一种用于扫描电子显微镜的细菌制样方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种用于扫描电子显微镜的细菌制样方法及试剂盒，属于微生物检验方法领域。所述制样方法包括如下步骤：1)将壳聚糖溶液覆盖于玻璃片，自然干燥，使玻璃片表面覆盖一层壳聚糖膜；2)将细菌悬液置于覆被壳聚糖膜的玻璃片表面，静置，使菌体吸附于壳聚糖膜；3)醛类溶液固定，磷酸盐缓冲液洗涤；4)梯度浓度乙醇溶液脱水；5)二氧化碳临界点干燥；6)镀金。所述试剂盒包括所述步骤1)所述的壳聚糖溶液。本发明专利技术的方法可将细菌牢牢固定在玻璃片上，便于扫描电子显微镜观察。

【技术实现步骤摘要】
一种用于扫描电子显微镜的细菌制样方法及试剂盒
本专利技术属于微生物检验方法领域。
技术介绍
包括细菌在内的绝大多数生物样品具有含水量高，质地柔软、导电性差等特点，在进行扫描电镜观察前，要对样品作相应的处理，使其不含水分、最大限度保持样品的形貌、具有良好的导电性和较高的二次电子发射率。样品需要先用中性福尔马林或戊二醛等醛类溶液固定，以保持样品的形貌并使样品硬化；然后通过浓度梯度乙醇脱水处理，用乙醇逐步替换样品所含水分；接下来使用二氧化碳临界点干燥法去除样品中的乙醇，使样品完全干燥；最后用离子溅射法在样品表面镀一层金，使样品导电，便于扫描电镜观察。现有的针对细菌样品的固定、清洗和脱水是在离心管里进行的，每步操作之后，需要通过离心将菌体和固定液、磷酸缓冲液和各浓度的乙醇分离，弃去上清液，然后加入下一步操作的溶液将菌体重悬，再重复上述操作。干燥好的菌体粉末还需要挑出粘到碳胶带上再通过离子溅射镀金。王伟等在模拟微重力环境对大肠杆菌形态与表面超微结构的影响研究[J].化学与生物工程，2011，28：14-17公开了用于扫描电镜的大肠杆菌制样方法，在本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将细菌固定于玻璃片的方法，其特征在于：包括如下步骤：/n1)将壳聚糖溶液覆盖于玻璃片，自然干燥，使玻璃片表面覆盖一层壳聚糖膜；/n2)将细菌悬液置于覆被壳聚糖膜的玻璃片表面，静置，使菌体吸附于壳聚糖膜。/n

【技术特征摘要】
1.一种将细菌固定于玻璃片的方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)将壳聚糖溶液覆盖于玻璃片，自然干燥，使玻璃片表面覆盖一层壳聚糖膜；
2)将细菌悬液置于覆被壳聚糖膜的玻璃片表面，静置，使菌体吸附于壳聚糖膜。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1)所述壳聚糖溶液浓度为0.1～3％(m/v)；优选地，为2.5％(m/v)。


3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤1)所述壳聚糖溶液以醋酸溶液为溶剂；
优选地，所述醋酸溶液浓度为0.5％～2％(v/v)；进一步优选地，醋酸溶液浓度为1％(v/v)；
进一步优选地，步骤2)所述静置持续5min以上；优选地，静置持续时间为30min。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述细菌为大肠杆菌或金黄色葡萄球菌。


5.一种用于扫描电子显微镜的细菌制样方法，其特征在于：所述制样方法包括如下步骤：
1)使用权利要求1～4任一所述方法将细菌悬液固定于细胞爬片；
2)加醛类溶液固定细...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏波，张杰，周利，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51