【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】C-5甾醇去饱和的优化本专利技术涉及一种改进的用于生产7-脱氢胆固醇(7-DHC)的方法，7-脱氢胆固醇是对于维生素D3或其衍生物/代谢物的生物技术生产而言重要的中间体。本专利技术的特征在于表达具有改善的C-5甾醇去饱和酶活性的酶的经修饰的宿主菌株，以及它们在用于生产维生素D3或其衍生物和/或代谢产物的方法中的用途。维生素D3(也称为胆钙化醇或胆骨化醇)可以在哺乳动物皮肤中由前维生素D3(也称为7-脱氢胆固醇或7-DHC)合成，前维生素D3是在暴露于紫外光时胆固醇生物合成的产物，由此7-DHC被光化学转化为前维生素D3，前维生素D3在体温下异构化为生物活性形式维生素D3。在肝脏中，维生素D3转化为无生物活性的25-羟基维生素D3(也称为骨化二醇(calcidiol/calcifediol)、25-羟基胆钙化醇、25-OH-D3或HyD)，这是维生素D3的主要循环形式。进一步的羟基化发生在肾脏中。对于维生素D3的工业生产，(原则上)化学和生物技术合成两者都是可行的。化学合成开始于从例如羊毛脂中分离出胆固醇，然后将所述胆固醇脱氢成7-DHC，7-...
【技术保护点】
1.一种产生胆固醇的酵母细胞，所述产生胆固醇的酵母细胞包含具有C5-甾醇去饱和酶活性的酶，所述酶与在用于生产7-脱氢胆固醇(7-DHC)的合适宿主细胞中(异源)表达的SEQ ID NO:2具有至少约45％，例如至少50％、52％、60％、70％、80％、90％、92％、95％、98％或至多100％的同一性，其中与未修饰的宿主细胞相比，7-DHC与包括羊毛甾醇和/或烯胆甾烷醇在内的副产物的比率增大了至少约5％。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180522 CH 00629/181.一种产生胆固醇的酵母细胞，所述产生胆固醇的酵母细胞包含具有C5-甾醇去饱和酶活性的酶，所述酶与在用于生产7-脱氢胆固醇(7-DHC)的合适宿主细胞中(异源)表达的SEQIDNO:2具有至少约45％，例如至少50％、52％、60％、70％、80％、90％、92％、95％、98％或至多100％的同一性，其中与未修饰的宿主细胞相比，7-DHC与包括羊毛甾醇和/或烯胆甾烷醇在内的副产物的比率增大了至少约5％。
2.根据权利要求1所述的产生胆固醇的酵母细胞，所述产生胆固醇的酵母细胞包含具有C5-甾醇去饱和酶活性的酶，所述酵母细胞产生甾醇混合物，基于甾醇总量，所述甾醇混合物包含至少约84％的7-DHC，优选地包含至少约85％、88％、90％、92％、95％、97％、98％或至多100％的7-DHC。
3.根据权利要求1或2所述的产生胆固醇的酵母细胞，其中7-DHC与胆甾-7-烯醇和/或羊毛甾醇的比率在约18的范围内。
4.根据权利要求1或2所述的产生胆固醇的酵母细胞，其中7-DHC与胆甾-7-烯醇和/或羊毛甾醇的比率增加了至少约5％。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的产生胆固醇的酵母细胞，所述产生胆固醇的酵母细胞表达具有C5-甾醇去饱和酶活性的异源酶，所述异源酶与SEQIDNO:2具有至少约45％，例如至少50％、52％、60％、70％、80％、90％、92％、95％、98％或至多100％的同一性。
6.根据权利要求4所述的产生胆固醇的酵母细胞，所述产生胆固醇的酵母细胞表达具有C5-甾醇去饱和酶活性的异源酶，所述酶选自由以下项组成的组：酵母属，例如酿酒酵母；耶氏酵母属，例如脂解耶氏酵母；克鲁维酵母属，例如乳酸克鲁维酵母；裂殖酵母属，例如粟酒裂殖酵母；毕赤酵母属，例如巴斯德毕赤酵母；假丝酵母属，例如白假丝酵母；青霉菌属，例如娄地青霉；曲霉属，例如构巢曲霉；隐球菌属，例如新型隐球菌；例如稻热病菌(Magneporteoryzae)；绿僵菌属，例如蝗绿僵菌；以及黑粉菌属，例如玉米黑粉菌。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的产生胆固醇的酵母细胞，其中ERG5和ERG6被灭活。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的产生胆固醇的酵母细胞，其中所述酵母细胞表达选自具有甾醇Δ24还原酶活性的EC1.3.1.72的异源酶，优选地其中所述异源酶源自植物或脊椎动物，更优选地源自人、猪、狗、小鼠、大鼠、马或斑马鱼。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的产生胆固...
【专利技术属性】
技术研发人员：克里斯托弗·马克·法雷尔，丽莎·安·拉普拉德，奥托·马丁·莱曼，约书亚·特鲁哈特，巴斯蒂安·吉恩·沃尔夫冈·切弗勒克斯，
申请(专利权)人：帝斯曼知识产权资产管理有限公司，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL
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