一种含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品的制备方法，包括以下操作步骤：(1)向灭活后的植物乳杆菌JLAU103发酵液加入三氯乙酸水溶液，离心处理后得到上清液；(2)向上清液中加入无水乙醇，离心处理，得到沉淀；(3)将沉淀用蒸馏水溶解后，透析，浓缩、冷冻干燥制得粗多糖；(4)将粗多糖用蒸馏水溶解后，经离子交换柱层析和去离子水透析，冷冻干燥后得到植物乳杆菌JLAU103胞外多糖；(5)将全脂牛乳、白砂糖、小球藻粉、鸡蛋粉、植物乳杆菌JLAU103胞外多糖、柠檬酸钠混合后，加入水，进行发酵等步骤处理后，制得含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品。本发明专利技术制得的乳制品，营养含量高，具有免疫调节作用。

A method for preparation of Lactobacillus plantarum containing extracellular polysaccharide aujl103

【技术实现步骤摘要】
一种含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品的制备方法
本专利技术属于功能乳制品制备的
，具体涉及一种含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品的制备方法。
技术介绍
肠道黏膜是动物体内与外界环境之间最大的接触表面，它不仅在营养物质的消化和吸收中发挥着重要作用，而且对大多数外来病原微生物、毒素侵扰具有防御屏障作用。肠道黏膜屏障主要由肠上皮细胞屏障、免疫屏障、生物屏障、化学屏障共同组成。近年来研究表明，肠道屏障功能障碍与多种肠道疾病(腹泻、炎症性肠病、克罗恩病、溃疡性结肠炎、食物过敏)的发病机制密切有关。因此，发掘调节肠道黏膜屏障作用的天然活性物质，将为肠道疾病的治疗和预防提供现实意义。植物乳杆菌胞外多糖(Exopolysaccharides，EPS)是植物乳杆菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的黏液多糖或荚膜多糖的总称。其作为一种绿色、安全的天然活性高分子聚合物，已被证实具有多种生理活性，包括抗氧化、降血压、抗肿瘤、改善肠道微生态环境和增强人体免疫力等。目前没有一种乳制品中添加过植物乳杆菌胞外多糖。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种添加有植物乳杆菌胞外多糖的乳制品制备方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的。一种含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品的制备方法，包括以下操作步骤：(1)向灭活后的植物乳杆菌JLAU103发酵液加入三氯乙酸水溶液至三氯乙酸终浓质量分数为4-6％，室温下搅拌处理1.5-2.5小时，离心处理后得到上清液；(2)向上清液中加入其2-3倍体积的无水乙醇，冷藏静置处理10-12小时后，离心处理，得到沉淀；(3)将沉淀用蒸馏水溶解后，装入分子截流量为8000～14000Da的透析袋中透析45-50h，每8h换一次蒸馏水，再经浓缩、冷冻干燥制得粗多糖；(4)将粗多糖用蒸馏水溶解后，经DEAE-SepharoseFastFlow离子交换柱层析，上样量90-110mg，依次用蒸馏水、0.2mol/LNaCl、0.5mol/LNaCl进行线性梯度洗脱，洗脱速度为0.8-1.2mL/min，每管收集4-6mL，采用苯酚硫酸法逐管检测胞外多糖含量，按胞外多糖含量检测值分别合并收集单一峰组分，再进行去离子水透析，冷冻干燥后得到植物乳杆菌JLAU103胞外多糖；(5)按重量份计，将70-80份全脂牛乳、10-14份白砂糖、7-10份小球藻粉、12-16份鸡蛋粉、0.2-0.6份植物乳杆菌JLAU103胞外多糖、0.05-0.09份柠檬酸钠混合后，按照料水比为1:20-25g/ml的比例向其中加入水，搅拌处理后，依次进行均质、灭菌、冷却、接种、恒温发酵、冷却、灌装、后熟冷藏后，制得含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品。具体地，上述步骤(1)中，植物乳杆菌JLAU103发酵液是由植物乳杆菌JLAU103按体积分数为3％的接种量接种到液体SDM培养基中，37℃培养24h后制得的。具体地，上述步骤(1)中，三氯乙酸水溶液初始质量分数为75-85％。具体地，上述步骤(1)和步骤(2)中，离心处理时，离心力大小均为10000g，离心时温度均为4℃，离心时间均为40-50min。具体地，上述步骤(2)中，冷藏静置处理时的温度为3-5℃。具体地，上述步骤(4)中，均质处理时，均质的温度为58-62℃，均质的压力18-20MPa。具体地，上述步骤(4)中，接种所用的菌种为保加利亚乳酸杆菌和嗜热链球菌，接种量为1-3％。具体地，上述步骤(4)中，恒温发酵的温度为39-41℃，恒温发酵处理的时间为6-7小时。由以上的技术方案可知，本专利技术的有益效果是：1、本专利技术提供的含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品，产品的光泽度好，奶香协调，香醇浓郁，并且营养含量高，具有免疫调节的作用；2、本专利技术步骤(1)至步骤(4)中提供的制备植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的方法，产品得率高，得到的产品纯度高；3、本专利技术制得的乳制品中含有小球藻和鸡蛋粉发酵后的活性物质，其能与植物乳杆菌JLAU103胞外多糖共同作用，能有效的改善免疫抑制小鼠的免疫调节功能。附图说明图1为免疫抑制小鼠胸腺指数(A)和脾脏指数(B)，其中含不同字母表示组间差异显著p<0.05。图2为免疫抑制小鼠小肠组织绒毛长度V与隐窝深度C的比值，其中含不同字母表示组间差异显著p<0.05。图3为免疫抑制小鼠血清细胞因子IL-2(A)和IL-6(B)，其中含不同字母表示组间差异显著p<0.05。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1一种含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品的制备方法，包括以下操作步骤：(1)向灭活后的植物乳杆菌JLAU103发酵液加入质量分数为75％的三氯乙酸水溶液至三氯乙酸终浓质量分数为4％，室温下搅拌处理1.5小时，离心处理后得到上清液，离心处理时，离心力大小为10000g，离心时温度为4℃，离心时间为40min，其中植物乳杆菌JLAU103发酵液是由植物乳杆菌JLAU103按体积分数为3％的接种量接种到液体SDM培养基中，37℃培养24h后制得的，(2)向上清液中加入其2倍体积的无水乙醇，3℃冷藏静置处理10小时后，离心处理，离心力大小为10000g，离心时温度为4℃，离心时间为40min，得到沉淀；(3)将沉淀用蒸馏水溶解后，装入分子截流量为8000Da的透析袋中透析45h，每8h换一次蒸馏水，再经浓缩、冷冻干燥制得粗多糖；(4)将粗多糖用蒸馏水溶解后，经DEAE-SepharoseFastFlow离子交换柱层析，上样量90mg，依次用蒸馏水、0.2mol/LNaCl、0.5mol/LNaCl进行线性梯度洗脱，洗脱速度为0.8mL/min，每管收集4mL，采用苯酚硫酸法逐管检测胞外多糖含量，按胞外多糖含量检测值分别合并收集单一峰组分，再进行去离子水透析，冷冻干燥后得到植物乳杆菌JLAU103胞外多糖；(5)按重量份计，将70份全脂牛乳、10份白砂糖、7份小球藻粉、12份鸡蛋粉、0.2份植物乳杆菌JLAU103胞外多糖、0.05份柠檬酸钠混合后，按照料水比为1:20g/ml的比例向其中加入水，搅拌处理后，依次进行均质、灭菌、冷却、接种、恒温发酵、冷却、灌装、后熟冷藏后，制得含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品，其中均质处理时，均质的温度为58℃，均质的压力18MPa，接种所用的菌种为保加利亚乳酸杆菌和嗜热链球菌，接种量为1％，恒温发酵的温度为39℃，恒温发酵处理的时间为6小时。实施例2一种含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品的制备方法，包本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：/n(1)向灭活后的植物乳杆菌JLAU103发酵液加入三氯乙酸水溶液至三氯乙酸终浓质量分数为4-6％，室温下搅拌处理1.5-2.5小时，离心处理后得到上清液；/n(2)向上清液中加入其2-3倍体积的无水乙醇，冷藏静置处理10-12小时后，离心处理，得到沉淀；/n(3)将沉淀用蒸馏水溶解后，装入分子截流量为8000～14000Da的透析袋中透析45-50h，每8h换一次蒸馏水，再经浓缩、冷冻干燥制得粗多糖；/n(4)将粗多糖用蒸馏水溶解后，经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱层析，上样量90-110mg，依次用蒸馏水、0.2mol/L NaCl、0.5mol/L NaCl进行线性梯度洗脱，洗脱速度为0.8-1.2mL/min，每管收集4-6mL，采用苯酚硫酸法逐管检测胞外多糖含量，按胞外多糖含量检测值分别合并收集单一峰组分，再进行去离子水透析，冷冻干燥后得到植物乳杆菌JLAU103胞外多糖；/n(5)按重量份计，将70-80份全脂牛乳、10-14份白砂糖、7-10份小球藻粉、12-16份鸡蛋粉、0.2-0.6份植物乳杆菌JLAU103胞外多糖、0.05-0.09份柠檬酸钠混合后，按照料水比为1:20-25g/ml的比例向其中加入水，搅拌处理后，依次进行均质、灭菌、冷却、接种、恒温发酵、冷却、灌装、后熟冷藏后，制得含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品。/n...

