一种从有毒贝壳中提取新石房蛤毒素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从有毒贝壳中提取新石房蛤毒素的方法，包括A、肝胰粉制备；B、毒素粗提：将肝胰粉先与水混合涡旋，静置后加入体积为肝胰粉质量2.5倍的酸提取液，涡旋后，依次进行水浴加热、超声提取、离心取上清、50～60℃水浴旋转蒸发获得毒素粗提溶液；C、净化：采用葡聚糖凝胶层析柱对毒素粗提溶液进行净化，毒素粗提溶液离心取上清过凝胶柱，先以200倍体积的去离子水洗脱，流速0.9mL/min，随后改用0.1mol/L醋酸溶液洗脱，收集含麻痹性贝类毒素组分的馏分，然后合并、浓缩近干；D、分离纯化：将步骤C收集的样品溶解，采用液相色谱进行分离、纯化，根据目标物保留时间收集色谱峰，连续制备合并馏分，浓缩，用含0.1％甲酸的75％乙腈水溶解，保存于‑40℃冰箱中。

【技术实现步骤摘要】
一种从有毒贝壳中提取新石房蛤毒素的方法
本专利技术属于海洋生物毒素制备
，具体涉及一种从有毒贝壳中提取新石房蛤毒素的方法。
技术介绍
麻痹性贝类毒素由石房蛤毒素(Saxiotixn,STX)及其衍生物组成，STX是目前发现的非蛋白有机小分子中毒性最强的毒素之一，其毒性是氰化钾的1500倍。由于麻痹性贝类毒素毒性高、具不可预见性且在全球广泛分布，多次引发消费者中毒甚至死亡事件。因此，欧盟、美国、加拿大等多个国家或地区对其制定了严格的限量标准并加以监控。然而，毒素检测技术作为监控的必要手段，受麻痹性贝类毒素标准品的匮乏的影响，而受到了诸多限制。此外，麻痹性贝类毒素在赤潮研究、工具药、医学、军事等方面都有潜在的用途。目前，以加拿大国家海洋研究所为首的科研机构致力于贝类毒素有证标准物质的研发，目前已经建立了较为完善的贝类毒素分离纯化方法，并研制出20余种贝类毒素纯度标准物质，但由于对商业机密的保护，有关麻痹性贝类毒素分离纯化的详细方法少有公开。目前中国市场中尚无自主研发的麻痹性贝类毒素标准样品，在相关检测与科研工作中使用的麻痹性贝类毒素标本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从有毒贝壳中提取石新房蛤毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nA、肝胰粉制备/n从有毒贝壳中取出肝胰，沥水、冻干、均质混匀后得到肝胰粉，将体积与肝胰粉质量比为2～3的除杂溶剂与肝胰粉混匀，超声处理并过滤后，将肝胰粉烘干、均质；/nB、毒素粗提/n将肝胰粉与水以质量体积比为1:2的比例混合涡旋，静置后加入体积为肝胰粉质量2.5倍的酸提取液，涡旋后，置于100℃水浴加热15～30min，超声提取10～20min后于3000～4000r/min离心6～10min，取上清后，于30～60℃水浴旋转蒸发至近干，去离子水溶液残留物，获得毒素粗提溶液；/nC、净化/n采用葡聚糖凝胶层析柱对毒素粗...

【技术特征摘要】
1.一种从有毒贝壳中提取石新房蛤毒素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
A、肝胰粉制备
从有毒贝壳中取出肝胰，沥水、冻干、均质混匀后得到肝胰粉，将体积与肝胰粉质量比为2～3的除杂溶剂与肝胰粉混匀，超声处理并过滤后，将肝胰粉烘干、均质；
B、毒素粗提
将肝胰粉与水以质量体积比为1:2的比例混合涡旋，静置后加入体积为肝胰粉质量2.5倍的酸提取液，涡旋后，置于100℃水浴加热15～30min，超声提取10～20min后于3000～4000r/min离心6～10min，取上清后，于30～60℃水浴旋转蒸发至近干，去离子水溶液残留物，获得毒素粗提溶液；
C、净化
采用葡聚糖凝胶层析柱对毒素粗提溶液进行净化，将毒素粗提溶液于8000～10000r/min离心4～7min，取其上清液过凝胶柱进行层析净化；先以200倍体积的去离子水洗脱，流速0.5～0.9mL/min，随后改用0.1mol/L醋酸溶液洗脱，自动馏分收集器收集馏分，设置每管收集时间为15min，同时将每管收集液取一部分过0.22μm滤膜于进样小瓶中，进LC-MS/MS分析；收集含麻痹性贝类毒素组分的馏分，然后将其合并、30～40℃减压蒸馏浓缩近干；
D、分离纯化：
将步骤C收集的样品溶解于含0.1％甲酸的20％乙腈溶液中，采用配有光电二极管阵列检测器的液相色谱进行分离、纯化，根据目标物保留时间收集色谱峰，连续制备合并馏分，30～40℃减压蒸馏浓缩...

【专利技术属性】
技术研发人员：汤云瑜，沈晓盛，娄晓祎，方长玲，张璇，杨光昕，孔聪，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31