一种预装串联亲和层析柱制造技术

本实用新型专利技术公开了一种预装串联亲和层析柱，包括柱管，所述柱管的上部和下部分别设有上密封盖和下密封盖，上密封盖上部设有进液口，下密封盖底部设有出液口，柱管内部从上到下设有若干层筛板，相邻两个筛板之间填充亲和介质。所述柱管内底部设有底层筛板，底层筛板上部填充亲和介质二，亲和介质二上方设有中层筛板，中层筛板上部填充亲和介质一，亲和介质一上方设有上层筛板，两种亲和介质具有较小的交叉反应，两种亲和介质在空间上不相连。本实用新型专利技术的有益效果为：该亲和层析柱能够简化纯化和去标签步骤，不需要梯度洗脱及脱盐等步骤，让纯化和去标签在同一柱子上完成，操作简单、快捷方便。快捷方便。快捷方便。

【技术实现步骤摘要】
一种预装串联亲和层析柱


[0001]本技术涉及层析柱
，具体是指一种预装串联亲和层析柱。

技术介绍

[0002]蛋白表达和纯化是生物学研究以及工业医药等生产中常用的一种实验技术。其利用蛋白质的分子量大小，疏水性亲水性等性质，通过各类相应的层析柱及其他方式，将从目的蛋白从蛋白混合液中分离出来。其中亲和层析因为特异性和产量高成为一般蛋白纯化的首选方式。但是亲和层析需要在目的蛋白质上携带标签。
[0003]为了将标签去除，常用的方法是在标签和蛋白之间加上特异性蛋白酶切割位点，利用特定标签纯化后加入含有同标签的特异性酶切割，反应完成后，利用该标签亲和层析收集流穿即为所要获得的目的蛋白溶液。这一过程中需要经过两次纯化，还需要对第一次纯化的蛋白脱盐。柱上酶切可以避免多次繁琐的步骤，但使用同种标签的酶将使酶与底物在空间上存在不完全交叉的情况影响反应。若使用非标签的酶则会使产物需要二次纯化。

