LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法技术

本发明专利技术公开了一种LC

【技术实现步骤摘要】
LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法


[0001]本专利技术涉及药物浓度的检测方法，属于药物浓度分析
，具体地涉及一种LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法。

技术介绍

[0002]肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，占肾脏恶性肿瘤的80％以上。RCC发病隐匿，约有30％以上的患者经诊断已发生转移，且RCC对放化疗不够敏感。近10年，随着靶向药物的发展，转移性RCC的治疗进入了靶向治疗时代。
[0003]盐酸帕唑帕尼由葛兰素史克公司开发，于2009年10月获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准在美国的上市，商品名为Votrient，用于治疗晚期肾细胞癌、软组织肉瘤、晚期卵巢癌等疾病，属于第二代多靶点酪氨酸激酶抑制剂，对血管内皮生长因子受体、血小板源性生长因子受体等均有明显的抑制作用。其化学结构式如下所示：
[0004][0005]分子式：C
21
H
24
N7O2SCl，分子量：473.98。
[0006]盐酸帕唑帕尼是一种多晶型化合物，专利技术专利WO2011069053A1公开了帕唑帕尼盐酸盐的17种晶型，专利技术专利CN103232443A保护了一种晶型L及其制备方法、含有它的药物组合物及其在制备抗肿瘤药物方面的用途。专利技术专利CN107991398A公开了盐酸帕唑帕尼中间体相关杂质的分析测定方法。
[0007]帕唑帕尼的检测方法对研究比格犬血浆中帕唑帕尼的药代动力学特征和缩短帕唑帕尼制剂的生物等效性研究周期来说是重要前提。然而，经检索并对相关文献分析对比结果表明：国内公开发表的文献中，已见LC-MS/MS法测定小鼠和大鼠血浆中帕唑帕尼浓度的报道。如文献“LC-MS/MS法测定小鼠血浆中帕唑帕尼的浓度”中，以非索非那定为内标，血浆样品经乙腈沉淀，采用Agilent Zorbax C18色谱柱(2.1mm
×
100mm，3.5μm)，柱温30℃，流动相为乙腈-水(含0.1％甲酸)(75:25)，流速为0.2mL
·
min-1
。质谱条件为电喷雾离子源(ESI源)，正离子模式多反映(MRM)扫描，离子选择通道分别为m/z438.4
→
m/z357.7(帕唑帕尼)和m/z502.1
→
m/z466.1(非索非那定)，结果发现，帕唑帕尼浓度在5～10000ng
·
mL-1
范围内与峰面积线性关系良好(r＝0.9993)，日内及日间精密度(RSD)均小于7.31％，帕唑帕尼绝对回收率为64.82～71.52％，相对回收率为102.98～108.14％，帕唑帕尼在小鼠体内的主要药物动力学参数AUC
0-8
、C
max
、t
1/2
分别为(11367.8
±
139.5)ng
·
h
·
mL-1
、(5911.2
±
100.1)ng
·
mL-1
、(1.1
±
0.006)h。
[0008]然而上述检测涉及到小鼠血浆，与人血浆不同，因此，急需开发一种快速、灵敏、准确的人血浆中帕唑帕尼的检测方法。

