一种缓解小鼠急性肠道炎症的多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种缓解小鼠急性肠道炎症的多酚‑淀粉样纤维水凝胶的制备方法。通过高温酸性条件下加热制得鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维，再将多酚简单地添加到淀粉样纤维中，自组装形成可逆型水凝胶。通过构建IBD动物模型，用该水凝胶灌胃治疗小鼠，发现水凝胶能显著缓解DSS诱导的急性结肠炎症。本发明专利技术中使用的所有材料均为食品级，与用于预防或治疗肠道炎症的药物相比更安全，为开发具有抗炎活性和提高生物利用度的茶多酚产品和药物提供新的思路。

【技术实现步骤摘要】
一种缓解小鼠急性肠道炎症的多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备方法
本专利技术涉及多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备方法并缓解DSS诱导的小鼠急性肠道炎症的

技术介绍
炎症性肠病(inflammatoryboweldisease，IBD)是慢性非特异性炎症疾病，包括溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，UC)和克罗恩病(Crohn′sdisease，CD)。IBD产生的症状包括体重减轻、失血性腹泻和严重的腹痛，目前无法治愈，最常用的药物如氨基水杨酸盐和免疫调节剂都显示出严重的副作用，如影响肾功能。近年来食品和植物中的膳食多酚对于预防和治疗结肠炎引起了广泛的兴趣，许多膳食多酚已被用于预防和治疗啮齿动物模型中慢性和急性结肠炎。在之前的研究中多酚类化合物已被证明能够诱导淀粉样肽向无序和无定形聚集体的进展，但在本专利技术中简单地将EGCG添加到存在于向列相中的淀粉样原纤维中，通过自组装能成功地驱动水凝胶的形成，完善了多酚与蛋白质淀粉样纤维相互作用的理论。本专利技术在高浓度淀粉样纤维条件下，添加多酚来驱动淀粉样纤维的自组装，极大地提高了EGCG的负载量，同时该水凝胶对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠肠道炎症具有抗炎作用。本专利技术所使用的材料均为食品级，具有良好的生物相容性及安全性。
技术实现思路
本专利技术旨在提供缓解小鼠急性肠道炎症的多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备方法。本方法的技术方案如下：(1)溶菌酶淀粉样纤维的制备，其特征在于：对鸡蛋清溶菌酶用超纯水于4℃下透析纯化，然后对透析后溶菌酶溶液进行冻干处理。称取一定质量的鸡蛋清溶菌酶冻干粉溶于超纯水中制得2wt％的鸡蛋清溶菌酶溶液，用HCl调节pH至2，在90℃下，磁力搅拌孵育8h后制得鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维溶液(2wt％，pH2)。(2)多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备方法，其特征在于：称取一定质量的EGCG溶于Bis-Tris缓冲液(10mM，pH7.2)中，将步骤(1)所得的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维与EGCG溶液以一定体积比混合，磁力搅拌30s，静置形成水凝胶。(3)小鼠IBD模型的构建及治疗，其特征在于：将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常饮食空白组(NC)、DSS诱导组、DSS诱导+水凝胶组3组，每组10只。所有小鼠经一周适应性饲养后，开始为期14天的IBD动物试验。试验第1-7天，除空白小鼠正常饮水外，其余小鼠给与1.5％的DSS溶液作为饮用水。试验第8-14天，停止给与DSS处理，NC组和DSS组小鼠灌胃无菌水，DSS+水凝胶组灌胃水凝胶样品(200μL/只/天)。试验期间，每天记录小鼠体重、饲料及饮用水质量和固体粪便质量。试验结束，通过眼球取血，血液经处理后得到血清于-80℃保存。随后采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖小鼠，收集各组织器官。解剖过程中，结肠组织(从盲肠到肛门)被完整的取出并测量其长度，并拍照。再用生理盐水冲洗结肠组织，后纵向剪切均分成两份，其中左半边结肠组织卷成瑞士卷(Swiss-Roll)固定于4％多聚甲醛中，后用于病理学分析。动物试验结果显示水凝胶显著缓解了DSS诱导的急性结肠炎。本专利技术具有以下优点：首次制备多酚诱导的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维自组装形成的可逆型水凝胶，大大提高了EGCG的负载量。该可逆型水凝胶能够显著缓解DSS诱导的小鼠肠道炎症，且使用的材料均为食品级，具有很好地生物相容性及安全性。