蛋白质的制造方法和二糖的制造方法技术

本发明专利技术提供靶蛋白的制造方法和二糖的制造方法。通过含有龙胆二糖等的表达诱导物质的培养基，培养Talaromyces cellulolyticus，从而制造靶蛋白。通过利用了二糖合成酶并且从糖原料出发的酶转化而制造二糖。原料出发的酶转化而制造二糖。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】cellulolyticus，其中，
[0038]所述Talaromyces cellulolyticus具有选自下述性质(A)～(C)中的任一种性质：
[0039](A)其经过了修饰，使其与非修饰菌株相比GH1-2蛋白的活性降低；
[0040](B)其经过了修改，使得gh1-2基因具有提高Talaromyces cellulolyticus的生产靶蛋白的能力的变异；
[0041](C)它们的组合，
[0042]所述表达诱导物质为包含葡萄糖作为构成糖的糖，
[0043]其中，在所述GH1-2蛋白的活性完全消失的情况下，所述表达诱导物质为龙胆二糖。
[0044]4、所述方法，其中，
[0045]所述表达诱导物质为龙胆二糖、纤维二糖或纤维素。
[0046]5、所述方法，其中，
[0047]所述表达诱导物质为龙胆二糖。
[0048]6、所述方法，其中，
[0049]通过选自下述手段(A1)～(A4)中的任一种手段而使所述GH1-2蛋白的活性降低：
[0050](A1)降低gh1-2基因的表达；
[0051](A2)破坏gh1-2基因；
[0052](A3)对gh1-2基因进行修饰使之具有提高Talaromyces cellulolyticus的生产靶蛋白的能力的变异；以及
[0053](A4)它们的组合。
[0054]7、所述方法，其中，
[0055]所述GH1-2蛋白的活性因gh1-2基因的缺失而降低。
[0056]8、所述方法，其中，
[0057]所述变异为选自下述变异(A)～(D)中的任一种变异：
[0058](A)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的267位的半胱氨酸残基相当的氨基酸残基被其他氨基酸残基所取代的变异；
[0059](B)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的363位的色氨酸残基相当的氨基酸残基被其他氨基酸残基所取代的变异；
[0060](C)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的449位的色氨酸残基相当的氨基酸残基被其他氨基酸残基所取代的变异；
[0061](D)它们的组合。
[0062]9、所述方法，其中，
[0063]所述变异(A)～(C)分别为下述变异(A1)～(C1)：
[0064](A1)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的267位的半胱氨酸残基相当的氨基酸残基被脯氨酸残基所取代的变异；
[0065](B1)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的363位的色氨酸残基相当的氨基酸残基被苯丙氨酸残基所取代的变异；
[0066](C1)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的449位的色氨酸残基相当的氨基酸残基被苯丙氨酸残基所取代的变异。
[0067]10、所述方法，其中，
[0068]所述GH1-2蛋白为下述(a)、(b)或(c)所述的蛋白质：
[0069](a)包含SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的蛋白质；
[0070](b)包含在SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列中包含1～10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列，并且具有二糖水解活性的蛋白质；
[0071](c)包含相对于SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列具有90％以上的同源性的氨基酸序列并且具有二糖水解活性的蛋白质。
[0072]11、所述方法，其中，
[0073]所述Talaromyces cellulolyticus具有选自下述性质(A)～(D)中的任一种性质：
[0074](A)其经过了修饰，使其与非修饰菌株相比GH1-2蛋白以外的β-葡萄糖苷酶的活性降低；
[0075](B)其经过了修饰，使其与非修饰菌株相比CreA蛋白的活性降低；
[0076](C)其经过了修饰，使其与非修饰菌株相比YscB蛋白的活性降低；
[0077](D)它们的组合。
[0078]12、所述方法，其中，
[0079]所述β-葡萄糖苷酶为BGL3A蛋白。
[0080]13、所述方法，其中，
[0081]所述Talaromyces cellulolyticus为源自Talaromyces cellulolyticus S6-25菌株(NITE BP-01685)或Y-94菌株(FERM BP-5826)的修饰菌株。
[0082]14、所述方法，其中，
[0083]通过所述培养而使靶蛋白积蓄在所述培养基中。
[0084]15、所述方法，其中，
[0085]靶蛋白在利用所述表达诱导物质对在Talaromyces cellulolyticus中发挥功能的诱导性启动子进行控制之下进行表达。
[0086]16、所述方法，其中，
[0087]所述启动子为cbhI启动子或cbhII启动子。
[0088]17、所述方法，其中，
[0089]靶蛋白作为与在Talaromyces cellulolyticus中发挥功能的信号肽形成的融合蛋白而进行表达。
[0090]18、所述方法，其中，
[0091]靶蛋白为纤维素酶。
[0092]19、所述方法，其进一步包含下述工序：
[0093]通过利用了二糖合成酶并且从糖原料出发的酶转化而制造所述龙胆二糖。
