控制糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法技术

本发明专利技术涉及控制糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法。本方法包括通过选择合适的温度和/或pH来控制去岩藻糖基化水平。本发明专利技术还涉及根据本发明专利技术方法产生的糖蛋白组合物。及根据本发明专利技术方法产生的糖蛋白组合物。及根据本发明专利技术方法产生的糖蛋白组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】控制糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法


[0001]本专利技术涉及调控糖蛋白组合物中去岩藻糖基化种类比例的方法，还涉及通过本专利技术方法获得的组合物。背景
[0002]在蛋白质表达期间，其通常会经历翻译后修饰，这些修饰包括糖部分的附连。此类糖基化对于蛋白质的生物学活性可具有深远的影响。例如，抗体依赖性细胞毒性(ADCC)是许多治疗性抗体的重要作用机理，该毒性依赖于抗体的岩藻糖基化水平。
[0003]具体而言，已发现岩藻糖基化量降低的单克隆抗体相较于其岩藻糖基化的对应抗体而言具有更高的ADCC。
[0004]需要控制糖蛋白组合物中的翻译后修饰，例如控制去岩藻糖基化水平。

技术实现思路

[0005]本专利技术人已发现通过改变温度和/或pH能够受控地调控蛋白质去岩藻糖基化水平。
[0006]具体而言，本公开涉及如下内容：1.根据(A)或(B)控制糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法：(A)一种相较于糖蛋白组合物的参比去岩藻糖基化水平提高该糖蛋白组合物的去岩藻糖基化水平的方法，其中，所述方法包括：在一定温度和/或pH下培养表达糖蛋白的真核细胞，所述温度和/或pH低于培养表达其去岩藻糖基化水平为参比去岩藻糖基化水平的糖蛋白的所述细胞所用的pH和/或温度；或者(B)一种相较于糖蛋白组合物的参比去岩藻糖基化水平降低该糖蛋白组合物的去岩藻糖基化水平的方法，其中，所述方法包括：在一定温度和/或pH下培养表达糖蛋白的真核细胞，所述温度和/或pH高于培养表达其去岩藻糖基化水平为参比去岩藻糖基化水平的糖蛋白的所述细胞所用的pH和/或温度。2.如项目1所述的方法，其中，仅温度(A)低于或(B)高于培养表达其去岩藻糖基化水平为参比去岩藻糖基化水平的糖蛋白的所述细胞所用的温度。3.如项目1所述的方法，其中，仅pH(A)低于或(B)高于培养表达其去岩藻糖基化水平为参比去岩藻糖基化水平的糖蛋白的所述细胞所用的pH。4.如项目1所述的方法，其中，温度和pH均(A)低于或(B)高于培养表达其去岩藻糖基化水平为参比去岩藻糖基化水平的糖蛋白的所述细胞所用的pH和温度。5.如项目1-4中任一项所述的方法，其中，所述真核细胞为哺乳动物细胞。6.如项目5所述的方法，其中，所述哺乳动物细胞为CHO细胞。7.如项目1-6中任一项所述的方法，其中，所述糖蛋白为抗体或抗体片段。8.如项目1-7中任一项所述的方法，其中，pH和/或温度的变化限于生产阶段。
9.可通过项目1-8中任一项所述的方法获得的糖蛋白组合物。10.一种试剂盒，其包含项目9所述的糖蛋白组合物和使用说明书。
[0007]就本专利技术任何具体方面而言的任何特征(包括可选的、适宜的和优选的特征)也可为就本专利技术其他方面而言的特征(包括可选的、适宜的和优选的特征)。
附图说明
[0008]图1显示了pH和温度对总去岩藻糖基化聚糖的水平(＝A0+A1+A2+M4+M5+M6+M7+M8)的组合作用。所指示的pH是指用于培养第5天和第17天之间的pH上限。
[0009]图2显示了pH和温度对总高甘露糖聚糖的水平(＝M4+M5+M6+M7+M8)的组合作用。
[0010]图3显示了pH和温度对M6糖型(包含6个甘露糖的高甘露糖类型)水平的组合作用。
[0011]图4显示了获自低去岩藻糖基化过程和高去岩藻糖基化过程的阿达木单抗样品的总去岩藻糖基化聚糖的水平(＝A0+A1+A2+M4+M5+M6+M7+M8)和总高甘露糖聚糖的水平(＝M4+M5+M6+M7+M8)。
[0012]图5显示了获自低去岩藻糖基化过程和高去岩藻糖基化过程的阿达木单抗样品的总半乳糖基化聚糖的水平(＝“FA2G1-1”+”FA2G1-2”+FA2G2+”Hybrid-F”)和总G0水平。
[0013]图6显示获自低去岩藻糖基化过程和高去岩藻糖基化过程的阿达木单抗样品的电荷变体分布。
[0014]图7显示获自低去岩藻糖基化过程和高去岩藻糖基化过程的阿达木单抗样品的去岩藻糖基化聚糖的水平。专利技术具体实施方式
