一种截形苜蓿水培扦插扩繁方法技术

本发明专利技术公开了一种截形苜蓿水培扦插扩繁方法，所述方法，步骤如下：1)扦插苗的制备：以土培28‑32天的截形苜蓿为扦插苗，选取茎基直径为1.5～1.8mm的第一节茎节为插穗；2)扦插：将选好的插穗上切口与枝条垂直平切，下切口与枝条成40‑50°角斜切，插穗长5～8cm，留1‑2个叶片，带有1‑2个叶芽，用0.5‑2cm厚的海绵条将插穗卷起，然后放置在培养容器中进行水培扦插；3)扦插后管理：水培扦插的第一周光照强度为160‑220μmol/m

A method of Cuttage Propagation of Alfalfa

【技术实现步骤摘要】
一种截形苜蓿水培扦插扩繁方法
本专利技术涉及截形苜蓿无性扩繁
，具体涉及一种截形苜蓿水培扦插扩繁方法。
技术介绍
截形苜蓿为豆科苜蓿属一年生草本植物，是豆科模式植物。由于截形苜蓿具有高的遗传转化效率、倍性小(2n＝16)、基因组小(～5*108bp)、自花授粉、固氮等特点，使其成为豆科生物学和基因组学研究的模式植物。截形苜蓿的植株再生时间较短，有大量的突变体和多种生态型，具有较高的生物多样性。截形苜蓿与大部分豆科植物遗传相似性很高，从截形苜蓿获得的信息可以用于其它豆科植物的研究。因此，截形苜蓿成为继拟南芥和水稻基因组测序完成后又一个大规模基因组测序的植物，并建立了Tnt1逆转座子插入突变体库。目前，利用截形苜蓿突变体对基因功能研究已成为重要的手段。另外，对截形苜蓿的研究不仅可用于豆科植物生物学的研究，也将推动其它诸如人类营养、植物的病原反应、根系发育、共生互作、植物中碳、氮和磷的新陈代谢以及植物发育的激素控制和信号转导等方面的研究。因此，截形苜蓿特别是截形苜蓿突变体作为重要的研究载体，其株系的扩繁就显得尤为重要。尽管截形苜蓿可通过自交结种繁殖保持植株的遗传特性，但由于截形苜蓿生长易受环境影响，特别是突变体种子产量普遍偏低，所以影响后期试验的开展，而无性系的扦插扩繁可以将一株母株扩繁成多株，即可用于后续试验也可收种子，因此截形苜蓿的扦插扩繁技术是非常有必要的。目前国内外截形苜蓿的扦插扩繁技术并未见报道，主要以传统的种子进行扩繁，在实际科研工作中，经常出现因种子少而不得不用3-5个月的时间先进行种子扩繁，这严重影响了试验进度。所以，需要专利技术一种方便高效且产生的无性系具有一致性高的扦插方法，技能满足截形苜蓿分子生物学研究，也能满足截形苜蓿的常规扩繁和保育。水培扦插是以水或营养液为介质代替常用基质，具有快捷方便、洁净无污染、低碳环保、易管养、成本低廉等优点，同时也可对植物的营养成分进行精确控制，有利于了解植物的生长状况，受自然条件限制小，能够在多季节大量育苗，同时还兼具可方便观察根系生长的全过程。因此，本专利技术拟通过水培扦插进行截形苜蓿的扩繁。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对截形苜蓿扦插扩繁方法的缺失，提供一种原创的生根率较高，可短时间获得大量截形苜蓿水培扦插育苗的方法。本专利技术是首次专利技术截形苜蓿扦插扩繁技术，为截形苜蓿常规保种及分子水平研究提供重要扩繁技术。本专利技术提供一种截形苜蓿水培扦插扩繁方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：1)扦插苗的制备：以土培28-32天的截形苜蓿为扦插苗，选取茎基直径为1.5～1.8mm的第一节茎节为插穗；2)扦插：向培养容器内倒入500-1000mL配好的扦插营养液，将选好的插穗上切口与枝条垂直平切，下切口与枝条成40-50°角斜切，插穗长5～8cm，留1-2个叶片，带有1-2个叶芽，用0.5-2cm厚的海棉条将插穗卷起，保证叶芽露在外面不被海绵包住；然后将其插入培养板的孔内，然后放置在培养容器中进行水培扦插；3)扦插后管理：水培扦插的第一周光照强度为160-220μmol/m2·s，光照12h(24℃)/黑暗12h(20℃)，相对湿度70-80％，一周后，光照强度变为250-300μmol/m2·s，光照16h(24℃)/黑暗8h(20℃)，相对湿度70-80％，每6-8天更换同样配方的营养液至培养24-26天；其中所述扦插营养液用改良的Fahraeus营养液和/或HB-101天然植物活力液配制；4)定植：培养到生根后，将生根的截形苜蓿水培苗在改良的1/2Hoagland液中壮苗，壮苗后即可用于定植。其中，所述以土培28-32天的截形苜蓿为扦插苗，是通过土培培养30天。其中，所述扦插，方法如下：向培养容器内倒入750mL配好的扦插营养液，将选好的插穗上切口与枝条垂直平切，下切口与枝条成45°角斜切，插穗长5～8cm，留一个叶片，带有1个叶芽，用长5～6cm，宽1.5～1.8cm，1cm厚的海棉条将插穗卷起，保证叶芽露在外面不被海绵包住。然后将其插入PVC板的小孔内，然后放置在培养容器中。其中，所述水培扦插，方法如下：以Fahraeus营养液为水培基液，加入1/1000的HB-101天然植物活力液，生根后转入改良的1/2Hoagland液中培养一周后定植。其中，所述水培扦插以塑料盆作为培养容器，在盆的外侧用黑胶带覆盖来模拟植物根系黑暗生长的条件，并可防止营养液中绿藻的生长，培养容器放置厚度为0.4-0.6cm，上有10-20个直径为1-1.5cm的圆孔PVC板。其中，所述定植，方法如下：生根20天后，将生根的截形苜蓿水培苗在改良的1/2Hoagland液中壮苗一周后可用于后续试验，或定植于育苗盆中。本专利技术最优选的方法，步骤如下：(1)扦插苗的准备截形苜蓿种子在培养箱中催芽7天后进行土培培养，培养基质为混合的营养土(营养土：蛭石：珍珠岩为1:1:1)；培养条件为：光照16h(24℃)/黑暗8h(20℃)，光照强度为280μmol/m2·s，相对湿度75％。(2)扦插装置的设计以白色塑料盆作为培养容器，在盆的外侧用黑胶带覆盖来模拟植物根系黑暗生长的条件，并可防止营养液中绿藻的生长。厚度为0.5cm的PVC板按照培养盆的大小切割后，均匀打成15个圆孔，消毒后备用。(3)扦插营养液配制：扦插营养液以其中水培培养采用改良的Fahraeus营养液，并加入1/1000的天然植物活力液，室温保存备用。其中，Fahraeus液配方同上，天然植物活力液为淘宝电商上所购买，如(日本HB-101品牌)。Fahraeus营养液的配方及配制方法如下：注：营养液的配制时，须每个药品单独溶解后再进行混合，配制好的母液存于棕色瓶中，并放于黑暗中储存。配置营养液工作液时，分别加入100mL大量、1mL微量、4mL柠檬酸铁、1mLCaCl2母液定容于1L蒸馏水中，pH调至6.8备用。(4)插穗选择：以(1)中所述，培养30天的截形苜蓿用于扦插，选取茎基直径为1.5～1.8mm的枝条第一节茎节为插穗；(5)扦插：向培养容器内倒入750mL配好的扦插营养液，将选好的插穗上切口与枝条垂直平切，下切口与枝条成45°角斜切，插穗长6～8cm，不留叶片，带有1个叶芽，用剪好的海面条将插穗卷起，保证叶芽露在外面不被海绵包住。然后将其插入PVC板的小孔内，然后放置在培养容器中；(6)扦插后管理：水培的第一周光照强度为180μmol/m2·s，光照12h(24℃)/黑暗12h(20℃)，相对湿度75％。一周后光照强度变为280μmol/m2·s，光照16h(24℃)/黑暗8h(20℃)，相对湿度75％，每7天更换同样配方的营养液至培养20天。(7)定植：培养7天后陆续生根，生根20天后，生根率达到97.43％，将生根的截形苜蓿水培苗在改良的1/2Hoagland液中所述的营养液中壮苗一周后可用于后续试验，或定植于育苗盆中。改良1/2的Hoagland液配方如下：<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种截形苜蓿水培扦插扩繁方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：/n1)扦插苗的制备：以土培28-32天的截形苜蓿为扦插苗，选取茎基直径为1.5～1.8mm的第一节茎节为插穗；/n2)扦插：向培养容器内倒入500-1000mL配好的扦插营养液，将选好的插穗上切口与枝条垂直平切，下切口与枝条成40-50°角斜切，插穗长5～8cm，留1-2个叶片，带有1-2个叶芽，用0.5-2cm厚的海棉条将插穗卷起，保证叶芽露在外面不被海绵包住；然后将其插入培养板的孔内，然后放置在培养容器中进行水培扦插；/n3)扦插后管理：水培扦插的第一周光照强度为160-220μmol/m

