
[0006]司美格鲁肽现有的合成工艺，还包括一些传统的多肽固相合成以及片段缩合的合成方法(CN 103848910、CN 106928343、CN106478806、WO2016046753 等)。在所有的这些各种方法，采用线性偶联的方法，基本上很难有好的合成效果，主要是司美格鲁肽本身的多肽序列结构，N-末端片段： H-His
1-Aib
2-Glu
3-Gly
4-Thr
5-Phe
6-Thr
7-Ser
8-Asp
9-Val
10-Ser
11-Ser
12-Tyr
13-Leu
14-，因为较强的疏水性，容易形成β-折叠等二级结构，偶联非常困难，缩合效率很低。而一些片段缩合的方法，也是为了解决线性偶联困难的问题。但是，目前一些片段缩合的方法，当合成规模放大到生产之后，片段的溶解问题，片段的偶联效率问题，还有片段溶解的放热问题等，都会影响最后的合成效果。另外，片段缩合在操作上也比较复杂，不利于工业化生产。
[0007]在目前的多肽固相合成中，常用的合成策略是Fmoc固相合成，通常采用 PS类型的固相树脂(比如Wang树脂、Rink树脂等)，然后逐个偶联相应的氨基酸。这种常规的方法，对于一些长肽和疏水性较强的肽片段，容易在合成的过程中通过分子内的氢键，形成β-折叠二级结构，从而导致树脂发生收缩，导致偶联困难。比如司美格鲁肽，在固相合成中就容易因为β-折叠二级结构的形成而导致合成效果不佳。造成上述现象的原因，除了肽序本身的原因之外，与合成过程中采用PS类型的树脂本身较强的疏水性特性也有很大关系，比如采用PEG 类型的树脂，上述树脂收缩的现象就会得到一定的缓解。

技术实现思路

[0008]有鉴于上述现有技术中司美格鲁肽合成方法中的缺点，本专利技术旨在提供一种Fmoc固相多肽合成司美格鲁肽的方法：在PS类型的固相载体上，另外接入一个离子液体的
Linker，利用离子液体本身的可溶性特性，解决PS载体本身的疏水性特性，从而避免司美格鲁肽部分残基因为β-折叠二级结构的形成导致的偶联效果不佳的问题。
[0009]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0010]一种司美格鲁肽的合成方法，把离子液体作为一种亲水性的Linker偶联到固相树脂上，然后通过固相合成法依次连接司美格鲁肽序列中相对应的氨基酸，裂解、纯化，得到司美格鲁肽精肽。
[0011]在本专利技术的技术方案中，所述的司美格鲁肽的合成方法，包括如下步骤：
[0012](1)把离子液体Linker偶联到固相树脂上；
[0013](2)根据司美格鲁肽C-末端的第一个氨基酸Gly，把Fmoc-Gly-OH偶联到上述含有离子液体Linker的固相树脂上；
[0014](3)脱除Fmoc保护基，根据司美格鲁肽的序列，按照偶联Fmoc或Boc 保护α氨基的氨基酸或肽段，然后脱除Fmoc保护基的方法依次进行偶联，Fmoc 或Boc保护α氨基的氨基酸的偶联顺序为：Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、 Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、 Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、 Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、 Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、 Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、 Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、 Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH；
[0015](4)脱除Lys(Alloc)中的Alloc保护基团；
[0016](5)根据司美格鲁肽的侧链结构，偶联Fmoc-AEEA-OH，然后以脱除Fmoc 保护基，然后依次偶联Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-Glu-OtBu和十八烷二酸单叔丁酯；
[0017](6)裂解树脂和侧链保护基得到粗肽；
[0018](7)纯化后得到司美格鲁肽精肽。
[0019]上述步骤(1)中所说的离子液体Linker，包括咪唑乙醇四氟硼酸离子液体；咪唑乙醇六氟磷酸离子液体；咪唑乙醇三氟甲磺酸离子液体；咪唑丙醇六氟磷酸离子液体；咪唑丙醇四氟硼酸离子液体；咪唑丙醇三氟甲磺酸离子液体；咪唑乙醇双三氟甲基磺酰亚胺液体；咪唑丙醇双三氟甲基磺酰亚胺离子液体等。
[0020]在本专利技术的技术方案中，把离子液体Linker偶联到固相树脂上包括以下步骤：步骤一、将咪唑乙醇或咪唑丙醇和异丁烯反应萃取结晶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种司美格鲁肽的合成方法，其特征在于，把离子液体作为一种亲水性的Linker偶联到固相树脂上，然后通过固相合成法依次连接司美格鲁肽序列中相对应的氨基酸，裂解、纯化，得到司美格鲁肽精肽。2.根据权利要求1所述的司美格鲁肽的合成方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)把离子液体Linker偶联到固相树脂上；(2)根据司美格鲁肽C-末端的第一个氨基酸Gly，把Fmoc-Gly-OH偶联到上述含有离子液体Linker的固相树脂上；(3)脱除Fmoc保护基，根据司美格鲁肽的序列，按照偶联Fmoc或Boc保护α氨基的氨基酸或肽段，然后脱除Fmoc保护基的方法依次进行偶联，Fmoc或Boc保护α氨基的氨基酸的偶联顺序为：Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Alloc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Aib-OH、Boc-His(Trt)-OH；(4)脱除Lys(Alloc)中的Alloc保护基团；(5)根据司美格鲁肽的侧链结构，偶联Fmoc-AEEA-OH，然后以脱除Fmoc保护基，然后依次偶联Fmoc-AEEA-OH、Fmoc-Glu-OtBu和十八烷二酸单叔丁酯；(6)裂解树脂和侧链保护基得到粗肽；(7)纯化后得到司美格鲁肽精肽。3.根据权利要求1或2所述的司美格鲁肽的合成方法，其特征在于，所述离子液体选自咪唑基类型的离子液体；优选的，所述咪唑基类型的离子液体包括咪唑乙醇四氟硼酸离子液体、咪唑乙醇六氟磷酸离子液体、咪唑乙醇三氟甲磺酸离子液体、咪唑丙醇六氟磷酸离子液体、咪唑丙醇四氟硼酸离子液体、咪唑丙醇三氟甲磺酸离子液体、咪唑乙醇双三氟甲基磺酰亚胺液体、咪唑丙醇双三氟甲基磺酰亚胺离子液体中的一种。4.根据权利要求1或2所述的所述的司美格鲁肽的合成方法，其特征在于，把离子液体Linker偶联到固相树脂上包括以下步骤：步骤一、将咪唑乙醇或咪唑丙醇和异丁烯反应萃取结晶后，得到叔丁基保护的咪唑乙醇或咪唑丙醇；步...

【专利技术属性】
技术研发人员：马亚平，戴政清，张凌云，王宇恩，付信，周迎春，王庆磊，
申请(专利权)人：深圳深创生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：