一种肝癌诊断及治疗致癌激酶标志物的应用制造技术

一种肝癌诊断及治疗致癌激酶标志物的应用，本发明专利技术公开了致癌激酶STK39在肝癌诊断及治疗中的应用。本发明专利技术首次发现STK39在正常肝组织及肝癌组织中的表达差异，肝癌组织中STK39表达量明显高于正常组织，且STK39高表达患者具有较差预后，提示STK39与肝癌发生发展与预后密切相关。敲低、敲除及抑制STK39可明显抑制肝癌细胞的增长及侵袭等功能，提示STK39可作为肝癌诊断及治疗的新靶点。检查STK39表达的试剂盒与技术可应用于肝癌诊断与预后预测，靶向致癌激酶STK39的抗体或小分子抑制剂等治疗策略有望应用于肝癌治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种肝癌诊断及治疗致癌激酶标志物的应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种肝癌诊断及治疗致癌激酶标志物的应用。
技术介绍
肝癌是一种常见的恶性肿瘤，具有发病率高，生存率低，临床治疗效果极差等特点。肝癌的发病率在所有恶性肿瘤中排名第五，然而其致死率在所有恶性肿瘤中却排名第二。据统计，全球每年有近85万新的肝癌患者产生，约75万人死于肝癌。更值得注意的是，在所有肝癌患者中，超过50%的患者位于中国，即中国是肝癌大国。而面对如此威胁巨大的肿瘤，人类应对的方式却极少。尽管目前人们已经发现HBV、HCV感染，长期饮酒，黄曲霉素污染的食物以及肥胖等诱发肝癌危险因素，但肝癌的具体发病分子机制及治疗方式仍然有待深入及提高。当前，治疗肝癌的方式主要包括手术治疗，化疗，分子靶向治疗以及免疫治疗等手段，然而，这些方式大多只能延长患者数月的寿命，患者仍然时刻面临死亡的危险。因此，深入探究肝癌发生的分子机制、寻找诊断治疗肝癌的新靶标，对于提高患者的治疗效果及预后极为迫切。蛋白激酶在肿瘤发生、发展过程中具有至关重要的作用，在肝癌中，蛋白激酶也扮演十分重要的角色。寻找关键致癌激酶，通过靶向相关蛋白激酶对治疗肝癌至关重要。STK39属于Ste20-样激酶家族一员，是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，主要由N端脯氨酸和丙氨酸重复序列，丝氨酸/苏氨酸激酶催化结构域，核定位信号以及C端区域所组成。STK39通过调控机体离子稳态在肾盐转运和血压调控过程中具有重要作用，然而关于其在肝癌发生、发展过程中的作用及机制目前尚无报道。
技术实现思路
解决的技术问题：本专利技术针对上述技术问题，提供一种肝癌诊断及治疗致癌激酶标志物的应用。具体涉及提供STK39作为检测靶点在STK39高表达肝癌患者的治疗中的应用；还涉及以STK39作为治疗靶点在制备或筛选治疗肝癌或抑制肝癌转移药物中的应用。技术方案：STK39作为诊断标志物在制备肝癌诊断试剂盒中的应用。STK39作为预后标志物在制备肝癌预后评价试剂盒中的应用。STK39作为靶点在筛选肝癌治疗药物中的应用。抑制STK39表达的化合物在制备治疗肝癌药物中的应用。抑制STK39活性的化合物在制备治疗肝癌药物中的应用。有益效果：本专利技术公开了检测致癌激酶STK39表达量在肝癌诊断及治疗中的应用。首次发现STK39在肝癌中高表达，STK39可以通过调控ERK通路进而调控肝癌细胞的增殖、迁移及侵袭等功能。抑制STK39可明显抑制肝癌的发生、发展。检测STK39表达可较好指导STK39高表达肝癌患者的治疗，靶向STK39可筛选治疗肝癌候选药物。