一种干涉型反射光谱RNA检测片制造技术

本发明专利技术属于核酸检测技术领域，提出了一种干涉型反射光谱RNA检测片，包括载玻片，载玻片上依次设置有第一铬层、第一金层、巯基修饰DNA层、DNA凝胶层、第一铬层、第二金层。其制备方法包括：将载玻片进行清洗，得到去污载玻片；在去污载玻片表面镀第一金层，得到载玻片Ⅰ；将载玻片Ⅰ清洗，清洗后在第一金层上涂布一层巯基修饰的DNA寡核苷酸链溶液Ⅵ，然后放入DNA凝胶溶液中浸泡，清洗后得到载玻片Ⅱ；在载玻片Ⅱ的表面再次镀第二金层，得到干涉型反射光谱RNA检测片，所述DNA寡核苷酸链溶液Ⅵ中DNA寡核苷酸链Ⅵ的序列如SEQ ID NO：10所示。通过上述技术方案，解决了现有技术中miRNA检测手段操作复杂、成本高、检测周期长的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种干涉型反射光谱RNA检测片
本专利技术属于核酸检测
，涉及一种干涉型反射光谱RNA检测片。
技术介绍
MicroRNAs(miRNAs)是细胞内一类内源性非编码小分子单链RNA，一般由19-23个碱基组成。其生物发生是一个复杂的过程。miRNAs的交替表达与许多疾病有关。在将异常表达水平的miRNA与人类疾病、遗传疾病和免疫系统功能改变的发生和发展联系起来方面，人们已经进行了大量的观察。miRNA既可以作为致癌基因，也可以作为肿瘤抑制因子，强调其在人类癌症中的重要性。miRNA的分析检测是对其生物功能研究、疾病诊断以及相关基因药物开发的关键技术，但由于其序列短、具有同源性、含量少、在细胞中表达丰度低，因此造成其检测十分困难。传统的miRNA分析检测技术主要包括：Northern杂交分析、实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)、克隆技术及基因芯片技术。这些技术在应用的过程中都有自己的优势和不足，可以根据实验的目的选择合适的检测手段。RT-PCR需要的样品量少，灵敏度高，是检测miRNA最重要的方法，但由于miRNA片段短本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种干涉型反射光谱RNA检测片，其特征在于，包括载玻片，载玻片上依次设置有第一铬层、第一金层、巯基修饰DNA层、DNA凝胶层、第二铬层、第二金层；/n所述巯基修饰DNA层采用的DNA寡核苷酸链Ⅵ序列如SEQ ID NO：10所示；/n所述DNA凝胶为DNA凝胶溶液经过干燥得到，所述DNA凝胶溶液为DNA凝胶-1溶液、DNA凝胶-2溶液或DNA凝胶-3溶液；/n所述DNA凝胶溶液的制备方法包括以下步骤：/nA、准备DNA寡核苷酸链Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ；/n所述DNA寡核苷酸链Ⅰ的序列如SEQ ID NO：1所示；/n所述DNA寡核苷酸链Ⅱ的序列如SEQ ...

【技术特征摘要】
1.一种干涉型反射光谱RNA检测片，其特征在于，包括载玻片，载玻片上依次设置有第一铬层、第一金层、巯基修饰DNA层、DNA凝胶层、第二铬层、第二金层；
所述巯基修饰DNA层采用的DNA寡核苷酸链Ⅵ序列如SEQIDNO：10所示；
所述DNA凝胶为DNA凝胶溶液经过干燥得到，所述DNA凝胶溶液为DNA凝胶-1溶液、DNA凝胶-2溶液或DNA凝胶-3溶液；
所述DNA凝胶溶液的制备方法包括以下步骤：
A、准备DNA寡核苷酸链Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ；
所述DNA寡核苷酸链Ⅰ的序列如SEQIDNO：1所示；
所述DNA寡核苷酸链Ⅱ的序列如SEQIDNO：2所示；
所述DNA寡核苷酸链Ⅲ-1的序列如SEQIDNO：3所示；
所述DNA寡核苷酸链Ⅲ-2的序列如SEQIDNO：4所示；
所述DNA寡核苷酸链Ⅲ-3的序列如SEQIDNO：5所示；
所述DNA寡核苷酸链Ⅳ-1的序列如SEQIDNO：6所示；
所述DNA寡核苷酸链Ⅳ-2的序列如SEQIDNO：7所示；
所述DNA寡核苷酸链Ⅳ-3的序列如SEQIDNO：8所示；
所述DNA寡核苷酸链Ⅴ的序列如SEQIDNO：9所示；
B、分别将步骤A的DNA寡核苷酸链Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ溶于超纯水中，制得DNA寡核苷酸链溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ，将DNA寡核苷酸链溶液Ⅰ和DNA寡核苷酸链溶液Ⅴ混合，在53.5～56.1℃下反应1～2h，反应结束后，加入DNA寡核苷酸链溶液Ⅱ，在67.5～70℃下反应3.5～4h，得到DNA凝胶主链溶液；
C、当制备DNA凝胶-1时，将步骤B的DNA寡核苷酸链溶液Ⅲ-1和DNA寡核苷酸链溶液Ⅳ-1混合，在52.7～57.5℃下反应1～2h，得到DNA凝胶支链-1溶液；将步骤B得到的DNA凝胶主链溶液和步骤C得到的DNA凝胶支链-1溶液混合得到混合液，将混合液进行退火，退火完成后的混合液在60～75rpm转速下旋转混合24h，得到DNA凝胶-1溶液；
当制备DNA凝胶-2时，将步骤B的DNA寡核苷酸链溶液Ⅲ-2和DNA寡核苷酸链溶液Ⅳ-2混合，在52.7～57.5℃下反应1～2h，得到DNA凝胶支链-2溶液；将步骤B得到的DNA凝胶主链溶液和步骤C得到的DNA凝胶支链-2溶液混合得到混合液，将混合液进行退火，退火完成后的混合液在60～75rpm转速下旋转混合24h，得到DNA凝胶-2溶液；
当制备DNA凝胶-3时，将步骤B的DNA寡核苷酸链溶液Ⅲ-3和DNA寡核苷酸链溶液Ⅳ-3混合，在52.7～57.5℃下反应1～2h，得到DNA凝胶支链-3溶液；将步骤B得到的DNA凝胶主链溶液和步骤C得到的DNA凝胶支链-3溶液混合得到混合液，将混合液进行退火，退火完成后的混合液在60～75rpm转速下旋转混合24h，得到DNA凝胶-3溶液。


2.根据权利要求1所述的一种干涉型反射光谱RNA检测片，其特征在于，所述DNA寡核苷酸链溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ的浓度均为100μmol/L。


3.根据权利要求2所述的一种干涉型反射光谱RNA检测片，其特征在于，所述DNA寡核苷酸链溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ-1、Ⅲ-2、Ⅲ-3、Ⅳ-1、Ⅳ-2、Ⅳ-3、Ⅴ的质量比为10...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙从新，
申请(专利权)人：孙从新，
类型：发明
国别省市：河北;13