死抗原刺激的未成熟异源性树突细胞作为疾病治疗剂制造技术

本文公开了外源性抗原致敏的未成熟树突细胞。树突细胞也可以是死的。外源性抗原致敏的未成熟树突细胞可用于引发增加的免疫反应。还提供了包含外源性抗原致敏的未成熟树突细胞的疫苗，在患者中诱导免疫反应的方法，和治疗疾病的方法。疗疾病的方法。疗疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】死抗原刺激的未成熟异源性树突细胞作为疾病治疗剂
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2018年1月18日提交的美国临时申请第62/619,018号的优先权，其通过引用全文纳入本文。


[0003]本公开涉及树突细胞，疫苗和包含其的治疗剂。
[0004]引言
[0005]抗原致敏的树突细胞(DC)已被研究并用作治疗各种疾病的疫苗。然而，一些报告表明免疫诱导需要成熟的树突细胞，而据报道，未成熟的树突细胞在癌症或病毒感染的情况下诱导免疫力差或导致临床结果差。常规疫苗还包括活DC。然而，对DC在免疫调节和应答中的功能的理解受到限制，并且很少有疗法成功地发展到临床应用。

技术实现思路

[0006]一方面，本公开涉及用于患者的疫苗。疫苗可包括抗原致敏的未成熟树突细胞，其中所述树突细胞对于患者是外源的。在一些实施方式中，树突细胞来自与患者相同物种的对象。在一些实施方式中，树突细胞来自比患者年轻并且与患者相同物种的对象。在一些实施方式中，树突细胞来自与患者不同物种的对象。在一些实施方式中，树突细胞是死的。在一些实施方式中，树突细胞通过超声处理，热处理，冻干或其组合被杀死。在一些实施方式中，树突细胞是裂解的细胞或其一部分。在一些实施方式中，树突细胞尚未通过用选自TNFα，IL6和IL1α的细胞因子刺激而成熟。在一些实施方式中，与包含成熟树突细胞的疫苗相比，该疫苗诱导增加的免疫反应。在一些实施方式中，疫苗诱导与由包含患者自体的树突细胞的疫苗诱导的应答类似的免疫反应。在一些实施方式中，树突细胞通过与抗原接触而被抗原致敏。在一些实施方式中，使树突细胞与抗原体外接触。在一些实施方式中，抗原包括肽，蛋白质，碳水化合物，脂质或其组合。在一些实施方式中，抗原包含肽。在一些实施方式中，树突细胞衍生自血液或骨髓。在一些实施方式中，树突细胞是单核细胞衍生的未成熟树突细胞。
[0007]在另一方面，本公开涉及在患者中诱导免疫反应的方法。该方法可以包括向患者给予本文详述的疫苗。在一些实施方式中，疫苗激活T细胞应答，T细胞免疫，B细胞应答或其组合。在一些实施方式中，疫苗以多剂量给予患者。在一些实施方式中，疫苗每两周给予患者。在一些实施方式中，患者患有选自癌症，自身免疫病，感染性疾病和神经疾病的疾病。在一些实施方式中，神经疾病包括阿尔茨海默氏病(AD)。
[0008]本公开的另一方面提供了配制疫苗的方法。该方法可以包括获得未成熟树突细胞；使未成熟树突细胞与抗原接触以形成未成熟抗原致敏的树突细胞；和配制包含未成熟抗原致敏树突细胞和药学上可接受的运载体的疫苗。在一些实施方式中，该方法进一步包括杀死未成熟的抗原致敏的树突细胞。在一些实施方式中，杀死包括超声处理，热处理，冻干或其组合。在一些实施方式中，树突细胞衍生自血液或骨髓。在一些实施方式中，树突细
胞是单核细胞衍生的未成熟树突细胞。
[0009]根据下面的详细描述和附图，本公开提供了其他方面和实施方式，这些方面和实施方式将是显而易见的。
附图说明
[0010]图1A和图1B是示出树突细胞成熟的流式结果和作为疫苗的肽致敏的成熟和未成熟树突细胞的免疫反应的两个图。图1A是树突细胞成熟的流式细胞仪结果。用于此的细胞表面标志物是CD80，CD86，MHCII和CD11b。用于成熟的细胞因子是人IL1α，IL6和TNFα。图1B是用肽(Aβ)致敏的未成熟树突细胞(绿色)，肽致敏的成熟树突细胞(蓝色)，成熟的树突细胞(红色)和未成熟的树突细胞(黄色)疫苗接种后抗-Aβ抗体检测的ELISA结果。仅肽致敏的未成熟树突细胞以疫苗方式诱导抗体反应，而成熟的树突细胞则无法诱导抗体反应。
