一种箱根草组织培养方法技术

本发明专利技术涉及一种箱根草组织培养方法，属于植物组织培养技术领域。本发明专利技术旨在建立一种箱根草的组培体系，以通过组织培养扩繁技术为快速得到无菌的箱根草苗提供方法依据，以便加速箱根草扩繁速度、提高箱根草成活率，适应大规模生产的需要，以及后期对箱根草的多种生理机制，以及耐阴基因等研究打下基础。

【技术实现步骤摘要】
一种箱根草组织培养方法
本专利技术涉及一种箱根草组织培养方法；属于植物组织培养

技术介绍
随着观赏草在现代园林景观中的应用愈来愈多，耐阴植物也更多地受到人们的关注，箱根草(Hakonechloamacra)属禾本科箱根草属植物，又称为日本风知草，多年生宿根植物，耐阴，冬天在南方地区可露天过冬，且其生长速度慢，不会威胁生态平衡。然而对于箱根草的繁殖大多采用分株，而国内培育多为小苗，分株效率低。与传统的繁殖方式相比，植物组织培养生长周期短，繁殖率高，生产效率高，便于管理。目前对于箱根草的组织培养快速繁殖技术研究较少。因此本专利技术旨在建立一种箱根草的组培体系，以通过组织培养扩繁技术为快速得到无菌的箱根草苗提供方法依据，以便加速箱根草扩繁速度、提高箱根草成活率，适应大规模生产的需要，以及后期对箱根草的多种生理机制，以及耐阴基因等研究打下基础。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种箱根草组织培养方法，加速箱根草扩繁速度、提高箱根草成活率。本专利技术采用的技术方案为：一种箱根草组织培养方法，包括如下步骤：1)、剪取当年生枝条健壮且无病害的带节茎段或茎尖10cm左右，用小刷子轻轻在水龙头下刷洗去茎段表面附着的灰尘等大颗粒污染物，然后用剪刀将茎段剪成2-3cm的长度，小心剥尽叶鞘，保留腋芽，放入加洗洁精的锥形瓶中不断震荡，清洗3min后，在流水下冲洗10min，然后吸干水分喷洒酒精放入超净工作台上，用无菌水清洗3遍，75％酒精浸泡15s后再用无菌水冲洗3～5遍，然后在1％NaClO溶液中浸泡8min，期间不断摇晃锥形瓶，用无菌水冲洗5～7遍，用灭过菌的滤纸吸干茎段表面水分，切除茎段最顶端和最底部，后将茎段接种于如下培养基上：MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂，pH值调为5.7～5.8；培养40-50天；2)、然后将箱根草茎段接种到初代诱导的培养基上，所述的初代诱导的培养基为：MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.25mg/LNAA，pH值调为5.7～5.8；或MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA，pH值调为5.7～5.8；三周后腋芽开始萌发；3)、将箱根草茎段诱导出的腋芽接种到增殖培养基上，两周后开始萌发丛状不定芽；增殖培养基为MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA，pH值调为5.7～5.8；4)、不定芽的高度达到3～4cm，每个芽长3-5片叶时，将丛芽进行分丛，每从4-5个丛芽，转入生根培养基中；所述生根培养基为1/2MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/LIBA，pH值调为5.7～5.8。在培养一周后逐渐有新根产生。优选地，在NaClO溶液中，每100ml加入1-2滴20吐温。优选地，所述的初代诱导的培养基为：MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.25mg/LNAA。优选地，该方法的培养室温度为(25±1)℃，空气相对湿度保持在50％-60％，光照强度为2000lx，光周期为14h·d-1。本专利技术所具有的有益效果：本专利技术旨在建立一种箱根草的组培体系，以通过组织培养扩繁技术为快速得到无菌的箱根草苗提供方法依据，以便加速箱根草扩繁速度、提高箱根草成活率，适应大规模生产的需要。附图说明：图1为实施例1箱根草芽诱导培养20天的生长情况示意图；图2为实施例1箱根草增殖培养40天的生长情况示意图；图3为实施例1箱根草生根培养20天的生长情况示意图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明，但不限定本专利技术的保护范围。试验材料取自天津滨海新区开发区第八大街泰达植物资源库的箱根草，选取其当年生带节茎段作为供试材料进行试验。实施例1一种箱根草组织培养方法，包括如下步骤：1)、剪取当年生枝条健壮且无病害的带节茎段或茎尖10cm左右，用小刷子轻轻在水龙头下刷洗去茎段表面附着的灰尘等大颗粒污染物，然后用剪刀将茎段剪成2-3cm的长度，小心剥尽叶鞘，保留腋芽，放入加洗洁精的锥形瓶中不断震荡，清洗3min后，在流水下冲洗10min，然后吸干水分喷洒酒精放入超净工作台上，用无菌水清洗3遍，75％酒精浸泡15s后再用无菌水冲洗3～5遍，然后在1％NaClO溶液(在NaClO溶液中，每100ml加入2滴20吐温。)中浸泡8min，期间不断摇晃锥形瓶，用无菌水冲洗5～7遍，用灭过菌的滤纸吸干茎段表面水分，切除茎段最顶端和最底部，后将茎段接种于如下培养基上：MS+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂，pH值调为5.7～5.8；培养40-50天；2)、将箱根草茎段接种到初代诱导的培养基上，所述的初代诱导的培养基为：MS+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.25mg/LNAA，pH值调为5.7～5.8；三周后腋芽开始萌发；3)、将箱根草茎段诱导出的腋芽接种到增殖培养基上，两周后开始萌发丛状不定芽；增殖培养基为MS+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA，pH值调为5.7～5.8；4)、不定芽的高度达到3～4cm，每个芽长3-5片叶时，将丛芽进行分丛，每从4-5个丛芽，转入生根培养基中；所述生根培养基为1/2MS+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂+0.5mg/LIBA，pH值调为5.7～5.8。在培养一周后逐渐有新根产生。该方法的培养室温度为(25±1)℃，空气相对湿度保持在50％-60％，光照强度为2000lx，光周期为14h·d-1。该方法中，箱根草的茎段作为外植体进行消毒时，消毒方式为75％酒精消毒15s，而后1％NaClO2消毒8min，此时成活率最高，为60.00％。箱根草腋芽萌发的初代诱导的培养基MS+30g/L蔗糖+7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.25mg/LNAA，分化率可达63.33％，平均腋芽数最多为1.73。芽增殖的最佳培养基为MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.2mg/LNAA，其芽增殖倍数为6.27。生根培养基为：1/2MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/LIBA，生根率可达到80.00％。1.1改变步骤1)的消毒时间，对比例选择的消毒时间分别为：1％NaClO处理3min、5min、10min、13min、15min、18min。每处理接种30个茎段，每瓶接种一个茎段，重复3次。30d后统计不同消毒时间的污染率、褐化率和存活率；如表1所示。表1不同消毒时间对箱根草茎段消毒效果的影响通过表1可以看出，在消毒时间分别为3min、5min时，褐化率均为0，之后外植体的褐化率随消毒时间的延长而增加，消毒时间3-8min染菌率随着消毒时间的增加而本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种箱根草组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：/n1)、剪取当年生枝条健壮且无病害的带节茎段或茎尖10cm左右，用小刷子轻轻在水龙头下刷洗去茎段表面附着的灰尘等大颗粒污染物，然后用剪刀将茎段剪成2-3cm的长度，小心剥尽叶鞘，保留腋芽，放入加洗洁精的锥形瓶中不断震荡，清洗3min后，在流水下冲洗10min，然后吸干水分喷洒酒精放入超净工作台上，用无菌水清洗3遍，75％酒精浸泡15s后再用无菌水冲洗3～5遍，然后在1％NaClO溶液中浸泡8min，期间不断摇晃锥形瓶，用无菌水冲洗5～7遍，用灭过菌的滤纸吸干茎段表面水分，切除茎段最顶端和最底部，后将茎段接种于如下培养基上：MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂，pH值调为5.7～5.8；培养40-50天；/n2)、然后将箱根草茎段接种到初代诱导的培养基上，所述的初代诱导的培养基为：MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.25mg/L NAA，pH值调为5.7～5.8；或MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA，pH值调为5.7～5.8；三周后腋芽开始萌发；/n3)、将箱根草茎段诱导出的腋芽接种到增殖培养基上，两周后开始萌发丛状不定芽；增殖培养基为MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA，pH值调为5.7～5.8；/n4)、不定芽的高度达到3～4cm，每个芽长3-5片叶时，将丛芽进行分丛，每从4-5个丛芽，转入生根培养基中；所述生根培养基为1/2MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L IBA，pH值调为5.7～5.8。在培养一周后逐渐有新根产生。/n...