[0094]20、所述方法，其中，
[0095]所述酶转化通过使含有二糖合成酶的大肠杆菌的菌体与糖原料接触而实施。
[0096]21、所述方法，其中，
[0097]所述糖原料为选自葡萄糖、纤维二糖和纤维素中的1种或1种以上的糖原料。
[0098]22、一种二糖的制造方法，其包含下述工序：
[0099]通过使含有二糖合成酶的大肠杆菌(Escherichia coli)的菌体与糖原料接触而
生成二糖。
[0100]23、所述方法，其中，
[0101]所述二糖合成酶为β-葡萄糖苷酶。
[0102]24、所述方法，其中，
[0103]所述β-葡萄糖苷酶为GH1-2蛋白或BGL3A蛋白。
[0104]25、所述方法，其中，
[0105]所述二糖合成酶为下述(a)、(b)或(c)所述的蛋白质：
[0106](a)包含SEQ ID NO.23或38所示的氨基酸序列的蛋白质；
[0107](b)包含在SEQ ID NO.23或38所示的氨基酸序列中包含1～10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列，并且具有对由糖原料合成二糖的反应进行催化的活性的蛋白质；
[0108](c)包含相对于SEQ ID NO.23或38所示的氨基酸序列具有90％以上的同源性的氨基酸序列，并且具有对由糖原料合成二糖的反应进行催化的活性的蛋白质。
[0109]26、所述方法，其中，
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种靶蛋白的制造方法，其包含下述工序：通过含有表达诱导物质的培养基，培养具有生产靶蛋白的能力的Talaro myces cellulolyticus，其中，所述表达诱导物质为龙胆二糖。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述Talaromyces cellulolyticus具有选自下述性质(A)～(C)中的任一种性质：(A)其经过了修饰，使其与非修饰菌株相比GH1-2蛋白的活性降低；(B)其经过了修饰，使得gh1-2基因具有提高Talaromyces cellulolyticus的生产靶蛋白的能力的变异；(C)它们的组合。3.一种靶蛋白的制造方法，其包含下述工序：通过含有表达诱导物质的培养基，培养具有生产靶蛋白的能力的Talaro myces cellulolyticus，其中，所述Talaromyces cellulolyticus具有选自下述性质(A)～(C)中的任一种性质：(A)其经过了修饰，使其与非修饰菌株相比GH1-2蛋白的活性降低；(B)其经过了修改，使得gh1-2基因具有提高Talaromyces cellulolyticus的生产靶蛋白的能力的变异；(C)它们的组合，所述表达诱导物质为包含葡萄糖作为构成糖的糖，其中，在所述GH1-2蛋白的活性完全消失的情况下，所述表达诱导物质为龙胆二糖。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述表达诱导物质为龙胆二糖、纤维二糖或纤维素。5.根据权利要求3或4所述的方法，其中，所述表达诱导物质为龙胆二糖。6.根据权利要求2～5中任一项所述的方法，其中，通过选自下述手段(A1)～(A4)中的任一种手段而使所述GH1-2蛋白的活性降低：(A1)降低gh1-2基因的表达；(A2)破坏gh1-2基因；(A3)对gh1-2基因进行修饰使之具有提高Talaromyces cellulolyticus的生产靶蛋白的能力的变异；以及(A4)它们的组合。7.根据权利要求2～6中任一项所述的方法，其中，所述GH1-2蛋白的活性因gh1-2基因的缺失而降低。8.根据权利要求2～7中任一项所述的方法，其中，所述变异为选自下述变异(A)～(D)中的任一种变异：(A)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的267位的半胱氨酸残基相当的氨基酸残基被其他氨基酸残基所取代的变异；(B)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的363位的色氨酸残基相当的氨基酸残基被其他氨基酸残基所取代的变异；
(C)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的449位的色氨酸残基相当的氨基酸残基被其他氨基酸残基所取代的变异；(D)它们的组合。9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述变异(A)～(C)分别为下述变异(A1)～(C1)：(A1)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的267位的半胱氨酸残基相当的氨基酸残基被脯氨酸残基所取代的变异；(B1)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的363位的色氨酸残基相当的氨基酸残基被苯丙氨酸残基所取代的变异；(C1)与SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的449位的色氨酸残基相当的氨基酸残基被苯丙氨酸残基所取代的变异。10.根据权利要求2～9中任一项所述的方法，其中，所述GH1-2蛋白为下述(a)、(b)或(c)所述的蛋白质：(a)包含SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列的蛋白质；(b)包含在SEQ ID NO.23所示的氨基酸序列中包含1～10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的氨基酸序列，并且具有二糖水解活性的蛋白质；(c)包含相对于SEQ ID NO.23...

【专利技术属性】
技术研发人员：矢萩大贵，吉田绘梨香，深田宽朗，十仓充范，田上宇乃，杉木正之，
申请(专利权)人：味之素株式会社，
类型：发明
国别省市：