【技术实现步骤摘要】
荧光蛋白和/或偶联蛋白单克隆抗体标记方法及其试剂盒
本专利技术涉及免疫学
，具体涉及一种荧光蛋白和/或偶联蛋白单克隆抗体标记方法及其试剂盒。
技术介绍
单克隆抗体是通过采用细胞融合技术，使小鼠脾免疫细胞与小鼠骨髓瘤细胞相互融合形成杂交瘤细胞，在体外培养的条件下分泌产生的针对单一抗原决定簇的抗体。B淋巴细胞在抗原的刺激下，可以分化、增殖形成具有针对这种抗原的特异性抗体。可以将体外生长繁殖的非分泌型的骨髓瘤细胞与这种B淋巴细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞既具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力又具有骨髓瘤的体外无限生长的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或是注射入动物体内就能获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术就是单克隆抗体技术。这类单克隆抗体不仅具有相同的特异性，且其Ig的类、亚类型都是相同的，因为它是由单个B淋巴细胞(即基因完全相同的杂交瘤细胞)增殖形成的细胞系产生，具有特异性高、可复制性、可重复性、检测灵敏性等优点。免疫荧光技术又被称为荧光抗体探针技术，免疫荧光技术是先...
【技术保护点】
1.一种荧光蛋白和/或偶联蛋白与单克隆抗体的标记方法，其特征在于，所述的标记方法包括以下步骤：/n(1)荧光蛋白和/或偶联蛋白经脱盐处理后与巯基封闭剂发生反应；/n(2)步骤(1)得到的巯基封闭的荧光蛋白和/或偶联蛋白的氨基与交联剂A发生反应；/n(3)单克隆抗体的巯基化反应，所述的单克隆抗体的巯基化反应包括单克隆抗体与交联剂B的反应，及单克隆抗体-交联剂B与二硫键还原剂的还原反应；/n(4)步骤(3)得到的巯基化的单克隆抗体与步骤(2)得到的交联荧光蛋白和/或偶联蛋白进行定向偶联反应，反应完全后，经NEM、Cys及PBS处理步骤，得到荧光标记抗体。/n
【技术特征摘要】
1.一种荧光蛋白和/或偶联蛋白与单克隆抗体的标记方法，其特征在于，所述的标记方法包括以下步骤：
(1)荧光蛋白和/或偶联蛋白经脱盐处理后与巯基封闭剂发生反应；
(2)步骤(1)得到的巯基封闭的荧光蛋白和/或偶联蛋白的氨基与交联剂A发生反应；
(3)单克隆抗体的巯基化反应，所述的单克隆抗体的巯基化反应包括单克隆抗体与交联剂B的反应，及单克隆抗体-交联剂B与二硫键还原剂的还原反应；
(4)步骤(3)得到的巯基化的单克隆抗体与步骤(2)得到的交联荧光蛋白和/或偶联蛋白进行定向偶联反应，反应完全后，经NEM、Cys及PBS处理步骤，得到荧光标记抗体。
2.根据权利要求1所述的一种荧光蛋白和/或偶联蛋白与单克隆抗体的标记方法，其特征在于，所述的荧光蛋白和/或偶联蛋白包括PERCP、PE、PECy5、PECy5.5、PECy7、PerCPCy5.5、APCCy5.5、APCCy7或者APC。
3.根据权利要求1所述的一种荧光蛋白和/或偶联蛋白与单克隆抗体的标记方法，其特征在于，步骤(1)中所述的脱盐处理包括以下步骤：
1)将荧光蛋白和/或偶联蛋白悬浊液震荡混合均匀，离心，去上清；
2)向沉淀中加入含有EDTA的PBS缓冲液，待充分溶解后离心，取上清；
3)将上清液移至超滤管内，采用含有0.25mMEDTA的PBS缓冲液对上清液进行超滤处理，获得脱盐后的荧光蛋白和/或偶联蛋白。
4.根据权利要求1所述的一种荧光蛋白和/或偶联蛋白与单克隆抗体的标记方法，其特征在于，步骤(1)中所述的巯基封闭剂包括氨乙基化试剂、碘乙酰胺、NEM、BMPA或者MMTS，优选为NEM；所述的荧光蛋白和/或偶联蛋白与所述的巯基封闭剂的摩尔比为1:3-1:1000，优选为1:50；所述的荧光蛋白和/或偶联蛋白与所述的巯基封闭剂的反应条件为25℃反应1.5h。
5.根据权利要求1所述的一种荧光蛋白和/或偶联蛋白与单克隆抗体的标记方法，其特征在于，步骤(2)中所述的交联剂A包括S-SMCC、磺基化SMCC、聚乙二醇化SMCC或者LC-SMCC，优选为S-SMCC；所述的巯基封闭的荧光蛋白和/或偶联蛋白与所述的交联剂A的摩尔比为1:5-1:100，优选为1:20；所述的巯基封闭的荧光蛋白和/或偶联蛋白与所述的交联剂A的反应条件为25℃反应1.5h。
6.根据权利要求1所述的一种荧光蛋白和/或偶联蛋白与单克隆抗体的标记方法，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：张洋，
申请(专利权)人：浙江正熙生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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