一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法技术

本发明专利技术提供了一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，属于植物组培技术领域。本发明专利技术以壮丽含笑成熟种子为外植体，通过外植体消毒、种子无菌萌发、增殖与生根培养步骤，为壮丽含笑的人工繁殖、引种驯化、迁地保护、近地保护、就地保护等提供材料，而且有效避免了壮丽含笑野生资源自然消失与灭亡、扩大自然界中种群数量及其在园林园艺景观上开发利用等方面的问题。本发明专利技术提供的方法，种子10天开始萌发，种子无菌萌发率83％，繁殖周期60天，增殖系数为5.1，生根率为93％，移栽成活率96％，极大地提高了壮丽含笑的繁殖数量与生长速率，为该物种的保护与繁育、引种驯化、保存和规模化生产供了技术支撑。

【技术实现步骤摘要】
一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法
本专利技术属于植物组培
，具体涉及一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法。
技术介绍
壮丽含笑(Michelialacei)隶属于木兰科含笑属，壮丽含笑为中国云南特有物种，分布区域狭窄，目前发现的少数野生居群主要分布于云南。壮丽含笑具有较高的观赏、经济价值。近年来，由于人类采食其种子、开荒、放牧等活动的干扰导致居群自然更新复壮缓慢，种群持续衰退，几近灭绝。壮丽含笑结果量少，种子量不多，并存在结果大小年的情况，自然繁殖和更新都较为困难。迄今为止，现有技术没有关于壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖和相关的生物技术方面的报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，解决壮丽含笑在野外分布区域狭窄、种群数量稀少、种子苗量不足的问题。本专利技术提供了一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，包括以下步骤：1)将消毒后的壮丽含笑成熟的带红色假种皮的种子接种于萌发培养基中萌发培养，得到萌发的种子苗；所述萌发培养基为1/4MS固体培养基、1/3MS固体培养基、1/2MS固体培养基或纯琼脂培养基；pH值5.8；2)将所述萌发节芽接种至增殖与继代培养基中增殖继代培养，得到增殖苗；所述增殖与继代培养基为含0.1～1.5mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂的MS培养基，pH值5.8；3)将所述增殖苗接种至壮苗与生根培养基上生根培养，得到生根植株；所述壮苗与生根培养基为含0.1～1.2mg/LIBA、0.1～1.2mg/LIAA、30g/L蔗糖、5.0g/L琼脂的MS培养基，pH值5.8；4)将所述生根植株进行瓶苗移栽，培养，得到壮丽含笑植株。优选的，所述萌发培养为暗培养，所述萌发培养的时间为30d。优选的，所述增殖与继代培养基为含1.0mg/L6-BA、0.5mg/LIAA、蔗糖30g/L、琼脂5g/L的MS培养基，pH值5.8。优选的，所述壮苗与生根培养基为含1.0mg/LIBA、1.0mg/LIAA、蔗糖30g/L、琼脂5g/L的MS培养基，pH值5.8。优选的，所述增殖继代培养或所述壮苗生根培养的条件如下：温度为23～28℃；光暗周期为10:14；光照强度为1300～1700Lux；所述增殖继代培养的时间为58～62d；所述壮苗生根培养的时间为28～32d。优选的，所述瓶苗移栽前，预先提前一周将生根植株置放于大棚炼苗。优选的，瓶苗移栽用基质为珍珠岩、腐殖土和生红土的混合物；所述混合物中，珍珠岩、腐殖土和生红土的体积比为1：1：2。优选的，所述基质用800倍多菌灵进行喷施拌土，用塑料膜密封消毒7天，调节pH值至5.8。优选的，所述培养的大棚温度为20～30℃，空气湿度为70％～80％，基质湿度为40％～50％。本专利技术提供了一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，具有以下有益效果：1)本专利技术建立了有效的壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，解决了其分布狭窄、种群数量极少等问题，填补了壮丽含笑在生物技术上的研发空白。2)本专利技术通过壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，成苗容易，繁殖步骤简化，有效繁殖速率高，为保存和扩大壮丽含笑种群，意义重大。3)本专利技术通过壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，高度保持了壮丽含笑的遗传稳定性和一致性，为壮丽含笑全面的开发和持续利用奠定了基础。4)本专利技术的壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法繁育的壮丽含笑，30天后种子萌发率83％，在60天内增殖系数为5.1，生根率为93％，移栽成活率为96％，极大地提高了壮丽含笑的繁殖系数，为该物种的引种驯化、保存、园林园艺及其科研价值的发挥利用提供了非常有效的繁殖方法。附图说明图1为本专利技术壮丽含笑萌发情况；图2为本专利技术壮丽含笑组培繁殖情况；图3为本专利技术壮丽含笑组培生根情况。具体实施方式本专利技术提供了一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，包括以下步骤：1)将消毒后的壮丽含笑成熟的带红色假种皮的种子接种于萌发培养基中萌发培养，得到萌发节芽；所述萌发培养基为1/4MS固体培养基、1/3MS固体培养基、1/2MS固体培养基或纯琼脂培养基，pH值为5.8；2)将所述萌发节芽接种至增殖与继代培养基中增殖继代培养，得到增殖苗；所述增殖与继代培养基为含0.1～1.5mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂的MS培养基，pH值5.8；3)将所述增殖苗接种至壮苗与生根培养基上生根培养，得到生根植株；所述壮苗与生根培养基为含0.1～1.2mg/LIBA、0.1～1.2mg/LIAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂的MS培养基，pH值5.8；4)将所述生根植株进行瓶苗移栽，培养，得到壮丽含笑植株。本专利技术将消毒后的壮丽含笑成熟的带红色假种皮的种子接种于萌发培养基中萌发培养，得到萌发芽；所述萌发培养基为1/4MS固体培养基、1/3MS固体培养基、1/2MS固体培养基或纯琼脂培养基，pH值均为5.8。在本专利技术中，所述消毒优选为在无菌条件下，用体积浓度75％酒精对未裂开的聚合果进行表面消毒，晾干水分后，用无菌的镊子和刀片取出带红色假种皮的种子。在本专利技术中，所述萌发培养优选为暗培养，培养温度优选为23～28℃，更优选为25～28℃。所述接种优选每瓶接种一粒种子。所述萌发培养基的pH值优选为5.8。所述萌发培养基优选为1/2MS固体培养基。由于种子自带营养物，萌发培养时培养基不添加激素，添加了反而抑制萌发。所述萌发培养的时间优选为28～32d，更优选为30d。培养10天后，种子开始萌发。得到萌发芽后，本专利技术将所述萌发节芽接种至增殖与继代培养基中增殖继代培养，得到增殖苗；所述增殖与继代培养基为含0.1～1.5mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂的MS培养基，pH值5.8。在本专利技术中，所述增殖与继代培养基优选为含0.5～1.2mg/L6-BA、0.5～1.0mg/LIAA、蔗糖30g/L、琼脂5g/L的MS培养基，更优选为含1.0mg/L6-BA、0.5mg/LIAA、蔗糖30g/L、琼脂5g/L的MS培养基，pH值5.8。所述增殖继代培养的条件优选如下：温度为23～28℃，更优选为25～28℃；所述光暗周期为10:14；光照强度优选为1300～1700Lux，更优选为1500Lux。所述增殖继代培养的时间优选为58～62d，更优选为60d。在本专利技术中，在所述增殖与继代培养基上增殖培养，是以节芽方式进行繁殖，生长迅速，60天生长高度达4.7cm，平均繁殖倍数5.1。得到增殖苗后，本专利技术将所述增殖苗接种至壮苗与生根培养基上生根培养，得到生根植株；所述壮苗与生根培养基为含0.1～1.2mg/LIBA、0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：/n1)将消毒后的壮丽含笑成熟的带红色假种皮的种子接种于萌发培养基中萌发培养，得到萌发节芽；所述萌发培养基为1/4MS固体培养基、1/3MS固体培养基、1/2MS固体培养基或纯琼脂培养基，pH值为5.8；/n2)将所述萌发节芽接种至增殖与继代培养基中增殖继代培养，得到增殖苗；所述增殖与继代培养基为含0.1～1.5mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/L IAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂的MS培养基，pH值5.8；/n3)将所述增殖苗接种至壮苗与生根培养基上生根培养，得到生根植株；/n所述壮苗与生根培养基为含0.1～1.2mg/L IBA、0.1～1.2mg/L IAA、30g/L蔗糖、5.0g/L琼脂的MS培养基，pH值5.8；/n4)将所述生根植株进行瓶苗移栽，培养，得到壮丽含笑植株。/n

