【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在免疫球蛋白重链编码序列中具有DH-DH重排能力的非人动物
[0001]相关联申请的交叉引用
[0002]此申请要求美国临时申请序列号62/685,203(2018年6月14日提交)、62/702,206(2018年7月23日提交)和62/812,580(2019年3月1日提交)的根据35 U.S.C.
§
119(3)的权益，每个申请据此以全文引用的方式并入。
[0003]序列表
[0004]序列表的正式副本以ASCII格式的序列表通过EFS-Web以电子方式提交，文件名为“10347_ST25.txt”，该文件创建于2019年6月13日，大小为约50千字节，与本说明书同时提交。该ASCII格式的文档中含有的序列表是说明书的一部分，并且以引用的方式整体并入本文。
技术介绍
[0005]单克隆抗体产品彻底改变了生物制药行业，并在几种疾病的治疗方面取得了重大进展。这些单克隆抗体产品中的许多产品都利用了抗体分子(即传统的免疫球蛋白基因区段)的天然特征，并且在一些情况下并入了其他特征，诸如标记(例如聚乙二醇化、放射性标记)或与其他药物缀合。按照目前的批准速率，到2020年，预计将有大约70种单克隆抗体产品投放市场。尽管取得了这些进展并且通过将单克隆抗体用于治疗用途而获得了知识，但是与单克隆抗体难以结合和/或接近的靶标相关联的疾病仍然持续存在，这突出了对开发不同的有效治疗方法的需求。
技术实现思路
[0006]本专利技术包括认识到，需要对非人动物(例如，啮齿动物(例如大鼠，例如小鼠)进行...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含工程化重链多样性(D
H
)基因区段的核苷酸分子，所述工程化重链多样性基因区段包含有效地连接至23聚体重组信号序列(RSS)的至少一个D
H
基因区段。2.根据权利要求1所述的核苷酸分子，其中所述核苷酸序列包含工程化D
H
区，所述工程化D
H
区包含(i)有效地连接至23聚体RSS的至少一个D
H
基因区段和(ii)在一侧侧接有12聚体RSS且在另一侧侧接有另一个12聚体RSS的未重排的D
H
基因区段，并且其中(i)所述至少一个有效地连接至23聚体RSS的D
H
基因区段和(ii)所述在一侧侧接有12聚体RSS且在另一侧侧接有另一个12聚体RSS的未重排的D
H
基因区段被有效地连接，使得(i)和(ii)能够根据12/23规则在D
H-D
H
重组事件中进行连接，任选地其中所述工程化D
H
区仅包含人D
H
基因区段。3.根据权利要求2所述的核苷酸分子，其中所述核苷酸分子还包含：(a)至少一个未重排的免疫球蛋白重链可变(V
H
)基因区段，其位于所述工程化D
H
区的上游并与之有效地连接，(b)至少一个未重排的免疫球蛋白重链连接(J
H
)基因区段，其位于所述工程化D
H
区的下游并与之有效地连接，或(c)(a)和(b)的组合。4.根据权利要求3所述的核苷酸分子，其中所述至少一个V
H
基因区段包含未重排的人V
H
6-1基因区段，所述至少一个J
H
基因区段包含未重排的人J
H
6基因区段，或其组合。5.根据权利要求3或4所述的核苷酸分子，其中所述至少一个未重排的J
H
基因区段包含未重排的人J
H
4基因区段、未重排的人J
H
5基因区段和未重排的人J
H
6基因区段。6.根据权利要求3-5中任一项所述的核苷酸分子，其中所述至少一个未重排的J
H
基因区段包含未重排的人J
H
1基因区段、未重排的人J
H
2基因区段、未重排的人J
H
3基因区段、未重排的人J
H
4基因区段、未重排的人J
H
5基因区段和未重排的人J
H
6基因区段，任选地其中所述未重排的人J
H
1、J
H
2、J
H
3、J
H
4、J
H
5和J
H
6基因区段处于种系构型中。7.根据权利要求3-6中任一项所述的核苷酸分子，其中至少一个未重排的V
H
基因区段包含任选地处于种系构型中的、跨越并包括未重排的人V
H
3-74和未重排的人V
H
1-6基因区段的功能性未重排的人V
H
基因区段的全部库。8.根据前述权利要求中任一项所述的核苷酸分子，其还包含一个或多个功能性啮齿动物Adam6基因，任选地其中所述一个或多个功能性啮齿动物Adam6基因位于人V
H
1-2基因区段与人V
H
6-1基因区段之间和/或替换人Adam6基因。9.根据前述权利要求中任一项所述的核苷酸分子，其中所述23聚体RSS与所述至少一个D
H
基因区段的5'端邻接。10.根据前述权利要求中任一项所述的核苷酸分子，其中所述23聚体RSS与所述至少一个D
H
