一种含氧化石墨烯的细胞裂解试剂制造技术

本发明专利技术公开了一种含有氧化石墨烯成分的细胞裂解试剂，该试剂可以利用了氧化石墨烯的优良性能达成对细胞温和却完全的裂解。解决了常用的机械裂解法裂解细胞的不适合大批量检测的缺点，及市场上细胞裂解液操作不便的缺点。本发明专利技术用等渗溶液配合缓冲液取代了不稳定的胍盐，并在试剂中加入了氧化石墨烯溶液，可以在对样本没有明显损害的情况下加速样本细胞的裂解过程，缩短了样本处理时间，更有利于实验处理并保证样本检测的可靠性。本发明专利技术所述的经过改进后的细胞裂解试剂具有条件温和、细胞裂解充分、操作简便的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种含氧化石墨烯的细胞裂解试剂
本专利技术属于生物化学
，具体涉及一种含氧化石墨烯用的细胞裂解试剂。
技术介绍
自20世纪50年代以来，分子生物学就一直是生物学的前沿与生长点。而随着分子生物学技术的不断完善，它使整个生命科学的研究上升到一个全新的阶段。分子生物学主要的研究领域就是细胞中的遗传因子，即我们所说的核酸。在细胞中，核酸总是与各种蛋白质结合在一起的，分子生物学中的最一项基本操作就是将核酸从细胞中提取出来。核酸的提取主要是指运用一定方法将生物样品的细胞裂解，将核酸从细胞中释放出来。常用的裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解。化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA断裂。机械裂解可以更均一的裂解细胞，同化学裂解相比，机械处理具有更高的裂解效率和更低的选择性。机械处理可以更剧烈和全面的裂解细胞，但也会造成DNA的断裂，而且机械处理需要更多地人工参与，不适合于样品量多的环境。市场上的细胞裂解液通常含有胍盐和表面活性剂等成分，其原理为由表面活性剂使蛋白质变性进而细胞膜破裂，释放的核酸。在实际操作中，由于胍盐具有降低溶液pH值的作用，这些细胞裂解液中的胍盐在pH值近中性或偏酸性的条件容易产生沉淀，不仅带来试剂需要加热溶解和吸取操作不方便的不足，而且影响样品中细胞裂解效果、降低了核酸提取的得率。筛选出一种既温和、稳定，又能全面裂解细胞的细胞裂解液就成为当前研究亟需解决的问题。近年来，随着纳米技术的快速发展，纳米材料已广泛的运用于生命科学领域，氧化石墨烯作为其中的明星材料，广泛运用于材料学、分子诊断学等方面，除了它本身优良的性能外，它还具有良好的抗菌能力。经过研究，这是因为氧化石墨烯表面分布着大量的亲水氧化基团，正是这些亲水氧化基团高关联的分布特点使氧化石墨烯有着类似的破坏细胞膜的能力。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的是提供一种细胞裂解试剂，利用其中含有的氧化石墨烯的优良性能达成对细胞温和却完全的裂解。为达到以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种含氧化石墨烯的细胞裂解试剂，试剂主要成分为氧化石墨烯、等渗溶液、缓冲液和表面活性剂，剩余溶剂为无核酸酶水。具体组成说明如下。(1)氧化石墨烯：优选的浓度为0.1%。(2)等渗溶液：可以是但不限于NaCl，葡萄糖溶液，碳酸氢钠溶液等,浓度为0.9-5％。(3)缓冲溶液：可以是但不限于Tirs-HCI(pH8.0)，HEPES，叠氮钠，PMSF，Aprotinin，Leupeptin，EDTA，脱氧胆酸钠，蛋白酶K等或其中2-4种的组合，浓度为0.1-10％，优选的缓冲溶液为Tirs-HCI(pH8.0)和PMSF，优选的浓度各为0.6％和1％。(4)表面活性剂：可以是但不限于SDS，DTT，尿素，TritonX-100，NP-40，硫脲，CTAB等或其中2-4种的组合，浓度为0.5-25％，优选的表面活性剂为NP-40，SDS和TritonX-100，优选的浓度各为0.5％，1%和10％。配制的细胞裂解试剂适合置于室温保存。本专利技术还提供了细胞裂解试剂的使用方法之一如下。将样本细胞与上述细胞裂解试剂混匀，常温静置至少10min。