脂解酶变体制造技术

本发明专利技术涉及一种具有脂肪酶活性的变异多肽，其中所述多肽可为这样的多肽，所述多肽具有的氨基酸序列与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6的成熟氨基酸序列具有至少70％同一性，其中所述多肽包含在295位处的氨基酸取代和在113、121、179和/或284位处的至少一个另外的氨基酸取代，其中所述位置是参照SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6定义的。本发明专利技术还涉及一种制备面团的方法，其中使用了如本文所公开的多肽，并且涉及由所述面团制备的烘焙产品。及由所述面团制备的烘焙产品。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】脂解酶变体


[0001]本专利技术涉及一种具有脂解活性的变异多肽、一种制备其中使用所述多肽的面团的方法、以及一种制备烘焙产品的方法。

技术介绍

[0002]在烘焙行业中，例如在工业面团和面包制作中，加工助剂通常用于改善面团和/或烘焙产品的特性。可以改善的面团特性包括稳定性、气体保持能力、弹性、可延展性、可塑性等。可改善的烘焙产品的特性包括面包条(loaf)体积、面包皮松脆性、烤焙弹性、面包瓤质地(crumb texture)、面包瓤结构、面包瓤柔软度、风味、相对陈化和保质期。
[0003]已知由全麦面粉制成的面团具有比由白面粉制成的面团更差的稳定性。因此，在醒发(proof)结束时，全麦面团损失更多的发酵气体，并且与由白面粉面团制成的烘焙产品的体积相比，全麦面团的烘焙产品的体积较小。具体地，在加工处理期间，当面团被揉捏(knocked)或捏制(jarred)时，面团体积受到攻击并且可能会部分塌陷。
[0004]谷物面粉含有一定量的脂质和游离脂肪酸，并且在面粉储存期间，例如由于内源脂质的脂解，面粉中的游离脂肪酸的量通常会增加。这在全麦面粉的储存期间最为明显(参见例如Tait和Galliard，J Cereal Sci.1988,8:125-137以及Clayton和Morrison，Sci.Food Agric.1972,23,721-735)。面粉中游离脂肪酸的量影响面团特性，例如面团稳定性，以及由所述面团制成的烘焙产品的特性。
[0005]可以将加工助剂(例如化学添加剂和酶)添加到面粉和/或面团中以改善面团或烘焙产品的特性。
[0006]化学添加剂包括乳化剂，例如充当面团调整剂的乳化剂，例如双乙酰酒石酸单/双甘油酯(DATEM)、硬脂酰乳酸钠(SSL)或硬脂酰乳酸钙(CSL)。乳化剂例如DATEM也可用于增大或控制烘焙产品的体积。消费者对化学乳化剂的抵制日益增强，因此需要非化学类替代品。
[0007]化学乳化剂的替代品为脂解酶，所述脂解酶在作用于底物时可原位产生乳化分子。例如，脂肪酶用于完全或部分替代DATEM。WO1998026057描述了可用于制作面包的方法中的磷脂酶。WO2009/106575描述了脂解酶及其在制作面包的方法中的用途。
[0008]仍需要改进的脂解酶，所述脂解酶可用作烘焙产品(例如全麦烘焙产品)制备中的加工助剂。
附图说明
[0009]图1示出了曲霉属(Aspergillus)表达载体pGBFIN-50
[0010]图2示出了曲霉属脂解酶表达载体pGBFINPL-00
[0011]序列表
[0012]SEQ ID NO:1：具有脂肪酶活性的多肽的氨基酸序列
[0013]SEQ ID NO:2：编码根据SEQ ID NO:1的具有脂肪酶活性的多肽的核苷酸序列。
[0014]SEQ ID NO:3：根据SEQ ID NO:1的具有脂肪酶活性的多肽的氨基酸序列，所述氨基酸序列在304位之后具有两个氨基酸PP的插入。
[0015]SEQ ID NO:4：编码根据SEQ ID NO:3的具有脂肪酶活性的多肽的核苷酸序列。
[0016]SEQ ID NO:5：经修饰的葡糖淀粉酶glaA启动子翻译起始序列SEQ ID NO:6：尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)脂肪酶的氨基酸序列
[0017]SEQ ID NO:7：编码经密码子优化以在黑曲霉(Aspergillus niger)中表达的尖孢镰刀菌脂肪酶的核苷酸序列。

