一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基制造技术

本发明专利技术提供一种适用于香灰菌生物发酵合成2

【技术实现步骤摘要】
一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基


[0001]本专利技术涉及涉及微生物发酵领域，具体涉及一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基。

技术介绍

[0002]2-苯乙醇是一种玫瑰香型的风味物质，世界每年产量约10000吨。能够抑制革兰氏阴性菌、球菌、杆菌以及部分真菌；它还是合成一些高附加值药物比如苯乙醇苷的底物，具有抗菌、抗肿瘤、强心等作用，故 2-苯乙醇在医药卫生领域也有重要应用。在饮料行业，2-苯乙醇是一种重要的食品添加剂，用于调节饮料的风味，除此之外它也是化妆品或者香水中的重要香味物质之一。2-苯乙醇可以在玫瑰花瓣中提取得到，但是成本过高，得率较低，因此目前主要通过化工合成的方式来获得，由于化工合成的过程中会含有苯类以及乙烯类有毒有害物质，添加到食品中会对食品安全造成一定的威胁，因此生物合成2-苯乙醇的方式成为当今研究的热点。
[0003]目前发现生物合成2-苯乙醇的方式是利用酿酒酵母的艾里希通路（Ehrlich pathway）通过L-苯丙氨酸生物转化合成2-苯乙醇或者利用碳源从头合成。天然的2-苯乙醇供不应求，开发新的菌种用于生产2-苯乙醇尤为重要。本专利技术则是一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基，香灰菌是银耳的伴生菌，无毒无害，对于食品添加剂而言，安全性是评价食品添加剂质量的重要因素，因此该菌株对食品添加剂天然2-苯乙醇的生产具有很重要的意义，本配方可以提高金鸡岭菌株2-苯乙醇的产量。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基。
[0005]实现本专利技术目的的技术解决方案为：一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基，每1000 mL水中含有马铃薯200～800 g，L-苯丙氨酸2～8 g，麦芽糖20～100 g，硫酸镁0.1～0.4 g，pH值自然。
[0006]优选的，每1000 mL水中含有马铃薯600 g，L-苯丙氨酸6 g，麦芽糖40g，硫酸镁0.3g，pH值自然。
[0007]所述香灰菌为暗色环纹炭团菌（Annulohypoxylon stygium）金鸡岭，已于2020年9月14日在中国典型培养物保藏中心保藏，其保藏编号为CCTCC NO：M 2020504，地址为武汉大学。
[0008]所述香灰菌分离至古田县金鸡岭分离得到的。
[0009]其具体实施步骤如下：（1）培养基制备：按照上述培养基配方称取马铃薯，加水浸提25 min，6层纱布过滤，滤液加入一定比例的麦芽糖、L-苯丙氨酸、硫酸镁混匀充分溶解，高温121℃灭菌20 min。
[0010]（2）菌种活化：香灰菌菌种在PDA试管培养基上转接活化2次，将香灰菌菌种用接种针挖取约1 cm3的小块接种到含有PDA培养基的培养皿中培养4 d，在培养皿同一半径上用
直径0.5 cm的打孔器打孔制备菌种块，接种至含有100 mLPDB培养基的三角瓶中，每瓶接种两块，置于28℃恒温摇床中，以160 r/min的振荡速度培养4d得到活化菌液。
[0011]（3）接种：准确量取10 mL菌液接种到含有100 mL上述配方培养基的三角瓶中，至于28℃恒温摇床中，以160 r/min的振荡速度培养6 d，将发酵液4000 r/min离心10 min，取上清液0.22 um尼龙微孔滤膜过滤，滤液即为香灰菌发酵液样品，待上机检测。
[0012]（4）检测：采用高效液相色谱法进行香灰菌发酵液样品中2-苯乙醇含量的检测。
[0013]本专利技术的优点：1、提供一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基配方，为2-苯乙醇产业发展提供技术依据。
[0014]2、培养基成分简单，便宜，操作方便，成本低，便于工厂化实施。
附图说明
[0015]图1为不同马铃薯添加量生物转化生成2-苯乙醇的含量柱形图。
[0016]图2为不同L-苯丙氨酸添加量生物转化生产2-苯乙醇的含量柱形图。
[0017]图3为不同麦芽糖添加量生物转化生产2-苯乙醇的含量柱形图。
[0018]图4为不同硫酸镁添加量生物转化生产2-苯乙醇的含量柱形图。
具体实施方式
[0019]实施例1菌株的获得（1）形态学鉴定将古田县金鸡岭分离得到的香灰菌金鸡岭菌株进行活化1次，用直径0.5 cm的打孔器按同一半径打孔制备菌种块，配制PDA培养基，将培养基121℃20 min高压灭菌后倒平皿，将金鸡岭菌株的菌种块接种到培养皿上28℃恒温培养4 d，观察菌丝生长情况。结果得出金鸡岭为白色丝状真菌。
[0020]（2）ITS分子鉴定方法与结果：采用ILLUMINA测序，拼接获得金鸡岭菌株全基因组序列；到NCBI中下载Annulohypoxylon stygium（香灰菌）的ITS序列作为参照；通过本地blast定位并抽取基因组中对应的ITS序列（结果中的金鸡岭ITS序列）；将抽取的序列在NCBI中的nt库进行比对，找到匹配最好的序列（Annulohypoxylon stygium isolate XH10，登录号：FJ848859），两个序列相似性为100%，说明金鸡岭与Annulohypoxylon stygium isolate XH10属于同一个种，即为暗色环纹炭团菌（Annulohypoxylon stygium）金鸡岭。
[0021]金鸡岭菌株的ITS序列：CCGTTGGTGA ACCAGCGGAG GGATCATTAC TGAGTTATCA AAAACTCCAACCCTTTGTGA ACCTACCTAT GTTTCCTCCG GCGTACCGCT TTAGCCTACCCACAGGGCTC CCCTAAGGGG GGGTTCTGCT GGGGAGGTGC CTGAGTGCTACCCATCCTTC GGGGTACGGT TAGTGCAGTG AAGGTGCTGA CCAAGGCCTCGGCGGCGCCG AGTAGGACCG CTCCAAACTT AAGCACCTAG TGCATCCAAC CCCGCGTTGA ACAACTATCG AAAATCTGCT TTTGCTTTTT TTCTTTACGCTAAAACGTCT TTCCTGGTTG GAATTATTGC TCGAAATAAT AATTTCTTTA
CCCTGCAGTCGTTTGTTTTCAAGCTACAATATCTGCTCGAAAATTGTTCAAAGCTCTGAG GGGTCTGAATGAATTCATAAAATTGGCAAAAGCCACCTATAAACTACGGTTCTTAGGGGG TGATCAAACCAAGGTTTTAAAAACCAAATCGTTAAAACT TTCAACAACG GATCTCTTGG TTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAATGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCATTAGTATTCTAGTGG GC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基，其特征在于，每1000 mL水中含有马铃薯200～800 g，L-苯丙氨酸2～8 g，麦芽糖20～100 g，硫酸镁0.1～0.4 g，pH值自然。2.根据权利要求1所述的一种适用于香灰菌生物发酵合成2-苯乙醇的培养基，其特征在于，每1000 mL水中含有马铃薯600 g，L-苯丙氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓优锦，杨立志，江玉姬，林隆基，宋燕娇，谢宝贵，李岳峰，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：