【技术特征摘要】
1.一种壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将消毒后的壮丽含笑成熟的带红色假种皮的种子接种于萌发培养基中萌发培养，得到萌发节芽；所述萌发培养基为1/4MS固体培养基、1/3MS固体培养基、1/2MS固体培养基或纯琼脂培养基，pH值为5.8；
2)将所述萌发节芽接种至增殖与继代培养基中增殖继代培养，得到增殖苗；所述增殖与继代培养基为含0.1～1.5mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIAA、30g/L蔗糖、5g/L琼脂的MS培养基，pH值5.8；
3)将所述增殖苗接种至壮苗与生根培养基上生根培养，得到生根植株；
所述壮苗与生根培养基为含0.1～1.2mg/LIBA、0.1～1.2mg/LIAA、30g/L蔗糖、5.0g/L琼脂的MS培养基，pH值5.8；
4)将所述生根植株进行瓶苗移栽，培养，得到壮丽含笑植株。


2.根据权利要求1所述壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，其特征在于，所述萌发培养为暗培养，所述萌发培养的时间为28～32d。


3.根据权利要求1所述壮丽含笑种子无菌萌发及快速繁殖方法，其特征在于，所述增殖与继代培养基为含1.0mg/L6-BA、0.5mg/LIAA、蔗糖30g/L、琼脂5g/L的MS培养基，pH值5.8。


4.根据权利要求1所述壮丽含笑种...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗桂芬，孙卫邦，葛佳，陶丽丹，蔡磊，
申请(专利权)人：中国科学院昆明植物研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53