稳定化的纤维素酶变体制造技术

披露了具有改善的在蛋白酶存在下的稳定性的纤维素酶变体以及此类变体在洗衣中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】稳定化的纤维素酶变体对序列表的引用本申请含有计算机可读形式的序列表。该计算机可读形式通过引用并入本文。
本专利技术涉及具有改善的稳定性、特别是在洗涤剂和/或蛋白酶存在下的稳定性的纤维素酶变体。此外，本专利技术涉及包含稳定化的纤维素酶变体的液体洗涤剂组合物。
技术介绍
由于在洗衣过程中观察到的益处(如颜色澄清、防止再沉积、抗起球/去除绒球、和改善白度)，多年来一直将纤维素酶用于洗涤剂中。在一些应用中使用了复合纤维素酶组合物，其中该组合物包含超过一种纤维素降解酶(选自使用的内切葡聚糖酶、纤维二糖水解酶、和β-葡糖苷酶)，而其他应用使用主要包含一种或多种使用的内切葡聚糖酶的组合物。WO1996/029397披露了用于洗涤剂用途的家族45内切葡聚糖酶。大多数商业洗涤剂组合物包含改善许多常见菌株去除的蛋白酶。然而，蛋白酶也降低洗涤溶液中可获得的其他蛋白质，包括其他酶，如纤维素酶。因此，令人希望的是提供具有增加的在蛋白酶存在下的稳定性的纤维素酶，如纤维素酶变体。
技术实现思路
本专利技术提供具有内本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有内切葡聚糖酶活性的变体，其中该变体与具有SEQ ID NO:1的内切葡聚糖酶具有至少80％序列同一性，例如至少85％序列同一性、例如至少90％序列同一性、例如至少95％序列同一性、例如至少96％序列同一性、例如至少97％序列同一性、例如至少98％序列同一性、例如至少99％序列同一性，该变体在与SEQ ID NO:1中以下位置对应的位置处包含两个或多个取代：25、32、41、44、56、77、85、103、104、114、132、134、137、146、147、152、156、159、162、169、179、183、186、194、201或219，使用SEQ ID NO:1进行编号，...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180419 EP 18168286.51.一种具有内切葡聚糖酶活性的变体，其中该变体与具有SEQIDNO:1的内切葡聚糖酶具有至少80％序列同一性，例如至少85％序列同一性、例如至少90％序列同一性、例如至少95％序列同一性、例如至少96％序列同一性、例如至少97％序列同一性、例如至少98％序列同一性、例如至少99％序列同一性，该变体在与SEQIDNO:1中以下位置对应的位置处包含两个或多个取代：25、32、41、44、56、77、85、103、104、114、132、134、137、146、147、152、156、159、162、169、179、183、186、194、201或219，使用SEQIDNO:1进行编号，并且其中与亲本内切葡聚糖酶相比，该变体在包含蛋白酶的水性组合物中具有改善的稳定性。


2.一种具有内切葡聚糖酶活性的变体，其中该变体与具有SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、或SEQIDNO:4的内切葡聚糖酶具有至少80％序列同一性，例如至少85％序列同一性、例如至少90％序列同一性、例如至少95％序列同一性、例如至少96％序列同一性、例如至少97％序列同一性、例如至少98％序列同一性、例如至少99％序列同一性，该变体在与SEQIDNO:1中以下位置对应的位置处包含两个或多个取代：25、32、41、44、56、77、85、103、104、114、132、134、137、146、147、152、156、159、162、169、179、183、186、194、201或219，使用SEQIDNO:1进行编号，并且其中与该亲本内切葡聚糖酶相比，该变体在包含蛋白酶的水性组合物中具有改善的稳定性。