【技术特征摘要】
1.一种箱根草组织培养方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)、剪取当年生枝条健壮且无病害的带节茎段或茎尖10cm左右，用小刷子轻轻在水龙头下刷洗去茎段表面附着的灰尘等大颗粒污染物，然后用剪刀将茎段剪成2-3cm的长度，小心剥尽叶鞘，保留腋芽，放入加洗洁精的锥形瓶中不断震荡，清洗3min后，在流水下冲洗10min，然后吸干水分喷洒酒精放入超净工作台上，用无菌水清洗3遍，75％酒精浸泡15s后再用无菌水冲洗3～5遍，然后在1％NaClO溶液中浸泡8min，期间不断摇晃锥形瓶，用无菌水冲洗5～7遍，用灭过菌的滤纸吸干茎段表面水分，切除茎段最顶端和最底部，后将茎段接种于如下培养基上：MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂，pH值调为5.7～5.8；培养40-50天；
2)、然后将箱根草茎段接种到初代诱导的培养基上，所述的初代诱导的培养基为：MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.25mg/LNAA，pH值调为5.7～5.8；或MS+30g/L蔗糖+7.2-7.5g/L琼脂+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA，pH值调为5.7～5.8；三周后腋芽开始萌发...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟彤彤，张清，田晓明，于璐，秘洪雷，刘璐，刘璐瑶，聂阿秀，师梦闪，窦莉洋，丁亚东，
申请(专利权)人：天津泰达盐碱地绿化研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12