一种检测多重耐药质粒水平转移的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用携带luxCDABE基因簇的受体菌检测多重耐药质粒水平转移能力的方法，包括融合载体构建、整合载体构建、荧光受体菌构建、供体菌和受体菌的接合、接合子的筛选、耐药性和发光性的检测及验证等步骤。本发明专利技术结合受体菌的荧光性和多重耐药质粒的耐药性，可以区分供体菌、受体菌和接合子，从而检测多重耐药质粒水平转移的能力。多重耐药质粒水平转移的能力。

【技术实现步骤摘要】
一种检测多重耐药质粒水平转移的方法


[0001]本专利技术涉及利用携带luxCDABE基因簇的受体菌验证多重耐药质粒是否具有水平转移能力，属于生物


技术介绍

[0002]luxAB基因编码荧光素酶，luxCDE基因编码反应底物合成酶合成底物。若在该基因簇上游引入一个外源启动子，则表达的荧光素酶催化底物发出荧光，使受体菌具有荧光特性。质粒根据能否移动可分为：不可移动性质粒、可移动性质粒和可接合性质粒。可移动性质粒由于缺少四型分泌系统（type-IV secretion system，T4SS）基因簇，只有在辅助质粒的协助下才能够进行水平转移。可接合性质粒携带着自我转移所需的所有基因，可自主进行水平转移。质粒能够通过接合作用驱动抗生素抗性基因的水平转移(horizontal gene transfer，HGT)，耐药质粒的水平转移在耐药基因的传播和多重耐药病原菌的出现方面起着关键作用。耐药质粒的水平转移给病原菌临床治疗带来很多困难，对临床致病菌所携带耐药质粒水平转移的研究将有助于理解多重耐药细菌传播路径及机理。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用携带luxCDABE基因簇的受体菌检测多重耐药质粒水平转移能力的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）融合载体构建以铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板PCR 扩增PA1863基因的启动子，将其克隆到pMS402载体，此质粒标记为pKD-PA1863；（2）整合载体构建质粒CTX-6.1与质粒pKD-PA1863通过PacI单酶切后连接，得到的整合重组质粒，标记为CTX-PA1863-lux；（3）荧光受体菌构建蔗糖法制备铜绿假单胞菌PAO1感受态细胞；将CTX-PA1863-lux质粒电转化至感受态细胞，筛选出的受体菌，标记为PAO1-lux，作为受体菌；（4）供体菌和受体菌的接合含有耐药质粒的供体菌和PAO1-lux受体菌分别培养至对数生长期后，将供体菌和受体菌按重量1∶3比例混合均匀...

【专利技术属性】
技术研发人员：李蒙，张亚妮，梁海华，
申请(专利权)人：西北大学，
类型：发明
国别省市：