3.一种具有内切葡聚糖酶活性的变体，其中该变体与SEQIDNO:1的氨基酸1至212或SEQIDNO:1的氨基酸1至216、SEQIDNO:2的氨基酸1至211或SEQIDNO:2的氨基酸1至212、SEQIDNO:3的氨基酸1至211或SEQIDNO:3的氨基酸1至210、SEQIDNO:4的氨基酸1至211具有至少80％序列同一性，例如至少85％序列同一性、例如至少90％序列同一性、例如至少95％序列同一性、例如至少96％序列同一性、例如至少97％序列同一性、例如至少98％序列同一性、例如至少99％序列同一性，该变体在与SEQIDNO:1中以下位置对应的位置处包含两个或多个取代：25、32、41、44、56、77、85、103、104、114、132、134、137、146、147、152、156、159、162、169、179、183、186、194、201或219，使用SEQIDNO:1进行编号，并且其中与该亲本内切葡聚糖酶相比，该变体在包含蛋白酶的水性组合物中具有改善的稳定性。


4.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中这些取代选自：X25G；X32S；X41T；X44D；X56A；X77N；X85I；X103A；X104K；X114W；X114F；X134D；X137D；X137E；X137K；X137R；X146D或X146S；X147R；X152K；X156E；X159D；X159E；X162E；X169Y；X179T；X183V；X186R；X194L；X194S；X201K；或X219W，这些取代在与SEQIDNO:1的位置对应的两个或多个位置处。


5.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该亲本内切葡聚糖酶是具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、或SEQIDNO:4的序列的多肽。


6.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中这些取代选自：A25G；A32S；S41T；N44D；S56A；S77N；S85I；K103A；T104K；G114W；G114F；N134D；S137D；S137E；S137K；S137R；A146D或A146S；Q147R；S152K；Q156E；S159D；A162E；Q169Y；D179T；F183V；Q186R；I194L；I194S；K201R；或G219W，这些取代在与SEQIDNO:1的位置对应的两个或多个位置处。


7.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体包含取代A32S，并且进一步包含如下取代，该取代选自与SEQIDNO:1中以下取代对应的取代：A25G；S41T；S56A；S77N；T104K；N134D；A146D或A146S；Q147R；Q156E；A162E；Q169Y；F183V；Q186R；I194L；K201R和G219W。


8.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体包含取代S56A，并且进一步包含如下取代，该取代选自与SEQIDNO:1中以下取代对应的取代：A25G；A32S；S41T；S77N；T104K；N134D；A146D或A146S；Q147R；Q156E；A162E；Q169Y；F183V；Q186R；I194L；K201R和G219W。


9.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体包含取代N134D，并且进一步包含如下取代，该取代选自与SEQIDNO:1中以下取代对应的取代：A25G；A32S；S41T；S56A；S77N；S85I；T104K；G114F；G114W；S137E；S137R；S137D；S137K；A146D或A146S；Q147R；S152K；Q156E；S159E；S159D；A162E；Q169Y；D179T；F183V；Q186R；I194L；I194S；K201R和G219W。


10.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体包含取代A146D，并且进一步包含如下取代，该取代选自与SEQIDNO:1中以下取代对应的取代：A25G；A32S；S41T；S56A；S77N；K103A；T104K；G114F；G114W；N134D；S137R；S152K；Q156E；S159D；S159E；A162E；Q169Y；D179T；F183V；Q186R；I194L；K201R和G219W。


11.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体包含取代Q147R，并且进一步包含如下取代，该取代选自与SEQIDNO:1中以下取代对应的取代：A25G；A32S；S41T；S56A；S77N；S85I；K103A；T104K；G114F；G114W；N134D；S137E；S137R；S137D；S137K；A146D或A146S；S152K；Q156E；S159D；S159E；A162E；Q169Y；D179T；F183V；Q186R；I194L；K201R和G219W。


12.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体包含取代S159D，并且进一步包含如下取代，该取代选自与SEQIDNO:1中以下取代对应的取代：A25G；A32S；S41T；S56A；S77N；K103A；T104K；G114F；G114W；N134D；S137R；A146D；S152K；Q156E；A162E；Q169Y；D179T；F183V；Q186R；I194L；K201R和G219W。