[0015]本专利技术的一些实施方式中涉及控制糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法，以及根据该方法获得的糖蛋白组合物。
[0016]在对本专利技术的至少一个实施方式进行详细解释之前，应理解本专利技术的应用并不必受限于以下描述中的细节或实施例中的示例。本专利技术可以具有其它实施方式或以各种方式予以实施和执行。
[0017]为了控制糖蛋白组合物的去岩藻糖基化水平，本专利技术人以各种方式深入研究了糖蛋白生产过程的操作，包括在细胞培养过程中加入培养基进料和参数调节。绝大部分测试的参数对去岩藻糖基化水平没有影响。然而，本专利技术人观察到去岩藻糖基化水平与表达糖蛋白的细胞培养物pH或温度之间的相关性。具体而言，发现了对这两个参数中任一个的操控均与去岩藻糖基化水平的变化相关，并且与单独操控这两个参数之一相比，组合调节这两个参数可进一步提高去岩藻糖基化水平的变化。不限于理论，据信温度和pH对去岩藻糖基化水平的作用至少部分有赖于高尔基体的应激(stress)，并由此不受限于所表达的具体糖蛋白以及用于表达该糖蛋白的具体细胞。
[0018]因此，本专利技术涉及通过调节表达糖蛋白的细胞培养物的温度和/或pH来控制糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法。优选地，同时改变pH和温度。
[0019]本文中提供了一种通过降低表达糖蛋白的细胞培养物的pH和/或温度来提高糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法。本文中还提供了一种通过提高表达糖蛋白的细胞培养物的pH和/或温度来降低糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法。在一些实施方式中，与表达其去岩藻糖基化水平作为参比值的糖蛋白的细胞培养物的pH和/或温度相比，降低或提
高pH和/或温度。
[0020]提供了一种控制糖蛋白组合物的去岩藻糖基化水平的方法，所述方法包括培养表达所述糖蛋白的细胞，并调整该细胞培养物的温度和/或pH以匹配所需糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平。
[0021]提供了控制糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法，其包括如下步骤：(a)将通过在起始温度和/或pH下培养表达所述糖蛋白的细胞获得的糖蛋白组合物的去岩藻糖基化水平与所需去岩藻糖基化水平比较；(b)确定通过在起始温度和/或pH下培养表达所述糖蛋白的细胞获得的去岩藻糖基化水平是否低于或高于所需去岩藻糖基化水平；以及(c)(i)如果通过在起始温度和/或pH下培养表达所述糖蛋白的细胞获得的去岩藻糖基化水平低于所需去岩藻糖基化水平，则在低于所述起始温度和/或pH的温度和/或pH下培养表达所述糖蛋白的细胞；或者(i)如果通过在起始温度和/或pH下培养表达所述糖蛋白的细胞获得的去岩藻糖基化水平高于所需去岩藻糖基化水平，则在高于所述起始温度和/或pH的温度和/或pH下培养表达所述糖蛋白的细胞。
[0022]在本专利技术的方法中，为了选择用于培养细胞的温度和pH，考虑了公知标准，例如细胞活力和蛋白质产量。培养过程通常分为生长和生产阶段。在生长阶段选择促进细胞指数生长的条件，而在生产阶段则选择促进蛋白质生产本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.根据(A)或(B)控制糖蛋白组合物去岩藻糖基化水平的方法：(A)一种相较于糖蛋白组合物的参比去岩藻糖基化水平提高该糖蛋白组合物的去岩藻糖基化水平的方法，其中，所述方法包括：在一定温度和/或pH下培养表达糖蛋白的真核细胞，所述温度和/或pH低于培养表达其去岩藻糖基化水平为参比去岩藻糖基化水平的糖蛋白的所述细胞所用的pH和/或温度；或者(B)一种相较于糖蛋白组合物的参比去岩藻糖基化水平降低该糖蛋白组合物的去岩藻糖基化水平的方法，其中，所述方法包括：在一定温度和/或pH下培养表达糖蛋白的真核细胞，所述温度和/或pH高于培养表达其去岩藻糖基化水平为参比去岩藻糖基化水平的糖蛋白的所述细胞所用的pH和/或温度。2.如权利要求1所述的方法，其中，仅温度相对于培养表达其去岩藻糖基化水平为参比去岩藻糖基化水平的糖蛋白的所述细胞所用的温度而言发生变化，而pH保持不变。3.如权利要求1所述的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：阿雷斯贸易股份有限公司，
类型：发明
国别省市：