一种检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器制造技术

一种检测作物中CP4‑EPSPS蛋白的电化学免疫传感器，包括玻碳电极及识别元件，其玻碳电极表面经复合材料修饰，所述复合材料由石墨烯与富含氨基的PAMAM超声形成；以金标抗体作为识别元件，胶体金标记的单克隆抗体CP4mAb通过共价结合的方式连接于玻碳电极表面的复合材料上，经5％BSA封闭后构建电化学免疫传感器，本发明专利技术中，金纳米粒子的引入提高了电活性物质的固载量，放大检测信号，对耐除草剂蛋白CP4‑EPSPS的检测特异性和灵敏性均较高，操作简单，反应迅速，灵敏度高，稳定性好，实现对痕量CP4‑EPSPS抗原的定量检测，为转基因作物的高灵敏、定量分析提供了新思路。

【技术实现步骤摘要】
一种检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器
本专利技术属于抗除草剂蛋白的检测领域，具体涉及一种检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器。
技术介绍
截至2018年，转基因作物种植面积达1.971亿公顷，与1996年相比增加了100倍之多。在转基因作物的品系中，耐除草剂作物是转基因作物中的一个重要品系，是通过将外源的CP4-epsps基因插入到作物的基因组中构建而成，使作物对草甘膦农药有一定的耐受性。转基因技术的迅速发展给农业生产带来便利的同时，也对环境产生一定的威胁，如转基因蛋白可通过根系释放到土壤中，使非靶标作物产生对草甘膦农药的耐药性。同时，转基因作物的非法种植及流转到超市的现象也时有发生，因而需要加强对转基因作物实时及有效的监控。目前，用于检测转基因作物的方法是基于PCR的检测技术，如常规PCR法，RealtimePCR法等，该类方法定位于核酸水平的检测，其检测灵敏度高，但样品预处理获得DNA的过程及操作步骤繁琐，不适用于转基因作物的快速筛查；基于蛋白分析的检测方法，如ELISA法、蛋白芯片等，需要较本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器，其包括玻碳电极和识别元件；其特征在于，所述玻碳电极表面经复合材料修饰，所述复合材料由石墨烯与乙二胺核的树状分子PAMAM超声形成；所述识别元件为金标抗体，其为胶体金标记的单克隆抗体CP4mAb，金标抗体通过共价结合的方式连接于玻碳电极表面的复合材料上，再由5％BSA对修饰电极的非特异性结合位点进行封闭。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器，其包括玻碳电极和识别元件；其特征在于，所述玻碳电极表面经复合材料修饰，所述复合材料由石墨烯与乙二胺核的树状分子PAMAM超声形成；所述识别元件为金标抗体，其为胶体金标记的单克隆抗体CP4mAb，金标抗体通过共价结合的方式连接于玻碳电极表面的复合材料上，再由5％BSA对修饰电极的非特异性结合位点进行封闭。


2.根据权利要求1所述检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器，其特征在于，所述乙二胺核的树状分子PAMAM溶于甲醇溶液，与石墨烯在N,N-二甲基甲酰胺中超声4h以上获得复合材料，所述石墨烯、N,N-二甲基甲酰胺和PAMAM甲醇溶液的质量体积比为石墨烯、N,N-二甲基甲酰胺和PAMAM甲醇溶液＝0.5-1：1：0.025-0.05，石墨烯单位为mg，N,N-二甲基甲酰胺和PAMAM甲醇溶液单位为mL。


3.根据权利要求1所述检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器，其特征在于，所述玻碳电极表面用于修饰的复合材料用量为5-7.5μL，金标抗体的使用量为1.5-1.8μg。


4.根据权利要求1所述检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器，其特征在于，所述金标抗体中，所述胶体金的粒径为20-40nm，单克隆抗体CP4mAb与胶体金溶液的质量体积比为60-72μg：1mL。


5.根据权利要求1所述检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器，其特征在于，在储存33天后，仍保持90％以上的原始电流信号值，电流变化的相对标准偏差为0.31％。


6.根据权利要求1所述检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器，其特征在于，所述电化学免疫传感器对RRS大豆的检出限为0.01％，对NK603玉米的检出限为0.03％。


7.一种检测作物中CP4-EPSPS蛋白的电化学免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：
1)制备胶体金溶液
采用柠檬酸三钠还原氯金酸法制得胶体金溶液，其为酒红色透明溶液，胶体金粒径20-40nm...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾海娟，唐雪明，王金斌，杨倩雯，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海;31