附图说明图1不同处理组对小鼠体重和固体粪便质量的影响图2不同处理组对小鼠结肠长度及血清中炎症因子IFN-γ、IL-1β含量的影响图3不同处理组小鼠的结肠苏木精和曙红(H&E)染色切片图具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合本专利技术实施例对本专利技术实施例中的技术方案进行进一步描述。所描述的实施例是本专利技术的部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例一：(1)对鸡蛋清溶菌酶用超纯水于4℃下透析纯化，然后对透析后溶菌酶溶液进行冻干处理。称取一定质量的鸡蛋清溶菌酶冻干粉溶于超纯水中制得2wt％的鸡蛋清溶菌酶溶液，用HCl调节pH至2，在90℃下，磁力搅拌孵育8h后制得鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维母液。(2)称取一定质量的EGCG于Bis-Tris缓冲液(10mM，pH7.2)中，将步骤(1)所得的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维与EGCG溶液以一定体积比混合，磁力搅拌30s，静置形成多酚-淀粉样纤维水凝胶(EGCG浓度为25mg/mL)。(3)将30只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常饮食空白组(NC)、DSS诱导组和DSS诱导+水凝胶组，每组10只。所有小鼠经一周适应性饲养后，开始为期14天的IBD动物试验。试验第1-7天，除空白小鼠正常饮水外，其余小鼠给与1.5％的DSS溶液作为饮用水。试验第8-14天，停止给与DSS处理，NC组和DSS组小鼠灌胃无菌水，DSS+水凝胶组灌胃水凝胶样品(200μL/只/天)。试验期间，每天记录小鼠体重、饲料及饮用水质量和固体粪便质量。试验结束，通过眼球取血，血液经处理后得到血清于-80℃保存。随后采用颈椎脱臼法处死小鼠，解剖小鼠，收集各组织器官。解剖过程中，结肠组织(从盲肠到肛门)被完整的取出并测量其长度，并拍照。再用生理盐水冲洗结肠组织，后纵向剪切均分成两份，其中左半边结肠组织卷成瑞士卷(Swiss-Roll)固定于4％多聚甲醛中，后用于病理学分析。动物试验结果显示水凝胶显著缓解了DSS诱导的急性结肠炎。实施例二：(1)血清中炎症因子检测按市售欣博盛ELISA试剂盒说明书，对血清中与炎症相关因子干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素(IL-1β)含量进行检测。(2)组织病理学研究将新鲜结肠组织在4％多聚甲醛中固定超过24小时，将Swiss-Roll包埋在石蜡中并切成4μm全厚切片。随后用苏木精和曙红(H&E)染色切片以表征组织学变化，并通过NikonECLIPSETI-SR(Tokyo，Japan)荧光显微镜观察。从图1～图3可以看出，该多酚-淀粉样纤维水凝胶能显著缓解DSS诱导的小鼠急性肠道炎症。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种缓解小鼠急性肠道炎症的多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维的制备；多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备；小鼠IBD模型的构建及治疗。/n

【技术特征摘要】
1.一种缓解小鼠急性肠道炎症的多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备方法，其特征在于包括以下操作步骤：鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维的制备；多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备；小鼠IBD模型的构建及治疗。


2.根据权利1中的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维的制备，其特征在于：将鸡蛋清溶菌酶用超纯水于4℃下透析纯化，然后对透析后溶菌酶溶液进行冻干处理。称取一定质量的鸡蛋清溶菌酶冻干粉溶于超纯水中制得2wt％鸡蛋清溶菌酶溶液，用HCl调节pH至2，在90℃下，磁力搅拌孵育8h后制得鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维溶液(2wt％，pH2)。


3.根据权利1中的多酚-淀粉样纤维水凝胶的制备，其特征在于：称取一定质量的EGCG溶于Bis-Tris缓冲液(10mM，pH7.2)中，将步骤(1)所得的鸡蛋清溶菌酶淀粉样纤维与EGCG溶液以一定体积比混合，磁力搅拌30s，静置形成水凝胶。


4.根据权利1中的小鼠IBD模型的构建...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡冰，于诗婕，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32