技术实现思路

[0004]本技术要解决的技术问题是克服以上技术缺陷，提供一种预装串联亲和层析柱，能够简化纯化和去标签步骤，不需要梯度洗脱及脱盐等步骤，让纯化和去标签在同一柱子上完成。
[0005]为了达到上述技术目的，本技术采用的技术方案为：一种预装串联亲和层析柱，包括柱管，所述柱管的上部和下部分别设有上密封盖和下密封盖，上密封盖上部设有进液口，下密封盖底部设有出液口，柱管内部从上到下设有若干层筛板，相邻两个筛板之间填充亲和介质。
[0006]进一步的，所述筛板与管壁之间紧密结合，亲和介质与筛板之间也紧密结合，不留空隙。
[0007]进一步的，所述柱管内底部设有底层筛板，底层筛板上部填充亲和介质二，亲和介质二上方设有中层筛板，中层筛板上部填充亲和介质一，亲和介质一上方设有上层筛板，两种亲和介质具有较小的交叉反应，两种亲和介质在空间上不相连。
[0008]进一步的，所述亲和介质一、亲和介质二分别以两个大小不同的标签为介质。
[0009]进一步的，两种亲和介质中，位于上部的亲和介质一的介质单位体积结合更多的蛋白，单位体积结合更多蛋白的介质在上层，目的蛋白获得更高的浓度。
[0010]进一步的，所述上密封盖和下密封盖均采用拆卸式螺口盖，用于与压力系统连接。
[0011]本技术的有益效果为：该亲和层析柱能够简化纯化和去标签步骤，不需要梯度洗脱及脱盐等步骤，让纯化和去标签在同一柱子上完成，操作简单、快捷方便。
附图说明
[0012]图1是本技术一种预装串联亲和层析柱的结构示意图。
[0013]如图所示：11、进液口，12、上密封盖，21、柱管，22、上层筛板，23、亲和介质一， 24、中层筛板，25、亲和介质二，26、底层筛板，31、下密封盖，32、出液口。
具体实施方式
[0014]下面将结合本技术实施例，对本技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本技术保护的范围。
[0015]结合附图，一种预装串联亲和层析柱，包括柱管21，所述柱管21的上部和下部分别设有上密封盖12和下密封盖31，上密封盖12上部设有进液口11，下密封盖31底部设有出液口32，柱管21内部从上到下设有若干层筛板，相邻两个筛板之间填充亲和介质。所述筛板与管壁之间紧密结合，亲和介质与筛板之间也紧密结合，不留肉眼可见的空隙。多余的空隙将使得蛋白溶液在其中被混合稀释，影响纯化的效果。所述柱管21内底部设有底层筛板26，底层筛板26上部填充亲和介质二25，亲和介质二25上方设有中层筛板24，中层筛板24上部填充亲和介质一23，亲和介质一23上方设有上层筛板22，两种亲和介质具有较小的交叉反应，两种亲和介质在空间上不相连。下方的筛板阻止下层介质泄漏，中层筛板24阻止两种介质混合，上层筛板22滤过上样蛋白混合液中的颗粒。所述亲和介质一23、亲和介质二25 分别以两个大小不同的标签为介质，均使用小标签可能存在因位置而引起的结合效率不高的问题，均使用大标签则导致融合蛋白过大不利于表达和纯化。两种亲和介质中，位于上部的亲和介质一23的介质单位体积结合更多的蛋白，单位体积结合更多蛋白的介质在上层，目的蛋白获得更高的浓度。上方介质初步结合目的蛋白，下方介质在酶切后结合酶以及微量脱落的含该标签蛋白，如未切割或切割的标签部分。所述上密封盖12和下密封盖31均采用拆卸式螺口盖，用于与压力系统连接。
[0016]本技术提供的预装柱用于小标签-大标签-tev位点-目的蛋白的融合蛋白的纯化和去标签，含有目的蛋白的混合液从进液口11进入，目的蛋白结合在上层介质中，利用下层洗脱液洗脱，并使用tev酶缓冲液平衡后加入下层结合的标签-tev酶酶切后，流穿即为目的蛋白。
[0017]本具体实施例以用来纯化His6-MBP-TEV-目的蛋白并去除其标签的Ni离子亲和-Amylose 串联小型柱展示本技术方案的实现和使用。
[0018]本具体实施例中使用可拆卸上下进出液口32的螺口设计空柱，亦可采用一体式重力柱空柱。筛板为蛋白层析柱中常用的筛板，可以通过溶液但不能通过介质颗粒。
[0019]当空柱准备完毕后，将与空柱出液口32内底面同样大小的下层筛板紧密镶嵌于内底面。该筛板上填充0.5ml Amylose介质(每1ml介质约可以结合6mg MBP融合蛋白)，Amylose介质上方以同样的筛板封口，且不留明显空隙，筛板与管壁紧密结合。该层筛板以上填充1-2mlNi-NTA(也可以使用其他种类Ni离子介质)，其上再次以筛板封口，用来过滤初始蛋白混合液中未能去除的颗粒，并减少上样对介质冲刷的影响。
[0020]纯化前，使用结合缓冲液平衡该层析柱。将含有His6-MBP-tev-目的蛋白的蛋白混合液通过层析柱，His6-MBP-tev-目的蛋白将大多数结合在上层Ni-NTA上。再使用6倍柱体积的结合缓冲液洗去非特异性结合的蛋白，含有适当浓度麦芽糖的结合缓冲液洗脱
Amylose上结合的蛋白。Tev酶反应buffer平和层析柱，并加入0.5ml上层填料体积的MBP-Tev酶(含1mg)， 30℃孵育3h或4℃过夜。利用不含咪唑和麦芽糖的洗脱缓冲液将切下的蛋白洗脱，可分步收集2-3ml体积，扫描和跑胶检测。
[0021]以上对本技术及其实施方式进行了描述，这种描述没有限制性，只是本技术的实施方式之一，实际的实施方式并不局限于此。总而言之如果本领域的普通技术人员受其启示，在不脱离本技术创造宗旨的情况下，不经创造性的设计出与该技术方案相似的结构方式及实施例，均应属于本技术的保护范围。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种预装串联亲和层析柱，包括柱管，其特征在于：所述柱管的上部和下部分别设有上密封盖和下密封盖，上密封盖上部设有进液口，下密封盖底部设有出液口，柱管内部从上到下设有若干层筛板，相邻两个筛板之间填充亲和介质。2.根据权利要求1所述的一种预装串联亲和层析柱，其特征在于：所述筛板与管壁之间紧密结合，亲和介质与筛板之间也紧密结合，不留空隙。3.根据权利要求1所述的一种预装串联亲和层析柱，其特征在于：所述柱管内底部设有底层筛板，底层筛板上部填充亲和介质二，亲和介质二上方设有...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈静，马铁群，
申请(专利权)人：南偲生物科技南京有限公司，
类型：新型
国别省市：