【技术特征摘要】
1.一种含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
(1)向灭活后的植物乳杆菌JLAU103发酵液加入三氯乙酸水溶液至三氯乙酸终浓质量分数为4-6％，室温下搅拌处理1.5-2.5小时，离心处理后得到上清液；
(2)向上清液中加入其2-3倍体积的无水乙醇，冷藏静置处理10-12小时后，离心处理，得到沉淀；
(3)将沉淀用蒸馏水溶解后，装入分子截流量为8000～14000Da的透析袋中透析45-50h，每8h换一次蒸馏水，再经浓缩、冷冻干燥制得粗多糖；
(4)将粗多糖用蒸馏水溶解后，经DEAE-SepharoseFastFlow离子交换柱层析，上样量90-110mg，依次用蒸馏水、0.2mol/LNaCl、0.5mol/LNaCl进行线性梯度洗脱，洗脱速度为0.8-1.2mL/min，每管收集4-6mL，采用苯酚硫酸法逐管检测胞外多糖含量，按胞外多糖含量检测值分别合并收集单一峰组分，再进行去离子水透析，冷冻干燥后得到植物乳杆菌JLAU103胞外多糖；
(5)按重量份计，将70-80份全脂牛乳、10-14份白砂糖、7-10份小球藻粉、12-16份鸡蛋粉、0.2-0.6份植物乳杆菌JLAU103胞外多糖、0.05-0.09份柠檬酸钠混合后，按照料水比为1:20-25g/ml的比例向其中加入水，搅拌处理后，依次进行均质、灭菌、冷却、接种、恒温发酵、冷却、灌装、后熟冷藏后，制得含有植物乳杆菌JLAU103胞外多糖的乳制品。


2.根据权利要求1所述一种含有植物乳杆菌JLAU1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王辑，李美贺，闵伟红，方丽，刘春雷，刘晓婷，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22