【技术实现步骤摘要】
一种生产碱性果胶裂解酶的集胞藻PCC6803藻株及其构建方法
本专利技术涉及一种生产碱性果胶裂解酶的集胞藻PCC6803藻株及其构建方法，属于工业微生物领域。
技术介绍
随着全球人口密度的逐渐增大，能源短缺问题以及环境问题也越来越严峻，果胶裂解酶作为一种温和有效的催化剂，在生物质降解方面有巨大的潜力，其在工业生产中的应用也越来越广泛。植物细胞壁主要由多糖和蛋白质组成，部分含有木质素。细胞壁多糖主要分为纤维素、半纤维素、果胶质，纤维素位于半纤维素和果胶质形成的基质中。果胶质广泛存在于高等植物中，是植物细胞间质和初生细胞壁的重要组分，在植物细胞中起着粘合作用。果胶质是高分子聚合物，骨架为由α-1，4糖苷键连接的半乳糖醛酸残基，部分甲酯化，在富含聚L-鼠李糖区域有木聚糖和阿拉伯半乳聚糖侧链。作为一种结构复杂的大分子物质，果胶质的存在阻碍了我们对可再生生物质资源在食品、材料和能源方面的降解利用。能降解果胶质的复合酶统称为果胶酶。按照酶的作用方式，果胶酶可分为原果胶酶、果胶酯酶和解聚酶。原果胶酶可将不溶性果胶质分解为可溶性果胶...
【技术保护点】
1.一种生产碱性果胶裂解酶的集胞藻PCC6803的基因工程藻株及其构建方法。/n
【技术特征摘要】
1.一种生产碱性果胶裂解酶的集胞藻PCC6803的基因工程藻株及其构建方法。
2.如权利要求1所述的基因工程藻株，其构建方法包括如下步骤：
(1)以序列表中SEQIDNO：1和SEQIDNO：2为上下游引物，以野生集胞藻PCC6803基因组为模板，通过pcr扩增技术获得光感启动子兼上游臂psbA2-up基因片段，通过引物在3’端引入Hpa1酶切位点，获得的序列如序列表中SEQIDNO：3所示；以序列表中SEQIDNO：4和SEQIDNO：5为上下游引物，以GenBank登录号为U02439.1的大肠杆菌为模板，通过pcr扩增技术获得大肠杆菌终止子T1T2基因片段，获得的序列如序列表中SEQIDNO：6所示；以序列表中SEQIDNO：7和SEQIDNO：8为上下游引物，以野生集胞藻PCC6803基因组为模板，通过pcr扩增技术获得下游臂downstream基因片段，获得的序列如序列表中SEQIDNO：9所示；
(2)将步骤(1)获得的大肠杆菌终止子T1T2基因片段进行PStI和BamHI双酶切，与经过相同双酶切的pBluescriptSK质粒通过T4连接酶连接，得到质粒pBluescriptSKT1T2；
将步骤(1)获得的downstream基因片段用SacI与SacII双酶切后，与经相同酶切的质粒pBluescriptSKT1T2连接，得到质粒pBluescriptSKT1T2-downstream；
用限制性内切酶BamHI分别单酶切pBluescriptSKT1T2-downstream与pUC4K质粒，电泳后分别胶回收pBluescriptSKT1T2-downstream载体片段和kana抗性基因片段。对载体片段经磷酸化处理后与kana抗性基因片段连接，得到质粒pBluescriptSKT1T2-npt-downstream；
用限制性内切酶ApaI处理质粒pBluescriptSKT1T2-npt-downstream，获得pBluescriptSKT1T2-npt-downstream载体片段，对载体片段经磷酸化处理后与步骤(1)中的psbA2-up基因片段进行同源重组，获得质粒p5st1t2npt；
(3)以序列表中SEQIDNO：10和SEQIDNO：11为上下游引物，以GenBank数据库中克雷伯菌属(Klebsiellasp.Y1)的相应基因序列为模板，通过pcr扩增技术获得碱性果胶裂解酶基因片段pety1，序列如序列表中SEQIDNO：12所示；
(4)用限制性内切酶HpaI单酶切质粒p5st1t2npt，获得p5st1t2npt载体片段，对载体片段经磷酸化处理后与步骤(3)中的pety1基因片段进行同源...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴玉杰，孟庆营，贺傲，赵潇潇，孟旋，陈高，贾士儒，张语婕，李浩湖，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。