一种急性重症病毒性心肌炎基因标志物制造技术

本发明专利技术提供了一种急性重症病毒性心肌炎基因标志物，属于心脏医学技术领域。本发明专利技术通过检测急性重症病毒性心肌炎患者外周血单个核细胞，正常人外周血单个核细胞，治疗后明显好转的急性重症病毒性心肌炎患者外周血单个核细胞发现，LINC02092基因在急性重症病毒性心肌炎患者的诊断和预后方面均具有明显的差异和优异的诊断价值，因此，可将其用于制备诊断急性重症病毒性心肌炎的诊断试剂。

【技术实现步骤摘要】
一种急性重症病毒性心肌炎基因标志物
本专利技术属于心脏医学
，尤其涉及一种急性重症病毒性心肌炎基因标志物。
技术介绍
病毒性心肌炎是继发性扩张型心肌病的最常见病因，其是由病毒感染导致的心肌弥散性或局灶性炎病病变。近年来，病毒性心肌炎的发病率明显升高。少数病例起病急骤，发展迅速，患者会在短时间内出现严重的心力衰竭，新源性休克。而且，病毒性心肌炎是法医病理鉴定工作中常见的心血管感染性疾病，是造成青少年猝死的主要原因之一。由于大多数感染者仅有轻微的临床症状，只有少部分较为严重的感染者会出现明显的并发症，所以目前对于病毒性心肌炎的诊断缺乏有效而特异的检测手段。而且重症病毒性心肌炎在诊断时容易与急性心肌梗死之间发生误诊。因此，寻找新的诊断病毒性心肌炎的基因标志物，并且有效的区分病毒性心肌炎和急性心肌梗死，对于患者的及早诊断和对症治疗具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够有效的诊断病毒性心肌炎的基因标志物。为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案。本专利技术提供了如下技术方案：本专利技术提供了检测LINC02092表达量的引物对在制备急性重症病毒性心肌炎产品中的应用。优选地，所述LINC02092的转录本序列如SEQIDNO.1所示。优选地，所述引物对的正向引物如SEQIDNO.2所示，所述引物对的反向引物如SEQIDNO.3所示。优选地，其特征在于所述产品为试剂盒，芯片和制剂。此外，本专利技术提供了检测LINC02092表达量的引物对在制备诊断急性重症病毒性心肌炎荧光定量PCR试剂盒中的应用，所述LINC02092的转录本序列如SEQIDNO.1所示；所述引物对的正向引物如SEQIDNO.2所示，所述引物对的反向引物如SEQIDNO.3所示。优选地，所述荧光定量PCR试剂盒还包括GAPDH引物对，SYBRGreen荧光染料和ddH2O。此外，本专利技术提供了一种长链非编码RNA，所述长链非编码RNA为LINC02092，所述LINC02092在急性重症病毒性心肌炎患者中高表达，通过检测LINC02092的表达量可以诊断急性重症病毒性心肌炎。除此之外，本专利技术提供了一种检测急性重症病毒性心肌炎的荧光定量试剂盒，所述试剂盒中含有检测LINC2092表达量的引物对。本专利技术的有益效果在于：本专利技术首次证明了长链非编码RNALINC02092在急性重症病毒性心肌炎患者的外周血单个核细胞中高表达，而且在治疗恢复后的患者的外周血单个核细胞中的表达量相较于未治疗的患者会显著下调，且对于急性重症病毒性心肌炎的诊断和预后均具有优异的灵敏度和特异性。除此之外，本专利技术证明检测LINC02092可以用于区分急性重症病毒性心肌炎和急性心肌梗死，从而实现急性重症病毒性心肌炎患者的早诊断，和精准治疗。附图说明图1健康对照组，急性重症病毒性心肌炎组和治疗恢复组样本中的LINC02092的相对表达量图2健康对照组和急性重症病毒性心肌炎组之间的ROC曲线图3急性重症病毒性心肌炎组和治疗恢复组之间的ROC曲线图4健康对照组和急性心肌梗死组样本中的LINC02092的相对表达量。具体实施方式样本为山东齐鲁医院（青岛）心内科临床诊断的急性重症病毒性心肌炎患者外周血血液（35例）和正常人外周血血液（35例），治疗后症状明显好转患者的外周血血液（20例）。诊断符合全国心肌炎、心肌病专题座谈会制定的（病毒性心肌炎诊断标准），除外既往有高血压、冠心病、风湿性心脏病、心肌病、心律失常者，排除药物影响、中毒、代谢风湿性疾病等所导致的其他特异性心肌病变者。