【技术特征摘要】
1.一种截形苜蓿水培扦插扩繁方法，其特征在于，所述方法，步骤如下：
1)扦插苗的制备：以土培28-32天的截形苜蓿为扦插苗，选取茎基直径为1.5～1.8mm的第一节茎节为插穗；
2)扦插：向培养容器内倒入500-1000mL配好的扦插营养液，将选好的插穗上切口与枝条垂直平切，下切口与枝条成40-50°角斜切，插穗长5～8cm，留1-2个叶片，带有1-2个叶芽，用0.5-2cm厚的海棉条将插穗卷起，保证叶芽露在外面不被海绵包住；然后将其插入培养板的孔内，然后放置在培养容器中进行水培扦插；
3)扦插后管理：水培扦插的第一周光照强度为160-220μmol/m2·s，光照12h(24℃)/黑暗12h(20℃)，相对湿度70-80％，一周后，光照强度变为250-300μmol/m2·s，光照16h(24℃)/黑暗8h(20℃)，相对湿度70-80％，每6-8天更换同样配方的营养液至培养24-26天；其中所述扦插营养液用改良的Fahraeus营养液和/或HB-101天然植物活力液配制；
4)定植：培养到生根后，将生根的截形苜蓿水培苗在改良的1/2Hoagland液中壮苗，壮苗后即可用于定植。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：其中所述以土培28-32天的截形苜蓿为...

【专利技术属性】
技术研发人员：丛丽丽，张文玉，刘扬，王孜成，旦真措，杨国锋，孙娟，栗振义，柴茂峰，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37