【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】白介素-2/白介素-2受体α融合蛋白以及使用方法1.相关申请的交叉引用本申请要求2018年3月28日提交的美国临时申请号62/649,379的权益，将其通过引用以其整体并入本文。2.经由EFS-WEB电子提交的序列表的引用与本申请一起提交的ASCII文本文件(名称：3338_100PC01_Seqlisting_ST25.txt；大小：354,542字节；以及创建日期：2019年3月27日)中电子提交的序列表的内容通过引用以其整体并入本文。3.
本文公开的主题总体上涉及采用白介素-2/白介素-2受体α融合蛋白来调节免疫应答的方法和组合物。4.
技术介绍
白介素-2(IL2或IL-2)是一种调节免疫系统的关键方面的生物细胞因子。IL2已经用于尝试增强患有癌症、炎性疾病或自身免疫疾病的患者的免疫应答。IL2是有效的T细胞生长因子，其促进免疫应答(包括抗原激活的T细胞的克隆扩增)，驱动CD4+T辅助(Th)1和Th2细胞的发育，最终使得CD8+细胞毒性T淋巴细胞(CTL)分化，并且阻止CD4+Th17和T卵...
【技术保护点】
1.一种融合蛋白，其包含：/n(a)包含白介素-2(IL2)多肽的第一多肽；和/n(b)包含白介素-2受体α(IL2Rα)多肽的胞外结构域的第二多肽；/n其中(i)与天然IL2Rα的胞外结构域(SEQ ID NO:7)相比，所述IL2Rα多肽的胞外结构域至少少一个糖基化；和/或(ii)与天然IL2(SEQ IDNO:2)相比，所述IL2多肽至少少一个糖基化；并且/n其中所述融合蛋白具有IL2活性。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180328 US 62/649,3791.一种融合蛋白，其包含：
(a)包含白介素-2(IL2)多肽的第一多肽；和
(b)包含白介素-2受体α(IL2Rα)多肽的胞外结构域的第二多肽；
其中(i)与天然IL2Rα的胞外结构域(SEQIDNO:7)相比，所述IL2Rα多肽的胞外结构域至少少一个糖基化；和/或(ii)与天然IL2(SEQIDNO:2)相比，所述IL2多肽至少少一个糖基化；并且
其中所述融合蛋白具有IL2活性。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其中与天然IL2Rα的胞外结构域(SEQIDNO:7)相比，所述IL2Rα多肽的胞外结构域至少少一个糖基化、至少少两个糖基化、至少少三个糖基化、至少少四个糖基化、至少少五个糖基化、至少少六个糖基化、至少少七个糖基化、至少少八个糖基化或至少少九个糖基化。
3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白，其中与天然IL2(SEQIDNO:2)相比，所述IL2多肽至少少一个糖基化。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的融合蛋白，其中所述第一多肽包含与SEQIDNO:2至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的融合蛋白，其中所述第二多肽包含与SEQIDNO:12至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％相同的氨基酸序列。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的融合蛋白，其中所述至少少一个糖基化的IL2Rα多肽的胞外结构域包含去除糖基化的突变。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其中所述突变去除O-糖基化和/或N-糖基化。
8.根据权利要求7所述的融合蛋白，其中所述突变去除O-糖基化。
9.根据权利要求7所述的融合蛋白，其中所述突变去除N-糖基化。
10.根据权利要求6至9中任一项所述的融合蛋白，其中所述突变是对应于SEQIDNO:7的氨基酸167至219、氨基酸168至219、氨基酸169至219、氨基酸170至219、氨基酸171至219、氨基酸172至219、氨基酸173至219、氨基酸174至219、氨基酸175至219、氨基酸176至219、氨基酸177至219、氨基酸178至219、氨基酸179至219、氨基酸180至219、氨基酸181至219、氨基酸182至219、氨基酸183至219、氨基酸184至219、氨基酸185至219、氨基酸186至219、氨基酸187至219、氨基酸188至219、氨基酸189至219、氨基酸190至219、氨基酸191至219或氨基酸192至219的缺失。
11.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中所述第二多肽是SEQIDNO:11。
12.根据权利要求10所述的融合蛋白，其中所述第二多肽是SEQIDNO:12。
13.根据权利要求6至9中任一项所述的融合蛋白，其中所述突变是用未糖基化的氨基酸对糖基化的氨基酸的一个或多个取代。
14.根据权利要求6至9中任一项所述的融合蛋白，其中所述突变是用在附近氨基酸处不允许糖基化的氨基酸对在附近氨基酸处允许糖基化的氨基酸的一个或多个取代。
15.根据权利要求13所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是在氨基酸N49、氨基酸N68、氨基酸T74、氨基酸T85、氨基酸T197、氨基酸T203、氨基酸T208和氨基酸T216或其任何组合处，其中所述氨基酸位置对应于SEQIDNO:7。
16.根据权利要求15所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是从天冬酰胺到选自以下的氨基酸：丙氨酸、苏氨酸、丝氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
17.根据权利要求15所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是从苏氨酸到选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
18.根据权利要求15至17中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸N49。
19.根据权利要求18所述的融合蛋白，其中N49突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、苏氨酸、丝氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
20.根据权利要求15至19中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸N68。
21.根据权利要求20所述的融合蛋白，其中N68突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、苏氨酸、丝氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