附图说明图1为STK39在肝癌组织中高表达示意图，其中：（A）Microarray表达谱分析癌旁组织及肝癌组织中STK39表达量；（B）QPCR分析癌旁组织及肝癌组织中STK39表达水平；（C）WesternBlot分析癌旁组织及肝癌组织中STK39表达水平；（D）QPCR分析正常肝细胞及肝癌细胞株中STK39表达水平；（E）WesternBlot分析正常肝细胞及肝癌细胞株中STK39表达水平；（F）免疫组化分析癌旁组织及肝癌组织中STK39表达水平；（G）TCGA数据库分析STK39表达量与患者预后关系；图2为肝癌细胞中敲低或敲除STK39可抑制肝癌细胞增殖示意图，其中：（A）WesternBlot检测HuH7细胞中siRNA敲底STK39效率；（B）活细胞计数，CCK8及克隆形成检测siRNA敲低STK39后HuH7的增殖能力；（C）WesternBlot检测HuH7细胞中shRNA敲底STK39效率；（D）活细胞计数，CCK8及克隆形成检测shRNA敲低STK39后HuH7的增殖能力；（E）WesternBlot检测HCCLM3细胞中shRNA敲底STK39效率；（F）活细胞计数，CCK8及克隆形成检测shRNA敲低STK39后HCCLM3的增殖能力；（G）WesternBlot检测HuH7中敲除及重新过表达STK39效率；（H）CCK8检测HuH7中敲除及重新过表达STK39后肝癌细胞的增殖能力；（I）3D培养模型检测shRNA敲低STK39后HCCLM3小球形成能力；图3为敲低或敲除STK39抑制肝癌细胞肿瘤形成能力示意图，其中：（A）野生型及STK39敲除HuH7细胞裸鼠荷瘤后肿瘤大小、体积及重量检测；（B）对照及STK39敲低HuH7细胞裸鼠荷瘤后肿瘤大小、体积及重量检测；图4为STK39敲低诱导肝癌细胞凋亡及周期阻滞示意图，其中：（A）TUNEL染色分析STK39敲低后肝癌肿瘤组织中细胞凋亡水平；（B）TUNEL染色分析STK39敲低后HuH7细胞凋亡水平；（C）TUNEL染色分析STK39敲低后Hep3B细胞凋亡水平；（D）流式分析STK39敲低后HCCLM3细胞凋亡水平；（E）PI染色流式分析STK39敲低后HCCLM3细胞周期变化；图5为敲低STK39抑制肝癌细胞迁移、侵袭及EMT过程示意图，其中：（A）Transwell检测STK39敲低后Hep3B细胞迁移能力；（B）Transwell检测STK39敲低后HuH7细胞迁移能力；（C）Transwell检测STK39过表达后HuH7细胞迁移能力；（D）Transwell检测STK39过表达后HuH7细胞侵袭能力；（E）伤口愈合实验检测STK39敲低后HuH7细胞迁移能力；（F）伤口愈合实验检测STK39敲低后HCCLM3细胞迁移能力；（G）WesternBlot检测STK39敲低后HuH7细胞EMT标志物表达水平；（H）WesternBlot检测STK39过表达后HuH7细胞EMT标志物表达水平；图6为STK39敲低后抑制ERK信号通路示意图，其中：（A）HuH7细胞中敲低STK39后进行RNA-Seq测序，分析差异表达基因；（B）敲低STK39后，细胞信号通路富集分析；（C）WesternBlot检测HCCLM3细胞中敲低STK39后p-ERK、p-AKT以及β-Catenin通路变化；（D）WesternBlot检测HuH7细胞中敲低STK39后p-ERK、p-AKT以及β-Catenin通路变化；（E）WesternBlot检测STK39敲低后肿瘤组织中p-ERK变化水平；图7为STK39抑制剂可抑制肝癌肿瘤形成示意图，其中：（A）STK39过表达及对照HCCLM3细胞经U0126处理后CCK8分析肝癌细胞增殖能力；（B）STK39过表达及对照HuH7细胞经U0126处理后Transwell检测肝癌细胞迁移能力；（C）CCK8检测HuH7及HCCLM3在STK39抑制剂Closantel处理后的增殖能力；...

【技术保护点】
1.STK39作为诊断标志物在制备肝癌诊断试剂盒中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.STK39作为诊断标志物在制备肝癌诊断试剂盒中的应用。


2.STK39作为预后标志物在制备肝癌预后评价试剂盒中的应用。


3.STK39作为靶点...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏洪平，张成飞，周国仁，许萍，莫骁，徐昊珺，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32