技术实现思路

[0009]为解决上述技术问题，本专利技术公开了一种LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法，该检测方法通过多反应监测模式进行定性和定量检测，不仅准确度高，而且检测下限低，分析时间短，适宜临床样本的大批量检测。
[0010]为实现上述目的，本专利技术公开了一种LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法，它包括取系列帕唑帕尼工作溶液分别与人空白血浆混合、预处理后注入LC-MS/MS中进行分析，以及向待测人血浆中加入主要由帕唑帕尼-d6配成的内标工作溶液、预处理后也注入LC-MS/MS中进行分析，以帕唑帕尼和内标帕唑帕尼-d6的色谱峰面积比为纵坐标，以人空白血浆中帕唑帕尼的浓度为横坐标制作标准曲线，根据标准曲线计算出待测人血浆样品中的帕唑帕尼浓度；
[0011]所述预处理包括加入乙腈沉淀剂
→
涡旋混合
→
离心分离
→
上清液加纯化水
→
继续涡旋混合。
[0012]进一步地，所述乙腈沉淀剂体积为人空白血浆或待测人血浆体积的8～12倍；所述离心分离温度为2～8℃。
[0013]进一步地，还包括取系列帕唑帕尼工作溶液分别与人空白血浆混合后配制成6～10个系列校正标样及随行质控样品，所述系列校正标样中帕唑帕尼的浓度为100～30000ng
·
mL-1
。
[0014]进一步地，所述随行质控样品包括DQC、HQC、MQC、GMQC、LQC和LLOQ QC；所述DQC中帕唑帕尼的浓度为60000ng
·
mL-1
，稀释因子为5，所述HQC、MQC、GMQC、LQC和LLOQ QC中帕唑帕尼的浓度依次分别为23000ng
·
mL-1
、12000ng
·
mL-1
、1500ng
·
mL-1
、300ng
·
mL-1
和100ng
·
mL-1
。
[0015]进一步地，所述系列帕唑帕尼工作溶液的配置过程如下：
[0016]取帕唑帕尼用二甲基甲酰胺溶解后，继续用甲醇水溶液稀释成帕唑帕尼浓度为100～30000ng
·
mL-1
的系列帕唑帕尼工作溶液；
[0017]所述内标工作溶液的配置过程如下：
[0018]取帕唑帕尼-d6用二甲基甲酰胺溶解后，继续用甲醇水溶液稀释成帕唑帕尼-d6浓度为5000～7000ng
·
mL-1
内标工作溶液；
[0019]所述甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为1:1。
[0020]进一步地，所述LC-MS/MS中的色谱条件包括：
[0021]流动相A为100％的水含0.1％甲酸和2mM乙酸铵，流动相B为100％的乙腈，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.2～0.8mL/min。
[0022]进一步地，所述色谱条件还包括，色谱柱为ACE Excel 3C18-AR，2.1
×
50mm；柱温箱温度：30～50℃；
[0023]进一步地，自动进样器清洗溶液为甲醇；自动进样器温度为8.0℃；自动进样器清洗模式为进样前清洗和进样后清洗；自动进样器洗针体积为1000μL；自动进样器进样针清洗时浸泡时间为1s；自动进样器进样体积为2.00μL。
[0024]进一步地，所述LC-MS/MS中的质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子模式、多反应监测模式；电喷雾电压：4000～60本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法，其特征在于，它包括取系列帕唑帕尼工作溶液分别与人空白血浆混合、预处理后注入LC-MS/MS中进行分析，以及向待测人血浆中加入主要由帕唑帕尼-d6配成的内标工作溶液、预处理后也注入LC-MS/MS中进行分析，以帕唑帕尼和内标帕唑帕尼-d6的色谱峰面积比为纵坐标，以人空白血浆中帕唑帕尼的浓度为横坐标制作标准曲线，根据标准曲线计算出待测人血浆样品中的帕唑帕尼浓度；所述预处理包括加入乙腈沉淀剂
→
涡旋混合
→
离心分离
→
上清液加纯化水
→
继续涡旋混合。2.根据权利要求1所述LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法，其特征在于，所述乙腈沉淀剂体积为人空白血浆或待测人血浆体积的8～12倍；所述离心分离温度为2～8℃。3.根据权利要求1所述LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法，其特征在于，还包括取系列帕唑帕尼工作溶液分别与人空白血浆混合后配制成6～10个系列校正标样及随行质控样品，所述系列校正标样中帕唑帕尼的浓度为100～30000ng
·
mL-1
。4.根据权利要求3所述LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法，其特征在于，所述随行质控样品包括DQC、HQC、MQC、GMQC、LQC和LLOQ QC；所述DQC中帕唑帕尼的浓度为60000ng
·
mL-1
，稀释因子为5，所述HQC、MQC、GMQC、LQC和LLOQ QC中帕唑帕尼的浓度依次分别为23000ng
·
mL-1
、12000ng
·
mL-1
、1500ng
·
mL-1
、300ng
·
mL-1
和100ng
·
mL-1
。5.根据权利要求1～4中任意一项所述LC-MS/MS联用检测人血浆中帕唑帕尼药物浓度的方法，其特征在于，所述系列帕唑帕尼工作溶液的配置过程如下：取帕唑帕尼用二甲基甲酰胺溶解后，继续用甲醇水溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑恒，丁玉峰，冯湘玲，曹艳，刘义伟，石友泉，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属同济医院，
类型：发明
国别省市：