一种双齿围沙蚕蛋白源ACE抑制肽的制作方法技术

本发明专利技术公开了一种双齿围沙蚕蛋白源ACE抑制肽的制作方法，该方法步骤如下：首先通过单因素实验和正交优化实验，得到提取双齿尾沙蚕蛋白源ACE抑制肽的最优条件，结果表明碱性蛋白酶水解沙蚕蛋白得到ACE抑制肽的最佳pH值、温度和固液比。与此同时，通过膜分离技术将沙蚕酶解物分离成不同分子量片段的抑制肽，选出最具活性的分子量片段。最后，测定了提取出的双齿尾沙蚕抑制肽片段对ACE的抑制率。本实验证明了食源性降血压肽对于高血压有着很好的抑制效果，可以开发出能投入市场的降血压药物。

【技术实现步骤摘要】
一种双齿围沙蚕蛋白源ACE抑制肽的制作方法
本专利技术属于食品加工
，具体涉及一种双齿围沙蚕蛋白源ACE抑制肽的制作方法。
技术介绍
我国每年为治疗高血压所花的人民币将近500亿元，仅低于中风所花的费用。化学合成的降压药物，如卡托普利、阿利吉仑和氯沙坦等，虽然对于高血压疾病的治疗有着明显的疗效，但是这些药物的副作用也很明显，例如皮疹、蛋白尿等现象，也可能出现药物依赖的现象。然而，从天然植物、动物和微生物体中提取的降压肽，具有一些化学合成的降压药物所不具备的优点：首先，疗效显著，对患者的血压控制效果明显，而对正常者没有影响；其次，安全性高，由于降血压肽是在温和条件下，通过蛋白酶酶解食品制备的食品级酶，不含化学合成试剂和添加剂；然后，用途广泛，食品中的天然多肽除了降血压外，对于肿瘤的预防、血液凝固的治疗和免疫力的提高也有效果；最后，潜力巨大，由于ACE抑制肽的水溶性较好，因此抑制肽可以轻松的被加入到市场上现有的各式各样的保健品中，提高保健品的保健效果。沙蚕是一种软体无脊椎动物，一般生活在海边的人会称它为海蜈蚣、水百脚等。我国的沙蚕种类丰富，有超过八十种，它们集中分布在我国的东部沿海一带。沙蚕具有很高的营养价值，其体内的脂肪和蛋白含量丰富，还有多种矿物质和维生素。沙蚕是一味传统的海洋中药，可以改善口燥咽干、消除肿痛、去除毒疮，修复受损肌肤，被誉为海中“冬虫夏草”。中国专利技术专利CN201810668300.5公开了一种元宝枫籽活性肽的制备方法，通过超声辅助提取元宝枫籽分离蛋白，利用Alcalase蛋白酶对元宝枫籽蛋白进行水解制备元宝枫籽活性肽。中国专利技术专利CN201811214660.4公开了一种刺参来源的ACE抑制活性肽，采用复合蛋白酶对刺参酶解，经超滤膜进行分离，再通过柱层析、高效液相色谱分离纯化得到较好的ACE抑制活性肽。沙蚕蛋白质含量非常高，但是此前更多应用于饵料，目前未有双齿围沙蚕蛋白来源的ACE抑制活性肽分离纯化的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是解决现有技术不足，提供一种双齿围沙蚕蛋白源ACE抑制肽的制作方法，利用碱提酸沉的方法提取沙蚕蛋白，再利用碱性蛋白酶对沙蚕蛋白水解，优化固液比、酶解pH值和酶解温度等单因素，确定水解条件，对酶解后片段采用超滤的方法，得到对ACE抑制效果最佳的多肽。