本发明专利技术涉及乳酸杆菌混合高密度发酵及乳酸杆菌复合菌制剂的制备。具体地，本发明专利技术提供一种微生物发酵方法，所述的方法包括：(1)将一种或多种不同的种子菌分别接种到改良的MRS液体培养基中，培养，得到一种或多种不同的种子菌液；(2)将所述的一种或多种不同的种子菌液加入到发酵培养基中，发酵，得到发酵液；所述的改良的MRS液体培养基包括：蛋白胨12‑18g/L、牛肉膏12‑18g/L、酵母膏7‑15g/L、葡萄糖20‑60g/L和水。本发明专利技术所述的微生物发酵方法能够同时进行不同的乳酸杆菌混合发酵，且在混合发酵过程中，不同的乳酸杆菌之间不发生相互抑制作用，均能够正常生长。
【技术实现步骤摘要】
乳酸杆菌混合高密度发酵及乳酸杆菌复合菌制剂的制备
本专利技术涉及生物发酵
，具体涉及乳酸杆菌混合高密度发酵及乳酸杆菌复合菌制剂的制备。
技术介绍
乳酸菌作为一种益生菌，已广泛应用在与人类生活密切相关的各个领域。我国传统的泡菜腌制中就富含大量的活性乳酸菌，发挥着重要的代谢功能。各类酸奶制品的生产加工，都需要乳酸菌进行发酵。活性益生菌固体饮料则是直接将乳酸菌冻干粉与可食用辅料混合后包装成品。在农业领域，乳酸菌可作为水产畜禽养殖动物的饲料添加剂，促进动物的肠道健康，也可用来制作发酵饲料，提高营养价值和饲料的利用率。乳酸菌还具有降低富营养水体中氨氮和亚硝酸盐的作用，改善水质。同时，利用乳酸菌发酵液可进行养殖舍臭味的净化，既环保又健康。由此可见，乳酸菌的应用越来越受到广泛的关注。乳酸菌的应用领域如此之多，伴随着市场应用与需求的不断扩大，它的生产工艺直到近十年来才受到各个企业和科研人员的更多关注。在乳酸菌的发酵工艺技术方面，由于乳酸菌细胞自身比较脆弱的特点，发酵水平一直不高，常规的乳酸菌发酵水平，活菌数一般为108cfu/ml数量级。由于多种乳酸菌一起发酵时，不同的菌种之间产生相互抑制作用，目前的复合益生菌制剂产品生产工艺一般为单一菌种纯种培养后，再进行复配，这种单一菌种培养再复配首先需要单独的发酵每种乳酸菌，然后不同单独的乳酸菌在复配，导致工业化生产成本加大，而现有技术中，不同菌种的组合一起发酵又常常导致菌种之间相互抑制现象的发生，导致发酵效果变差，然而，市场对复合型的乳酸杆菌需求又在不在的增长。因此，本领域需要开发一种乳酸杆菌混合发酵工艺技术，通过一次发酵获得复合型乳酸杆菌的方法，从而简化生产工艺，提高生产效率。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够同时进行不同的乳酸杆菌混合发酵，且在混合发酵过程中，不同的乳酸杆菌之间不发生相互抑制作用，均能够正常生长的微生物发酵方法。本专利技术的第一方面，提供一种微生物发酵方法，所述的方法包括：(1)将一种或多种不同的种子菌分别接种到改良的MRS液体培养基中，培养，得到一种或多种不同的种子菌液；(2)将所述的一种或多种不同的种子菌液加入到发酵培养基中，发酵，得到发酵液；所述的改良的MRS液体培养基包括：蛋白胨12-18g/L、牛肉膏12-18g/L、酵母膏7-15g/L、葡萄糖20-60g/L和水。在另一优选例中，所述的微生物为乳酸菌。在另一优选例中，所述的微生物为混合乳酸菌。在另一优选例中，所述的种子菌为乳酸菌，较佳地为乳酸杆菌。在另一优选例中，所述的改良的MRS液体培养基包括：蛋白胨13-17g/L、牛肉膏13-17g/L、酵母膏8-12g/L、葡萄糖25-45g/L和水。在另一优选例中，所述的改良的MRS液体培养基包括：蛋白胨15g/L、牛肉膏15g/L、酵母膏10g/L、葡萄糖35g/L和水。在另一优选例中，所述的蛋白胨、牛肉膏、酵母膏和葡萄糖的重量比为(2-4)：(2-4)：(1-3)：(6-8)。在另一优选例中，所述的蛋白胨和牛肉膏的重量比为0.8-1.2：1，较佳地0.9-1.1：1。在另一优选例中，所述的蛋白胨和酵母膏的重量比为1.2-1.6：1，较佳地1.3-1.7。在另一优选例中，所述的蛋白胨和葡萄糖的重量比为1：2.0-2.6，较佳地1：2.1-2.5。在另一优选例中，所述的牛肉膏和酵母膏的重量比为1.2-1.6：1，较佳地1.3-1.7。在另一优选例中，所述的牛肉膏和葡萄糖的重量比为1：2.0-2.6，较佳地1：2.1-2.5。在另一优选例中，所述的酵母膏和葡萄糖的重量比为1：3-4，较佳地1：3.2-3.7。在另一优选例中，所述的改良的MRS液体培养基还包括：柠檬酸氢二铵0.5-5g/L、吐温800.5-2ml/L、乙酸钠2-10g/L、磷酸氢二钾0.5-5g/L、硫酸镁0.1-3g/L和硫酸锰0.05-3g/L。在另一优选例中，所述的改良的MRS液体培养基还包括：柠檬酸氢二铵1-3g/L、吐温800.7-1.5ml/L、乙酸钠3-7g/L、磷酸氢二钾1-3g/L、硫酸镁0.2-1g/L和硫酸锰0.1-0.5g/L。在另一优选例中，所述的改良的MRS液体培养基还包括：柠檬酸氢二铵2g/L、吐温801ml/L、乙酸钠5g/L、磷酸氢二钾2g/L、硫酸镁0.58g/L和硫酸锰0.25g/L。