基因区段的3'端邻接。11.根据前述权利要求中任一项所述的核苷酸分子，其中所述至少一个有效地连接至23聚体RSS的D
H
基因区段包含：(a)有效地连接至23聚体RSS的人D
H
3-3基因区段，任选地其中所述23聚体RSS与所述D
H
3-3基因区段的5'端邻接，(b)有效地连接至23聚体RSS的人D
H
2-2基因区段，任选地其中所述23聚体RSS与所述D
H
2-2基因区段的3'端邻接，
(c)有效地连接至23聚体RSS的人D
H
2-8基因区段，任选地其中所述23聚体RSS与所述D
H
2-8基因区段的3'端邻接，(d)有效地连接至23聚体RSS的人2-15基因区段，任选地其中所述23聚体RSS与所述D
H
2-15基因区段的3'端邻接，(e)(a)-(d)的任何组合。12.根据前述权利要求中任一项所述的核苷酸分子，其包含含有如SEQ ID NO:52所示序列的核苷酸序列。13.根据权利要求1-11中任一项所述的核苷酸分子，其包含含有如SEQ ID NO:61所示序列的核苷酸序列。14.根据权利要求1-13中任一项所述的核苷酸分子，其包含含有如SEQ ID NO:70所示核苷酸序列的核苷酸序列。15.根据权利要求1-14中任一项所述的核苷酸分子，其包含含有如SEQ ID NO:71所示核苷酸序列的核苷酸序列。16.根据权利要求1-15中任一项所述的核苷酸分子，其包含含有如SEQ ID NO:72所示核苷酸序列的核苷酸序列。17.一种核苷酸分子，其从5'至3'在有效连接中包含：(a)一个或多个未重排的人V
H
基因区段；(b)从5'至3'包含以下项的工程化D
H
区(i)一个或多个未重排的人D
H
基因区段，其中所述一个或多个人D
H
基因区段中的每一个在其5
’
和3'端侧接有12聚体RSS，以及(ii)包含在其5'端有效地连接至23聚体RSS的人D
H
3-3基因区段的有效地连接至23聚体RSS的至少一个D
H
基因区段；和(c)一个或多个未重排的人J
H
基因区段。18.一种核苷酸分子，其从5'至3'在有效连接中包含：(a)一个或多个未重排的人V
H
基因区段；(b)工程化D
H
区，其中所述工程化D
H
区从5'至3
’
包含(i)有效地连接至23聚体RSS的至少一个D
H
基因区段，包括在其3'端有效地连接至23聚体RSS的至少一个人D
H
2基因区段，任选地其中在其3'端有效地连接至23聚体RSS的所述至少一个人D
H
2基因区段包含在其3'端有效地连接至23聚体RSS的人D
H
2-2基因区段、在其3'端有效地连接至23聚体RSS的人D
H
2-8基因区段、在其3'端有效地连接至23聚体RSS的人D
H
2-15基因区段、或其任何组合，以及(ii)一个或多个人D
H
基因区段，其中所述一个或多个人D
H
基因区段中的每一个在其5'端和3'端侧接有12聚体RSS；和(c)一个或多个未重排的人J
H
基因区段。19.根据权利要求17或权利要求18所述的核苷酸分子，其中所述一个或多个未重排的人V
H
基因区段从5
’
至3
’
包含未重排的人V
H
1-2基因区段和未重排的人V
H
6-1基因区段，其中所述核苷酸在所述未重排的人V
H
1-2基因区段与所述未重排的人V
H
6-1基因区段之间还包含一个或多个功能性啮齿动物Adam6基因，并且其中所述未重排的人V
H
1-2基因区段、所述一个或多个啮齿动物Adam6基因和所述未重排的人V
H
6-1基因区段是邻接的。
20.根据权利要求17-19中任一项所述的核苷酸分子，其中所述一个或多个未重排的人V
H
基因区段包含任选地处于种系构型中的、跨越并包括未重排的人V
H
3-74和未重排的人V
H
1-6基因区段的功能性未重排的人V
H
基因区段的全部库。21.根据权利要求17-20中任一项所述的核苷酸分子，其中所述一个或多个未重排的人J
H
基因区段包含未重排的人J
H
6基因区段。22.根据权利要求21所述的核苷酸分子，其中所述一个或多个未重排的人J
H
基因区段包含未重排的人J
H
4基因区段、未重排的人J
H
5基因区段和所述未重排的人J
H
6基因区段。23.根据权利要求22所述的核苷酸分子，其中所述一个或多个未重排的人J
H
基因区段包含未重排的人J
H
1基因区段、未重排的人J
H
2基因区段、未重排的人J
H
3基因区段、所述未重排的人J
H
4基因区段、所述未重排的人J
H
5基因区段和所述未重排的人J
H
6基因区段，任选地其中所述未重排的人J
H
1、J
H
2、J
H
3、J
H
4、J
H
5和J
H
6基因区段处于种系构型中。24.根据权利要求1-23中任一项所述的核苷酸分子，其还在其3'端包含重链免疫球蛋白恒定区(C
H
)或其一部分。25.根据权利要求24所述的核苷酸分子，其中所述C
