一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染的药物及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染的药物及其检测方法，大黄藤10～20％；大黄20～30％；黄连5～15％；山奈4～10％；重楼0.1～1％；紫花茉莉3～7％；金银花1～3％；鱼腥草15～25％；板蓝根10～20％，本发明专利技术抗病毒、抗菌消炎、清热解毒、利尿消肿、通便的功效，能够通过治疗作用、预防作用和直接杀灭作用三种方式抑制猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的增殖。

【技术实现步骤摘要】
一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染的药物及其检测方法
本专利技术涉及药物及其检测
，尤其涉及一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染的药物及其检测方法。
技术介绍
中兽医学起源于我国古代，为保障我国畜牧业的健康发展起到了重要作用。中药主要来源于天然药物和加工产品，是我国传统医学的宝贵财富。目前世界上有超过50％抗感染药物与天然植物来源相关。因此需要体外细胞模型来评价药物对PRRSV(猪繁殖与呼吸综合征)的体外药效作用及可能得作用机制，需要得到动物临床实验评价药物抑制PRRSV增殖效果，需要证明药物对猪繁殖与呼吸综合征的临床用药提供理论依据。
技术实现思路
本专利技术的提供一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染的药物及其检测方法。本专利技术的方案是：一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染的药物，包括下列重量份的原料：作为优选的技术方案，包括下列重量份的原料：本专利技术还提供了一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染的药物检测方法，包括下列步骤：1)药物提取，将10～20％重量份的大黄藤、20～30％重量份的大黄、5～15％重量份的黄连、4～10％重量份的山奈、0.1～1％重量份的重楼、3～7％重量份的紫花茉莉、1～3％重量份的金银花、15～25％重量份的鱼腥草与10～20％重量份的板蓝根进行破碎，破碎后的粉末进行混匀，然后取其中一定量的混合药物放入砂锅中，往砂锅内倒入适量的蒸馏水，用玻璃棒不断搅拌，直到蒸馏水完全淹没，用加热砂锅，用玻璃棒不断搅拌，待水沸腾，沸腾10min后，用粗纱布过滤混合药物，转移到一号烧杯中；向混合药物残渣中加入适量的水，继续加热，沸腾后10min，用粗纱布继续过滤，转移到二号烧杯中；继续向混合药物滤渣中加入适量的水，加热，沸腾10min后，粗纱布过滤，转移到三号烧杯中；将一号烧杯、二号烧杯与三号烧杯内的滤液合并一起，用抽滤瓶进行抽滤，然后放入烘箱中进行浓缩，浓缩到相应的体积，计算得到药物浓度，过滤分装后，于4℃保存备用，得到提取药物；2)提取药物对Marc-145细胞的毒性处理，获得细胞抑制率与细胞存活率，得出提取药物的最大无毒浓度TC0与半数毒性浓度TC50；3)多种给药方式评价提取药物体外抗猪繁殖与呼吸综合征效果，获得各种给药方式的提取药物的半抑制浓度；4)多种给药方式对病毒毒力的影响，获得各种给药方式的提取药物的50％组织细胞感染量；5)提取药物对病毒ORF7基因mRNA表达的影响，RT-qPCR特异性检测引物的设计与合成；不同有效浓度提取药物与不同给药方式作用猪繁殖与呼吸障碍综合征后病毒ORF7基因mRNA的表达变化；RNA提取；RNA定量、反转录和qPCR；6)提取药物对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单抗蛋白表达的影响；7)提取药物在临床上的实验，通过临床上的实验观察提取药物对猪繁殖与呼吸障碍综合征感染猪仔临床体征与病理变化影响，然后进行提取药物对肺脏组织中猪繁殖与呼吸障碍综合征ORF7基因的表达变化影响，提取药物对肺脏组织中猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单抗蛋白表达的影响，通过IHC检测猪繁殖与呼吸障碍综合征在肺脏组织中的表达，获得提取药物的检测结果。作为优选的技术方案，所述步骤3)中多种给药方式包括预防作用给药、治疗作用给药与直接灭杀作用给药。作为优选的技术方案，所述步骤4)中多种给药方式包括预防作用给药、治疗作用给药与直接灭杀作用给药。作为优选的技术方案，所述步骤5)中RNA定量、反转录和qPCR包括下列步骤：a)总RNA浓度及纯度测定；b)将提取的RNA反转录为cDNA；c)将反转录产物cDNA作为qPCR的模板，用来扩增ORF7基因与GAPDH基因。作为优选的技术方案，所述步骤7)中提取药物对肺脏组织中猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单抗蛋白表达的影响，进行采集猪的肺脏，然后通过蛋白质印迹法检测肺脏组织中猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单抗蛋白表达。作为优选的技术方案，所述蛋白质印迹法检测肺脏组织中猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单抗蛋白表达包括以下步骤：1)蛋白样品的制备；2)SDS-PAGE电泳与转膜；3)抗体孵育；4)化学发光与显影。由于采用了上述技术方案，一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染的药物及其检测方法，包括下列步骤：1)药物提取，将10～20％重量份的大黄藤、20～30％重量份的大黄、5～15％重量份的黄连、4～10％重量份的山奈、0.1～1％重量份的重楼、3～7％重量份的紫花茉莉、1～3％重量份的金银花、15～25％重量份的鱼腥草与10～20％重量份的板蓝根进行破碎，破碎后的粉末进行混匀，然后取其中一定量的混合药物放入砂锅中，往砂锅内倒入适量的蒸馏水，用玻璃棒不断搅拌，直到蒸馏水完全淹没，用加热砂锅，用玻璃棒不断搅拌，待水沸腾，沸腾10min后，用粗纱布过滤混合药物，转移到一号烧杯中；向混合药物残渣中加入适量的水，继续加热，沸腾后10min，用粗纱布继续过滤，转移到二号烧杯中；继续向混合药物滤渣中加入适量的水，加热，沸腾10min后，粗纱布过滤，转移到三号烧杯中；将一号烧杯、二号烧杯与三号烧杯内的滤液合并一起，用抽滤瓶进行抽滤，然后放入烘箱中进行浓缩，浓缩到相应的体积，计算得到药物浓度，过滤分装后，于4℃保存备用，得到提取药物；2)提取药物对Marc-145细胞的毒性处理，获得细胞抑制率与细胞存活率，得出提取药物的最大无毒浓度TC0与半数毒性浓度TC50；3)多种给药方式评价提取药物体外抗猪繁殖与呼吸综合征效果，获得各种给药方式的提取药物的半抑制浓度；4)多种给药方式对病毒毒力的影响，获得各种给药方式的提取药物的50％组织细胞感染量；5)提取药物对病毒ORF7基因mRNA表达的影响，RT-qPCR特异性检测引物的设计与合成；不同有效浓度提取药物与不同给药方式作用猪繁殖与呼吸障碍综合征后病毒ORF7基因mRNA的表达变化；RNA提取；RNA定量、反转录和qPCR；6)提取药物对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单抗蛋白表达的影响；7)提取药物在临床上的实验，通过临床上的实验观察提取药物对猪繁殖与呼吸障碍综合征感染猪仔临床体征与病理变化影响，然后进行提取药物对肺脏组织中猪繁殖与呼吸障碍综合征ORF7基因的表达变化影响，提取药物对肺脏组织中猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒单抗蛋白表达的影响，通过IHC检测猪繁殖与呼吸障碍综合征在肺脏组织中的表达，获得提取药物的检测结果。本专利技术的优点：大黄藤、黄连、金银花和鱼腥草具有清热解毒、凉血止血、凉散风热、抗菌、抗肿瘤、抗凝血的功效，共为君药；大黄、紫花茉莉有泻下通便、退热、利胆、利胰，抗惊厥、抗菌、抗炎、清热利湿、利尿消肿、活血散淤的作用，为臣药；板蓝根，重楼具有清热解毒、抗病毒、消炎止痛、平喘止咳、熄风定惊、活血消肿，抑制真菌、止血、抗菌消炎和镇咳作用，为佐药；山奈行气温中、消食、止痛，黄酒通行十二经络，为使药，组方配伍具有抗病毒、抗菌消炎、清热解毒、利尿消肿、通便的功效；实现了体外细胞模型来评价复本专利技术对PRR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染药物，其特征在于，包括下列重量份的原料：/n

【技术特征摘要】
1.一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染药物，其特征在于，包括下列重量份的原料：





2.如权利要求1所述的一种抗猪繁殖与呼吸综合征感染药物，其特征在于，包括下列重量份的原料：





3.一种如权利要求1或2所述的抗猪繁殖与呼吸综合征感染药物的检测方法，其特征在于，包括下列步骤：
1)药物提取，将10～20％重量份的大黄藤、20～30％重量份的大黄、5～15％重量份的黄连、4～10％重量份的山奈、0.1～1％重量份的重楼、3～7％重量份的紫花茉莉、1～3％重量份的金银花、15～25％重量份的鱼腥草与10～20％重量份的板蓝根进行破碎，破碎后的粉末进行混匀，然后取其中一定量的混合药物放入砂锅中，往砂锅内倒入适量的蒸馏水，用玻璃棒不断搅拌，直到蒸馏水完全淹没，用加热砂锅，用玻璃棒不断搅拌，待水沸腾，沸腾10min后，用粗纱布过滤混合药物，转移到一号烧杯中；向混合药物残渣中加入适量的水，继续加热，沸腾后10min，用粗纱布继续过滤，转移到二号烧杯中；继续向混合药物滤渣中加入适量的水，加热，沸腾10min后，粗纱布过滤，转移到三号烧杯中；将一号烧杯、二号烧杯与三号烧杯内的滤液合并一起，用抽滤瓶进行抽滤，然后放入烘箱中进行浓缩，浓缩到相应的体积，计算得到药物浓度，过滤分装后，于4℃保存备用，得到提取药物；
2)提取药物对Marc-145细胞的毒性处理，获得细胞抑制率与细胞存活率，得出提取药物的最大无毒浓度TC0与半数毒性浓度TC50；
3)多种给药方式评价提取药物体外抗猪繁殖与呼吸综合征效果，获得各种给药方式的提取药物的半抑制浓度；
4)多种给药方式对病毒毒力的影响，获得各种给药方式的提取药物的50％组织细胞感染量；
5)提取药物对病毒ORF7基因mRNA表达的影响，RT-qPCR特异性检测引物的设计与合成；不同有效浓度提取药物与不同给药方式作用猪繁殖与呼吸障碍综合征后病毒ORF7基因m...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕峻龙，黄晓老，尹革芬，郑旺华，杨培昌，王蕾，左庆威，
申请(专利权)人：楚雄彝族自治州动物疫病预防控制中心，景洪市畜牧技术推广站，云南农业大学，
类型：发明
国别省市：云南;53