急性心肌梗死患者外周血血液（30例），诊断严格遵循中华医学会心血管分化所制定的我国急性心肌梗死诊断标准。实施例1分组为：健康对照组（正常人外周血血液），急性重症病毒性心肌炎组（急性重症病毒性心肌炎患者外周血血液）和治疗治疗恢复组（治疗后症状明显好转患者的外周血血液）。1.提取血液中的外周血单个核细胞（1）取4ml的淋巴细胞分离液加入到离心管中，缓慢的将4ml血液样品沿着离心管的管壁加入到分离液中；（2）将离心管置于离心机中，2000rpm离心30min；（3）小心的收集乳白色的淋巴细胞层细胞，放入到新的2ml离心管中，加入PBS洗涤，1500rpm离心10min，重复2次，即得到外周血单个核细胞；2.RNA提取（1）加入1mlTRIZOL试剂，用移液枪反复的吹打至液体澄清，静置5min；（2）加入200μL氯仿，颠倒混匀，冰上静置5min，置于离心机中，12000rpm离心15min；（3）将上层的水相转移至新的无酶离心管中，加入等体积的异丙醇混匀，置于离心机中，4℃，12000rpm离心10min；（4）去除上清，在白色沉淀中加入500μL预冷的70%乙醇，震荡溶解沉淀，置于离心机中8000rpm/min，离心5min；（5）弃去上清，室温干燥5-10min，加入50μLDEPC水，即得到所需RNA。3.逆转录反应（1）去除基因组DNA反应试剂：5×gDNAEraserBuffer2.0μl，gDNAEraser1.0μl，TotalRNA1.0μg，RNaseFreedH2Oupto10.0μl。反应条件：42℃2分钟，4℃。（2）逆转录反应反应试剂：步骤（1）的反应液10.0μl，PrimeScriptRTEnzymeMixI1.0μl，RTPrimerMix1.0μl，5×PrimeScriptBuffer24.0μl，RNaseFreedH2O4.0μl。反应条件：37℃15分钟，85℃5秒，4℃。4.荧光定量PCR反应根据Invitrogen公司的2xSYBRGreenPCRMasterMix说明书进行实验：（1）引物序列设计基因名称引物序列LINC02092AATCTGCCTCTTTCTGGGGCAAGAGTTCTGTTCCCTGGCGGAPDHGTCAAGGCTGAGAACGGGAAGCCTTCTCCATGGTGGTGAA（2）反应体系试剂使用量SYBRGreenPremixExTaq（2×）10μLcDNA模板2μLForwardPrimer0.4μLReversePrimer0.4μLddH2O7.2μL反应条件：95℃1min；95℃20s，60℃30s40个循环。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测LINC02092表达量的引物对在制备急性重症病毒性心肌炎产品中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.检测LINC02092表达量的引物对在制备急性重症病毒性心肌炎产品中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述LINC02092的转录本序列如SEQIDNO.1所示。


3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述引物对的正向引物如SEQIDNO.2所示，所述引物对的反向引物如SEQIDNO.3所示。


4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于所述产品为试剂盒，芯片和制剂。


5.检测LINC02092表达量的引物对在制备诊断急性重症病毒性心肌炎荧光定量PCR试剂盒中的应用，其特征在于，所述LINC02092的转录本序列如S...

【专利技术属性】
技术研发人员：王颖翠，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院青岛，
类型：发明
国别省市：山东;37