在另一优选例中，所述的改良的MRS液体培养基包括蛋白胨12-18g/L、牛肉膏12-18g/L、酵母膏7-15g/L、葡萄糖20-60g/L、柠檬酸氢二铵0.5-5g/L、吐温800.5-2ml/L、乙酸钠2-10g/L、磷酸氢二钾0.5-5g/L、硫酸镁0.1-3g/L、硫酸锰0.05-3g/L和水。在另一优选例中，所述的改良的MRS液体培养基包括蛋白胨13-17g/L、牛肉膏13-17g/L、酵母膏8-12g/L、葡萄糖25-45g/L、柠檬酸氢二铵1-3g/L、吐温800.7-1.5ml/L、乙酸钠3-7g/L、磷酸氢二钾1-3g/L、硫酸镁0.2-1g/L、硫酸锰0.1-05g/L和水。在另一优选例中，所述的步骤(2)中，当发酵液中的菌种数量不在增加时，停止发酵。在另一优选例中，所述的步骤(1)中，每个种子菌液的OD600值为10-25，较佳地15-20。在另一优选例中，所述的步骤(1)中，每个种子菌液的活菌数为20-60亿/ml，较佳地30-50亿/ml。在另一优选例中，所述的步骤(1)中，所述的培养是在20-40℃(优选为37℃)温度下进行培养。在另一优选例中，所述的步骤(2)中，所述的发酵液是在20-40℃(优选为37℃)温度下进行发酵。在另一优选例中，所述的步骤(2)中，发酵过程中，所述的发酵液中的pH控制在5.0-8.0，较佳地5.0-7.0，较佳地5.5-6.5，最佳地5.8-6.2。在另一优选例中，通过添加酸性物质和/或碱性物质控制发酵液中的pH。在另一优选例中，所述的酸性物质选自下组：盐酸、醋酸，或其组合。在另一优选例中，所述的碱性物质选自下组：氨水、氢氧化钠、氢氧化钾，或其组合。在另一优选例中，所述的步骤(2)中，在发酵过程中，通过添加碳源控制所述的发酵液中的糖浓度为0.05-5g/L，较佳地0.08-4g/L，更佳地0.1-3g/L，最佳地0.2-1g/L。在另一优选例中，所述的碳源为1-4倍(较佳地1-3倍，更佳地2倍)浓缩的MRS液体培养基和100-600g/L(较佳地200-400g/L，更佳地250-350g/L)葡萄糖水溶液，且葡萄糖水溶液的补料速度控制在2-12L/h，较佳地5-8L/h，浓缩的MRS培养基的补料速度控制0.2-1.5L/h，较佳地0.5-1L/h。在另一优选例中，所述的MRS液体培养基包括：蛋白胨5-15g/L、牛肉膏5-15g/L、酵母膏1-10g/L、柠本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种微生物发酵方法，其特征在于，所述的方法包括：/n(1)将一种或多种不同的种子菌分别接种到改良的MRS液体培养基中，培养，得到一种或多种不同的种子菌液；/n(2)将所述的一种或多种不同的种子菌液加入到发酵培养基中，发酵，得到发酵液；/n所述的改良的MRS液体培养基包括：蛋白胨12-18g/L、牛肉膏12-18g/L、酵母膏7-15g/L、葡萄糖20-60g/L和水。/n
【技术特征摘要】
1.一种微生物发酵方法，其特征在于，所述的方法包括：
(1)将一种或多种不同的种子菌分别接种到改良的MRS液体培养基中，培养，得到一种或多种不同的种子菌液；
(2)将所述的一种或多种不同的种子菌液加入到发酵培养基中，发酵，得到发酵液；
所述的改良的MRS液体培养基包括：蛋白胨12-18g/L、牛肉膏12-18g/L、酵母膏7-15g/L、葡萄糖20-60g/L和水。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的改良的MRS液体培养基还包括：柠檬酸氢二铵0.5-5g/L、吐温800.5-2ml/L、乙酸钠2-10g/L、磷酸氢二钾0.5-5g/L、硫酸镁0.1-3g/L和硫酸锰0.05-3g/L。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，发酵过程中，所述的发酵液中的pH控制在5.0-8.0，较佳地5.0-7.0，较佳地5.5-6.5，最佳地5.8-6.2。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，在发酵过程中，通过添加碳源控制所述的发酵液中的糖浓度为0.05-5g/L，较佳地0.08-4g/L，更佳地0.1-3g/L，最佳地0.2-1g/L。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的种子菌选自下组：嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊...
【专利技术属性】
技术研发人员：张庆林，刘文，潘佳明，冯俊寅，王杰，
申请(专利权)人：中国科学院上海有机化学研究所湖州生物制造创新中心，湖州百晟生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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