技术实现思路

[0018]本专利技术涉及一种具有脂肪酶活性的变异多肽，其中所述多肽选自由以下项组成的组：
[0019]i.多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6的成熟氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列，其中所述多肽包含在295位处的氨基酸取代和在113、121、179和/或284位处的至少一个另外的氨基酸取代，其中所述位置是参照SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6定义的；
[0020]ii.根据i)的所述多肽，其中在295位处的所述氨基酸取代是D295G、D295N或D295S，并且所述至少一个另外的氨基酸取代是：在113位处的I113H、I113N或I113T，在121位处的氨基酸取代N121D，在179位处的氨基酸取代V179M，和/或在位置284处的氨基酸取代I284M或I284T；
[0021]iii.多肽，所述多肽与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6的成熟氨基酸序列具有至少70％同一性，其中所述多肽包含氨基酸取代(D295S和V179M)、(D295N和V179M)、(D295S、I113H和V179M)、(D295G和I113T)、(D295N和I113N)、(D295N、I113T、V179M和N112D)、(D295S、I113H、V179M和I284M)、(D295N和I113T)、(D295S、I113T、V179M和I284M)、(D295S、I113T、V179M、N121D)、(D295S、I113T和V179M)、(D295S和I113N)或(D295N和I284T)，其中所述取代是参照SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6定义的；
[0022]iv.根据i)至iii)的所述多肽，其中所述SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6的氨基酸序列在304位之后包含一个或多个氨基酸的插入；
[0023]v.根据iv)的所述多肽，其中所述SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6的成熟氨基酸序列包含插入。
[0024]本专利技术还涉及一种编码如本文所公开的具有脂肪酶活性的多肽的核酸，其中任选地所述核酸与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:7具有至少70％同一性，其中所述核酸包含编码氨基酸取代D295G、D295N或D295S和至少一个另外的氨基酸取代I113H、I113N或I113T和/或N121D和/或V179M和/或I284M或I284T的突变，其中所述氨基酸取代是参照SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6定义的，其中所述取代的位置是参照SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6定义的。
[0025]还公开了一种表达载体，所述表达载体包含如本文所公开的核酸，所述核酸可操作地连接到至少一个控制序列，所述至少一个控制序列指导所述多肽在宿主细胞中的表达。
[0026]本文还涉及一种包含如本文所公开的核酸或如本文所公开的表达载体的重组宿主细胞。
[0027]本文还涉及一种用于制备如本文所公开的多肽的方法，所述方法包括在允许所述多肽表达的条件下在合适的发酵培养基中培养宿主细胞，以及任选地回收所述多肽。
[0028]本专利技术还涉及一种用于制备面团的方法，所述方法包括将如本文所公开的多肽或包含如本文所公开的多肽的组合物添加到所述面团中；以及一种包含如本文所公开的变异多肽的面团。
[0029]本本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种具有脂肪酶活性的变异多肽，其中所述多肽选自由以下项组成的组：i.多肽，所述多肽包含与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6的成熟氨基酸序列具有至少70％同一性的氨基酸序列，其中所述多肽包含在295位处的氨基酸取代和在113、121、179和/或284位处的至少一个另外的氨基酸取代，其中所述位置是参照SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6定义的；ii.根据i)的所述多肽，其中在295位处的所述氨基酸取代是D295G、D295N或D295S，并且所述至少一个另外的氨基酸取代是：在113位处的氨基酸取代I113H、I113N或I113T，在121位处的氨基酸取代N121D，在179位处的氨基酸取代V179M，和/或在位置284处的氨基酸取代I284M或I284T；iii.多肽，所述多肽与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6的成熟氨基酸序列具有至少70％同一性，其中所述多肽包含氨基酸取代(D295S和V179M)、(D295N和V179M)、(D295S、I113H和V179M)、(D295G和I113T)、(D295N和I113N)、(D295N、I113T、V179M和N112D)、(D295S、I113H、V179M和I284M)、(D295N和I113T)、(D295S、I113T、V179M和I284M)、(D295S、I113T、V179M、N121D)、(D295S、I113T和V179M)、(D295S和I113N)或(D295N和I284T)，其中所述取代是参照SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6定义的；iv.根据i)至iii)的所述多肽，其中所述多肽在304位之后包含一个或多个氨基酸的插入，其中所述位置是参照SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6定义的；以及v.根据iv)的所述多肽，其中所述SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:6的成熟氨基酸序列包含插入。2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述SEQ ID NO:1的成熟氨基酸序列包含SEQ ID NO:1的氨基酸34至304或SEQ ID NO:6的氨基酸34至304。3.根据权利要求1或2所述的多肽，其中所述插入包含在305位和306位处的脯氨酸。4.根据权利要求1至3中任一项所述的变异多肽，其中当用于面团中时，与由包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：宙克，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：