22.根据权利要求15至21中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸T74。
23.根据权利要求22所述的融合蛋白，其中T74突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
24.根据权利要求15至23中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸T85。
25.根据权利要求24所述的融合蛋白，其中T85突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
26.根据权利要求15至25中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸T197。
27.根据权利要求26所述的融合蛋白，其中T197突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
28.根据权利要求15至27中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸T203。
29.根据权利要求28所述的融合蛋白，其中T203突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
30.根据权利要求15至29中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸T208。
31.根据权利要求30所述的融合蛋白，其中T208突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
32.根据权利要求15至31中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸T216。
33.根据权利要求32所述的融合蛋白，其中T216突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
34.根据权利要求14所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是在氨基酸S50、氨基酸S51、氨基酸T69、氨基酸T70、氨基酸C192或其任何组合处，其中所述氨基酸位置对应于SEQIDNO:7。
35.根据权利要求34所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是在氨基酸S50处。
36.根据权利要求35所述的融合蛋白，其中S50突变为脯氨酸。
37.根据权利要求34至36中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸S51。
38.根据权利要求37所述的融合蛋白，其中S51突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
39.根据权利要求34至38中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸T69。
40.根据权利要求39所述的融合蛋白，其中T69突变为脯氨酸。
41.根据权利要求34至40中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸T70。
42.根据权利要求41所述的融合蛋白，其中T70突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
43.根据权利要求34至42中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是氨基酸C192。
44.根据权利要求43所述的融合蛋白，其中C192突变为选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
45.根据权利要求1至44中任一项所述的融合蛋白，其中所述至少少一个糖基化的IL2多肽包含去除糖基化的突变。
46.根据权利要求45所述的融合蛋白，其中所述突变是用未糖基化的氨基酸对糖基化的氨基酸的一个或多个取代。
47.根据权利要求45所述的融合蛋白，其中所述突变是用在附近氨基酸处不允许糖基化的氨基酸对在附近氨基酸处允许糖基化的氨基酸的一个或多个取代。
48.根据权利要求46或47所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是从丙氨酸到选自以下的氨基酸：精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
49.根据权利要求46或47所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是从苏氨酸到选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
50.根据权利要求46或47所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是从半胱氨酸到选自以下的氨基酸：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
51.根据权利要求50所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是从半胱氨酸到丝氨酸。
52.根据权利要求50所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是从半胱氨酸到丙氨酸。
53.根据权利要求50所述的融合蛋白，其中所述一个或多个取代是从半胱氨酸到缬氨酸。
54.根据权利要求46或47所述的融合蛋白，其中与对应于SEQIDNO:2相比，所述一个或多个取代是在氨基酸T3处。
55.根据权利要求47至54中任一项所述的融合蛋白，其中所述取代中的一个是在氨基酸C125处。
56.根据权利要求55所述的融合蛋白，其中所述氨基酸C125处的取代选自C125S、C125A和C125V。
57.根据权利要求45所述的融合蛋白，其中所述突变是缺失。
58.根据权利要求57所述的融合蛋白，其中所述缺失是在氨基酸A1处。
59.根据权利要求1至58中任一项所述的融合蛋白，其中将所述融合蛋白进行酶去糖基化或化学去糖基化。
60.根据权利要求59所述的融合蛋白，其中将所述融合蛋白通过碱、肼解、PNG酶F、EndoH、O-糖苷酶或其任何组合进行去糖基化。
61....
【专利技术属性】
技术研发人员：M·斯特拉瑟斯，J·H·戴维斯，M·L·道尔，P·A·马迪亚，
申请(专利权)人：百时美施贵宝公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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