[0011]图2A，图2B和图2C是显示疫苗接种后的抗体反应和表位作图结果的图。图2A是在用完整肽致敏的树突细胞或通过超声处理裂解10秒的同一批细胞两次接种后，针对在22氨基酸(22W)处具有突变的人Aβ42的抗体应答。按照Cao等的方法，从2月龄的BALB/c小鼠骨髓中制备树突细胞(Cao C.等，J.Neuroimmunol.2008，200，1-10)。然后将1x106个完整细胞或裂解细胞注入2月龄的BALB/c小鼠中，然后在两周后用相同的疫苗加强免疫。第二次疫苗接种后10天收集血液。通过腹膜内注射向两只小鼠(n＝2)注射完整细胞，并且向三只小鼠注射细胞碎片(致敏抗原：n＝3)。完整细胞和裂解的细胞碎片均诱导高抗体反应，如左图所示，两组之间无明显差异(P＞0.05)。图2B是针对所有突变肽和片段的表位作图。我们从每组中选择一份血浆，然后测试针对不同肽的抗体。如图所示，两种血清对所有肽无差异，因此表位相同。图2B的右图显示了针对图2B的左图所示的相同的两个抗血清测试的野生型Aβ肽片段的表位作图的结果。同样，两种抗血清之间没有差异。图2C是完整细胞与超声处理的细胞的流式细胞仪结果。粒径远小于完整细胞，因此大多数细胞被超声破碎。
[0012]图3A，图3B，图3C，图3D，图3E和图3F是显示疫苗接种后的同种分型和细胞因子表达谱的结果的图。第三次疫苗疫苗接种后10天收集血液，随后血浆用于通过Luminex多重分析检查Ig同种分型和细胞因子表达谱。疫苗接种后完整细胞和细胞碎片之间的炎性细胞因子没有增加。第三次疫苗接种后细胞碎片诱导了Th1应答，但第四次疫苗接种后该应答减弱了(数据未显示)。
[0013]图4A，图4B和图4C是示出来自接种后血液的淋巴细胞的流式结果的图。我们分析了干细胞，CD4，CD8树突细胞和记忆B细胞群体，并且完整细胞和细胞碎片的结果没有差异。结果表明这两种疫苗接种之间的免疫反应没有差异。
[0014]图5A，图5B，图5C和图5D是显示由DC诱导的免疫反应的结果。图5A是显示在老年和幼年小鼠中DC疫苗接种后的抗体反应的图。每两周向3月龄的C57/BL6小鼠和18月龄的C57/BL6小鼠注射未成熟的Aβ22W致敏DC细胞碎片。第二次注射后10天采血，并检测到针对野生型淀粉样β1-42肽的抗体反应。结果表明，幼年小鼠比老年小鼠具有更多的抗体反应(P＜0.05，n＝4)。图5B，图5C和图5D是流式细胞仪结果的图。从GFP转基因小鼠制备树突细胞，并注射到C57/BL6中。抽血并通过流式细胞术测试以追踪具有荧光GFP的细胞。血液中没有阳性GFP细胞。
具体实施方式
[0015]本文描述的是包含外源抗原致敏的未成熟树突细胞的疫苗，与常规疫苗相比，该树突细胞诱导改善的抗体反应，并且可用作各种疾病的治疗剂。疫苗可包括来自与给予疫苗的患者不同的物种的抗原致敏树突细胞。发现抗原致敏的未成熟树突细胞比成熟的树突细胞引起更早和更好的免疫反应。还发现，经裂解的抗原致敏树突细胞与活抗原致敏树突细胞在诱导免疫反应方面一样有效，并且当用作疗法时，相对于自体树突细胞，外源树突细胞对受体即患者没有不利影响。通用冻干的树突细胞裂解物可以用作疫苗，而不是受限于具有活的自体树突细胞的疫苗。死的外源抗原致敏的未成熟树突细胞或其部分(如本文所详述)可用于疫苗和疗法，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于患者的疫苗，所述疫苗包含抗原致敏的未成熟树突细胞，其中所述树突细胞对于所述患者是外源的。2.如权利要求1所述的疫苗，其中所述树突细胞来自与患者相同物种的对象。3.如权利要求2所述的疫苗，其中所述树突细胞来自比患者年轻并且与患者相同物种的对象。4.如权利要求1所述的疫苗，其中所述树突细胞来自与患者不同物种的对象。5.如前述权利要求中任一项所述的疫苗，其中所述树突细胞是死的。6.如权利要求5所述的疫苗，其中所述树突细胞通过超声处理，热处理，冻干或其组合被杀死。7.如权利要求5所述的疫苗，其中所述树突细胞是裂解细胞或其一部分。8.如前述权利要求中任一项所述的疫苗，其中所述树突细胞尚未通过用选自TNFα，IL6和IL1α的细胞因子刺激而成熟。9.如前述权利要求中任一项所述的疫苗，其中与包含成熟树突细胞的疫苗相比，所述疫苗诱导增加的免疫反应。10.如前述权利要求中任一项所述的疫苗，其中所述疫苗诱导与由包含患者自体的树突细胞的疫苗诱导的反应类似的免疫反应。11.如前述权利要求中任一项所述的疫苗，其中所述树突细胞通过与抗原接触而被抗原致敏。12.如权利要求11所述的疫苗，其中所述树突细胞在体外与所述抗原接触。13.如前述权利要求中任一项所述的疫苗，其中所述抗原包括肽，蛋白质，碳水化合物，脂质或其组合。14.如权利要求13所述的疫苗，其中所述抗原包括肽。15.如前述权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：南佛罗里达大学，
类型：发明
国别省市：