13.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该变体包含取代Q169Y，并且进一步包含如下取代，该取代选自与SEQIDNO:1中以下取代对应的取代：A25G；A32S；S41T；S56A；S77N；T104K；N134D；A146D或A146S；Q147R；Q156E；A162E；F183V；Q186R；I194L；K201R和G219W。


14.根据前述权利要求中任一项所述的变体，这些变体选自
X147R+X156E；
X147R+X169Y；
X56A+X147R；
X147R+X162E；
X147R+X156E+X162E；
X25G+X56A+X147R；
X134D+X156E+X162E；
X56A+X134D+X156E+X162E；
X25G+X56A+X156E+X162E；
X25G+X134D+X156E+X162E；
X56A+X134D+X162E；
X56A+X147R+X169Y；
X134D+X147R；
X156E+X169Y；
X56A+X134D+X147R；
X56A+X134D+X156E+X169Y；
X56A+X146D+X147R+X169Y；
X56A+X134D+X147R+X169Y；
X56A+X147R+X162E+X169Y；
X2*+X56A+X147R+X169Y；
X41T+X56A+X147R+X169Y；
X56A+X77N+X147R+X169Y；
X56A+X104K+X147R+X169Y；
X56A+X147R+X165Q+X169Y；
X56A+X147R+X169Y+X194L；
X56A+X147R+X169Y+X201R；
X56A+X147R+X169Y+X219W；
X44D+X56A+X147R+X169Y；
X50E+X56A+X147R+X169Y；
X32S+X56A+X147R+X169Y；
X44D+X56A+X147R+X169Y；
X56A+X147R+X169Y+X186R；
X56A+X147R+X169Y+X183V；
X56A+X146S+X147R+X162E+X169Y；
X56A+X134D+X147R；
X56A+X134D+X147R+X162E；
X32S+X56A+X134D+X147R+X169Y+X183V；
X56A+X134D+X147R+X162E+X169Y+X183V；
X32S+X56A+X77N+X134D+X147R+X162E+X169Y；
X32S+X56A+X134D+X146D+X147R+X169Y+X183V；
X32S+X56A+X134D+X147R+X169Y；
X56A+X134D+X147R+X162E+X169Y；
X32S+X56A+X134D+X146S+X147R+X169Y；
X32S+X56A+X134D+X146D+X147R+X169Y；
X32S+X56A+X134D+X147R+X169Y+X183V；
X32S+X56A+X134D+X147R+X169Y+X201R；
X56A+X134D+X146D+X147R+X169Y+X183V；
X56A+X134D+X146D+X147R+X162E+X169Y；
X56A+X134D+X146D+X147R+X169Y+X201R；
X56A+X134D+X147R+X162E+X169Y+X183V；
X56A+X134D+X147R+X169Y+X183V+X201R；
X32S+X56A+X77N+X134D+X147R+X169Y+X183V；
X32S+X56A+X77N+X134D+X147R+X162E+X169Y；
X32S+X56A+X134D+X146S+X147R+X169Y+X183V；
X32S+X56A+X134D+X146D+X147R+X169Y+X183V；或
X32S+X56A+X134D+X146D+X147R+X162E+X169Y；
其中使用SEQIDNO:1进行编号。


15.根据前述权利要求中任一项所述的变体，其中该亲本内切葡聚糖酶是具有SEQIDNO:1的多肽并且包含选自以下的取代：
Q147R+Q156E；
Q147R+Q169Y；
S56A+Q147R；
Q147R+A162E；
Q147R+Q156E+A162E；
A25G+S56A+Q147R；
N134D+Q156E+A162E；
S56A+N134D+Q156E+A162E；
A25G+S56A+Q156E+A162E；
A25G+N134D+Q156E+A162E；
A25G+S56A+N134...

【专利技术属性】
技术研发人员：SG卡斯加德，FW拉斯穆森，RA帕赫，L安德森，MLD奥弗加德，TA波尔森，DMK克利特加德，CI约根森，L吉格尔，
申请(专利权)人：诺维信公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK