【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定二倍体基因编辑作物T0代基因型的方法
本专利技术属于基因型鉴定
，具体涉及一种快速鉴定二倍体基因编辑作物T0代基因型的方法。
技术介绍
基因组编辑技术在作物育种中得到迅猛发展，这些基因编辑序列特异性核酸酶为基础，包括锌指核酸酶(zincfingernuclease,ZFN)、转录激活样效应物核酸酶(transcriptionactivator-likeeffectornucleases,TALENs)、RNA引导的规律成簇间隔短回文重复(clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats,CRISPR)/Cas9及通过CRISPR/Cas9改进的CRISPR/Cpf系统，在基因组特定位点切割双链DNA，然后通过非同源末端连接或同源重组方式修复双链缺口，从而在编辑位点附近发生碱基的缺失、插入或替换,达到编辑基因的目的。植物基因编辑技术往往借助常用的植物遗传转化方法，例如电穿孔、农杆菌介导的遗传转化等方法，对植物基因组特定位点进行插入、删除、替换等编...
【技术保护点】
1.一种快速鉴定二倍体基因编辑作物T
【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定二倍体基因编辑作物T0代基因型的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)以二倍体基因编辑作物T0代的基因组DNA为模板DNA，在基因编辑靶标位点的上下游设计特异性引物，进行PCR扩增，将得到的PCR产物回收后纯化和第一次Sanger测序；当测序结果为单一峰图，则所述基因编辑作物T0代的植株为纯合植株；当测序结果单一峰后面出现3个信号峰，则为嵌合体；单一峰后面出现2个信号峰，则为杂合体或双等位基因突变基因型；
(2)对于测序结果有杂峰或套峰的所述PCR产物进行T/A克隆，得连接产物；
(3)将所述连接产物转化感受态细胞，在LB培养基中震荡培养60min后，将菌液涂抹在含氨苄青霉素的LB平板上，培养8～12h，挑取单菌落于含氨苄青霉素的LB培养基中震荡培养8h后，进行第二次Sanger测序；将测序结果用NCBIBlast工具，与野生型序列进行比对；基因编辑序列为三个不同的序列，则为嵌合体；基因编辑序列为两个不同的序列，则为双等位基因突变基因型；对应的两个序列，一个为野生型，一个为突变序列，则为杂合体基因型。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)中在基因编辑靶标位点的下游350～500bp处设计特异性引物。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，在得到所述特异性引物后，还包括利用所述特异性引物和阴性植株DNA进行PCR扩增，扩增条带单一；回收和纯化PCR产物后，进行第一次sanger测序，测序结果显示无杂峰。
4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤(1)所述PCR扩增的体系以2...
【专利技术属性】
技术研发人员：闫晓红，吴刚，赵圣博，罗君玲，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42
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