H
是啮齿动物C
H
区或其一部分。26.根据权利要求25所述的核苷酸分子，其中所述啮齿动物C
H
区或其一部分包含啮齿动物内含子增强子区和啮齿动物IgM基因。27.根据权利要求1-26中任一项所述的核苷酸分子，其还包含药物选择盒，其中所述药物选择盒位于有效地连接至23聚体RSS的所述D
H
基因区段的上游，并且其中所述药物选择盒任选地侧翼为一个或多个位点特异性重组位点。28.一种包含根据权利要求1-27中任一项所述的核苷酸分子的靶向载体，其包含被配置为允许与免疫球蛋白重链序列进行同源重组的5'-和3'-同源臂，任选地其中所述免疫球蛋白重链序列在内源性啮齿动物免疫球蛋白重链基因座处、包含人或人源化免疫球蛋白重链可变区、或其组合。29.一种修饰免疫球蛋白重链可变区以工程化D
H-D
H
重组的方法，所述方法包括：获得包含含有一个或多个未重排的D
H
基因区段的D
H
区的免疫球蛋白重链可变区，所述未重排的D
H
基因区段中的每一个在一侧侧接有12聚体RSS且在另一侧侧接有另一个12聚体RSS，和修饰所述D
H
区以还包含有效地连接至23聚体RSS的至少一个D
H
基因区段。30.根据权利要求29所述的方法，其中所述一个或多个未重排的D
H
基因区段包含一个或多个未重排的人D
H
基因区段。31.根据权利要求30所述的方法，其中所述一个或多个未重排的D
H
基因区段包含任选地处于种系构型中的跨越并包括所述种系人D
H
1-1和所述种系人D
H
7-27基因区段的所有功能性种系人D
H
基因区段。32.根据权利要求29-31中任一项所述的方法，其中修饰包括(a)用有效地连接至23聚体RSS的D
H
基因区段替换所述一个或多个未重排的D
H
基因区段中的至少一个，(b)用23聚体RSS替换在未重排的D
H
基因区段侧翼的两个12聚体RSS中的至少一个，或(c)(a)和(b)的组合。33.根据权利要求32所述的方法，其中所述免疫球蛋白重链可变区还包含含有至少一
个未重排的J
H
基因区段的J
H
区，其中所述J
H
区有效地连接至D
H
区，并且其中用有效地连接至所述23聚体RSS的所述D
H
基因区段替换所述一个或多个未重排的D
H
基因区段中的至少一个包括缺失包含在所述J
H
区中的至少一个未重排的J
H
基因区段。34.根据权利要求33所述的方法，其中所述J
H
区包含含有人种系J
H
1基因区段、人种系J
H
2基因区段、人种系J
H
3基因区段、人种系J
H
4基因区段、人种系J
H
5基因区段和人种系J
H
6基因区段的人种系J
H
基因区段的全部库，任选地其中所述人种系J
H
1、J
H
2、J
H
3、J
H
4、J
H
5和J
H
6基因区段处于种系构型中，并且其中缺失包含在所述J
H
区中的至少一个种系J
H
基因区段包括缺失所述未重排的人J
H
1、J
H
2和J
H
3基因区段，以及任选地进一步缺失所述J
H
4和J
H
5基因区段。35.根据权利要求29至34中任一项所述的方法，其中有效地连接至23聚体RSS的所述至少一个D
H
基因区段包含(a)有效地连接至23聚体RSS的人D
H
3-3基因区段，任选地其中所述23聚体RSS与所述D
H
3-3基因区段的5'端邻接，(b)有效地连接至23聚体RSS的人D
H
2-2基因区段，任选地其中所述23聚体RSS与所述D
H
2-2基因区段的3'端邻接，(c)有效地连接至23聚体RSS的人D
H
2-8基因区段，任选地其中所述23聚体RSS与所述D
H
2-8基因区段的3'端邻接，(d)有效地连接至23聚体RSS的人
DH2-15基因区段，任选地其中所述23聚体RSS与所述D
H
2-15基因区段的3'端邻接，(e)(a)-(d)的任何组合。36.根据权利要求32-35中任一项所述的方法，其中被替换的所述至少一个未重排的D
H
基因区段包含所述D
H
区的3
’
最末端未重排的D
H
基因区段。37.根据权利要求32-36中任一项所述的方法，其中被替换的所述至少一个未重排的D
H
基因区段包含与有效地连接至23聚体RSS的所述至少一个D
H
基因区段相对应的D
H
基因区段。38.一种免疫球蛋白重链基因座，其包含根据权利要求1-27中任一项所述的核苷酸分子、根据权利要求28所述的靶向载体或根据权利要求29-37中任一项所述的方法修饰的所述免疫球蛋白重链可变区。39.一种啮齿动物基因组，其包含根据权利要求1-27中任一项所述的核酸、根据权利要求28所述的靶向载体、根据权利要求29-37中任一项所述的方法修饰的所述免疫球蛋白重链可变区、或根据权利要...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。