本专利技术的一种双齿围沙蚕蛋白源ACE抑制肽的制作方法，具体步骤如下：（1）粉碎沙蚕，脱脂处理；（2）提取沙蚕蛋白：将预处理好的脱脂双齿围沙蚕粉采用1mol/L的稀碱溶液浸提60min，温度控制在50-60℃，pH调整到8，然后离心除去底层不溶物，取上清液用盐酸调节pH到双齿围沙蚕蛋白的等电点4.5，静置后使得蛋白质得到充分凝集后初步形成沉淀，再次离心过滤除去上清液，得到沉淀蛋白质，再将pH为4.5的沉淀反复加入蒸馏水洗涤，将沉淀的pH调节到7.0为止，将所得沉淀蛋白质充分预冻后放入冷冻干燥机中采用冷冻干燥法将沉淀蛋白质干燥至恒重，得到双齿围沙蚕蛋白冻干粉，冷冻备用；（3）对沙蚕蛋白酶解处理：称取沙蚕蛋白冻干粉，选取碱性蛋白酶配成酶解液，对沙蚕蛋白冻干粉水解4h，水解结束后经高温灭酶，然后离心取上清液，检测各自酶解产物的ACE抑制率，抑制率越高说明酶解效果越好；（4）筛选高活性分子量片段：将离心过后的酶解液透过超滤膜，得到不同分子质量的分离产物。作为本专利技术的一种优选方案，步骤（3）碱性蛋白酶水解沙蚕蛋白时，固液比为1:6～1:14g/mL。作为本专利技术的一种优选方案，步骤（3）碱性蛋白酶水解沙蚕蛋白时，酶解液的pH值为6～14，进一步优选为6~12。作为本专利技术的一种优选方案，步骤（3）碱性蛋白酶水解沙蚕蛋白时，酶解温度为40～60℃。作为本专利技术的一种优选方案，步骤（4）中酶解液透过超滤膜时，超滤膜的大小为1～10kDa。有益效果目前未有制备双齿围沙蚕蛋白来源的ACE抑制活性肽的报道。沙蚕蛋白质含量非常高，但是此前更多应用于饵料。本专利技术以双齿围沙蚕蛋白为原料，通过碱提酸沉的方法，提取沙蚕蛋白，用碱性蛋白酶水解，通过超滤的方法得到对ACE具有抑制活性的多肽，提取方法简单，应用价值高。附图说明图1是不同固液比对双齿尾沙蚕蛋白源ACE抑制率的影响；图2是不同酶解液pH值对双齿尾沙蚕蛋白源ACE抑制率的影响；图3是不同酶解温度对双齿尾沙蚕蛋白源ACE抑制率的影响。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术做进一步详细说明。所用试剂或者仪器设备未注明生产厂商的，均视为可以通过市场购买的常规产品。实施例1（1）粉碎沙蚕，脱脂处理；（2）提取沙蚕蛋白：将预处理好的脱脂双齿围沙蚕粉采用1mol/L的稀碱溶液浸提60min，温度控制在50-60℃，pH调整到8，然后采用冷冻离心机离心15min除去底层不溶物，取上清液不断搅拌，同时向溶液中加入1mol/L的盐酸调节pH到4.5，静置30min后使得蛋白质得到充分凝集后初步形成沉淀，再次采用冷冻离心机离心15min后过滤除去上清液，得到沉淀蛋白质，再将pH为4.5的沉淀反复加入蒸馏水洗涤，将沉淀的pH调节到7.0为止，将所得沉淀蛋白质充分预冻后放入冷冻干燥机中采用冷冻干燥法将沉淀蛋白质干燥至恒重，得到双齿围沙蚕蛋白冻干粉，置于冰箱-18℃冷冻室中冷冻备用；（3）对沙蚕蛋白酶解处理：称取沙蚕蛋白冻干粉，选取碱性蛋白酶，配成固液比为1:6g/mL、pH值为6的酶解液，酶解温度为60℃，对沙蚕蛋白冻干粉水解4h，水解结束后经高温灭酶，然后放入冷冻离心机中，冷冻离心机转速调到5000r/min，时间设置为15min进行离心，取上清液；（4）筛选高活性分子量片段：将离心过后的酶解液透过10kDa超滤膜，得到超滤液小于10kDa分子质量的分离产物，检测其对ACE的抑制效果，其ACE抑制率为58.3%。