本专利技术的有益效果是：它相比市面上的裂解试剂，用等渗溶液配合缓冲液取代了不稳定的胍盐，并在试剂中加入了氧化石墨烯溶液，可以在对样本没有明显损害的情况下加速样本细胞裂解过程，缩短了样本处理时间，更有利于观察结果并保证样本检测的可靠性。经过改进后的细胞裂解试剂具有反应条件温和、操作简便、细胞裂解充分、的优点。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术讲授的内容之后，本领域技术人员可以通过技术常识对本专利技术作各种技术性改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。实施例1。细胞裂解试剂A。0.1%氧化石墨烯，0.9%NaCl，0.6%Tirs-HCI(pH8.0)，1%PMSF，2%蛋白酶K，0.5%NP-40，1%SDS，剩余溶剂为无核酸酶水。配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。实施例2。细胞裂解试剂B。0.1%氧化石墨烯，0.9%NaCl，1%蛋白酶K，1%PMSF，0.1%EDTA，10%TritonX-100，1%尿素，剩余溶剂为无核酸酶水。配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。实施例3。细胞裂解试剂C。0.1%氧化石墨烯，5%葡糖糖，0.6%Tirs-HCI(pH8.0)，1%HEPES，0.2%EDTA，0.5%TritonX-100，0.5%DTT，1%SDS，剩余溶剂为无核酸酶水。配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。实施例4。细胞裂解试剂D。0.1%氧化石墨烯，5%葡糖糖，0.6%叠氮钠，1%Aprotinin，Leupeptin，0.5%硫脲，1%CTAB，1%SDS，剩余溶剂为无核酸酶水。配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。实施例5。细胞裂解试剂E。0.1%氧化石墨烯，2.5%碳酸氢钠，3%脱氧胆酸钠，2%蛋白酶K，5%Leupeptin，0.2%EDTA，0.5%NP-40，1%TritonX-100，剩余溶剂为无核酸酶水。配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。实施例6。细胞裂解试剂F。0.1%氧化石墨烯，2.5%碳酸氢钠，3%脱氧胆酸钠，1%PMSF，0.5%NP-40，3%硫脲，5%CTAB，剩余溶剂为无核酸酶水。配制方法为，将各成分加入无核酸酶水中，振荡溶解，定容到1L，振荡混匀后于室温静置保存。以人全血为样本细胞做裂解实验。取10μL全血，加入490μL裂解液中，混匀，常温静置10min，裂解均能得到澄清透明液体。最后应本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含氧化石墨烯的细胞裂解试剂，其特征在于：该试剂主要成分有氧化石墨烯、等渗溶液、缓冲液和表面活性剂，剩余溶剂为无核酸酶水。/n

【技术特征摘要】
1.一种含氧化石墨烯的细胞裂解试剂，其特征在于：该试剂主要成分有氧化石墨烯、等渗溶液、缓冲液和表面活性剂，剩余溶剂为无核酸酶水。


2.如权利要求1所述的细胞裂解试剂中氧化石墨烯的优选的浓度为0.1%。


3.如权利要求1所述的细胞裂解试剂中等渗溶液可以是但不限于NaCl，葡萄糖溶液，碳酸氢钠溶液。


4.如权利要求3所述，等渗溶液浓度为0.9-5％。


5.如权利要求1所述的细胞裂解试剂中缓冲溶液：可以是但不限于Tirs-HCI(pH8.0)，HEPES，叠氮钠，PMSF，Aprotinin，Leupeptin，EDTA，脱氧胆酸钠...

【专利技术属性】
技术研发人员：李智洋，翁国武，王炜，朱沉雷，宋莲，黄远福，
申请(专利权)人：浙江智扬生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33