实施例2同实施例1，与实施例1不同的是步骤（3）中固液比为1:14g/mL，pH值为7，酶解温度为40℃；步骤（4）中将离心过后的酶解液透过1kDa超滤膜，得到超滤液小于1kDa分子质量的分离产物，其ACE抑制率为67.4%。实施例3同实施例1，与实施例1不同的是步骤（3）中固液比为1:8g/mL，pH值为9，酶解温度为45℃；步骤（4）中将离心过后的酶解液透过3kDa超滤膜，得到超滤液小于3kDa分子质量的分离产物，其ACE抑制率为60.3%。实施例4同实施例1，与实施例1不同的是步骤（3）中固液比为1:10g/mL，pH值为11，酶解温度为55℃；步骤（4）中将离心过后的酶解液透过3kDa超滤膜，得到超滤液小于3kDa分子质量的分离产物，其ACE抑制率为63.7%。实施例5同实施例1，与实施例1不同的是步骤（3）中固液比为1:12g/mL，pH值为12，酶解温度为50℃，最终得到的分离产物，其ACE抑制率为55.2%。性能评价A.单因素试验优化ACE抑制肽制备工艺。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双齿围沙蚕蛋白源ACE抑制肽的制作方法包括以下步骤：/n（1）粉碎沙蚕，脱脂处理；/n（2）提取沙蚕蛋白：将预处理好的脱脂双齿围沙蚕粉采用1mol/L的稀碱溶液浸提60min，温度控制在50-60℃，pH调整到8，然后离心除去底层不溶物，取上清液，用盐酸调节pH到双齿围沙蚕蛋白的等电点4.5，静置后使得蛋白质得到充分凝集后初步形成沉淀，再次离心过滤除去上清液，得到沉淀蛋白质，再将pH为4.5的沉淀反复加入蒸馏水洗涤，将沉淀的pH调节到7.0为止，将所得沉淀蛋白质充分预冻后放入冷冻干燥机中采用冷冻干燥法将沉淀蛋白质干燥至恒重，得到双齿围沙蚕蛋白冻干粉，冷冻备用；/n（3）对沙蚕蛋白酶解处理：称取沙蚕蛋白冻干粉，选取碱性蛋白酶配成酶解液，对沙蚕蛋白冻干粉水解4h，水解结束后经高温灭酶，然后离心取上清液，检测各自酶解产物的ACE抑制率，抑制率越高说明酶解效果越好；/n（4）筛选高活性分子量片段：将离心过后的酶解液透过超滤膜，得到不同分子质量的分离产物。/n

【技术特征摘要】
1.一种双齿围沙蚕蛋白源ACE抑制肽的制作方法包括以下步骤：
（1）粉碎沙蚕，脱脂处理；
（2）提取沙蚕蛋白：将预处理好的脱脂双齿围沙蚕粉采用1mol/L的稀碱溶液浸提60min，温度控制在50-60℃，pH调整到8，然后离心除去底层不溶物，取上清液，用盐酸调节pH到双齿围沙蚕蛋白的等电点4.5，静置后使得蛋白质得到充分凝集后初步形成沉淀，再次离心过滤除去上清液，得到沉淀蛋白质，再将pH为4.5的沉淀反复加入蒸馏水洗涤，将沉淀的pH调节到7.0为止，将所得沉淀蛋白质充分预冻后放入冷冻干燥机中采用冷冻干燥法将沉淀蛋白质干燥至恒重，得到双齿围沙蚕蛋白冻干粉，冷冻备用；
（3）对沙蚕蛋白酶解处理：称取沙蚕蛋白冻干粉，选取碱性蛋白酶配成酶解液，对沙蚕蛋白冻干粉水解4h，水解结束后经高温灭酶，然后离心取上清液，检测各自酶解产物的ACE抑制率，抑制率越高...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏建辉，陶杰杰，唐喆，傅润泽，陈洪兴，
申请(专利权)人：盐城工学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32