BRI1在植物免疫信号验证中的应用及方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及BRI1在植物免疫信号验证中的应用及方法。本发明专利技术首次将植物发育相关调控基因BRI1应用于植物免疫信号验证中。将免疫功能受体蛋白与受体蛋白BRI1进行重组构建得重组蛋白；该重组蛋白能够特异性结合外源的PAMPs分子并激活拟南芥发育相关报告基因的表达，通过报告基因的表达量确定待测PAMPs分子的免疫激发活性。本发明专利技术方法打破了植物免疫与发育研究的界限，通过检验油菜素内酯相关信号，实现了在多个激发子存在条件下，单一免疫信号对其受体蛋白的激活能力的定量分析，能够有效验证多抗原重组免疫蛋白中不同免疫元件的有效性，为重组免疫蛋白的作用机制研究、植物学研究提供了新的技术手段。

【技术实现步骤摘要】
BRI1在植物免疫信号验证中的应用及方法
本专利技术属于生物
，涉及BRI1在植物免疫信号验证中的应用及方法。
技术介绍
植物并没有动物所具有的获得性免疫系统和免疫细胞，而是利用自身的先天性免疫以抵抗病原菌的入侵。植物感知到入侵体内的病原菌后，会激发两种免疫防御系统：第一种为病原物相关分子模式触发免疫(PAMP-triggeredimmunity，PTI)，这种免疫系统主要依靠位于细胞膜表面的分子模式识别受体(Patternrecognitionreceptor，PRRs)识别病原菌的相关分子模式(PathogenassociatedmolecμLarpattern，PAMPs)而激发的，在PTI被触发后，植物为了阻止病原菌入侵会通过胼胝质沉积来加强细胞壁；第二种为效应子触发免疫(Effector-TriggeredImmunity，ETI)，少数病原菌会释放毒性因子(VirμLenceFactors)也可称为效应子(EffectorMolecμLes)到植物细胞中从而抑制PTI，这些效应子在阻碍细胞正常工作的同时也会被胞内相关抗性蛋白所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.BRI1基因在植物免疫信号验证中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.BRI1基因在植物免疫信号验证中的应用。


2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，编码BRI1中胞内激酶域的基因片段在植物免疫信号验证中的应用，其核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。


3.一种植物免疫信号验证方法，其特征在于，构建含免疫功能受体蛋白编码基因与受体蛋白BRI1编码基因的重组表达载体，并在原生质体中表达，得到含免疫功能受体蛋白和受体蛋白BRI1的重组蛋白；该重组蛋白能够特异性结合外源的PAMPs分子并激活植物发育相关报告基因的表达，通过报告基因的表达量确定待测PAMPs分子的免疫激发活性。


4.根据权利要求3所述植物免疫信号验证方法，其特征在于，所述报告基因表达量的确定方法为：构建含报告基因的启动子序列和荧光素酶基因的重组表达载体，将该重组表达载体与含免疫功能受体蛋白编码基因与受体蛋白BRI1编码基因的重组表达载体共同转入原生质体细胞中，通过对荧光素酶的定量检测确定报告基因的表达量。


5.根据权利要求3所述植物免疫信号验证方法，其特征在于，报告基因为植物发育相关的油菜素内酯信号，所述油菜素内酯信号基因包括TCH4、SAUR9、XTH3、MIOX2；优选地，报告基因为TCH4。


6.根据权利要求3-5任一项所述植物免疫信号验证方法，其特征在于，所述方法具体步骤包括：
(一)目的片段的扩增
以拟南芥基因组DNA为模板，扩增如SEQIDNO：1所示的编码BRI1胞内激酶域的基因核苷酸序列，得到BRI1KD片段；扩增得到如SEQIDNO：2所示的编码FLS2胞外富亮氨酸结构域和跨膜域基因的核苷酸序列，得到的基因片段命名为FLS2NT；
(二)重组载体的构建
(1)背景载体的构建：分别将BRI1KD片段和HBT-GFP载体分别进行KpnI和SpeI进行双酶切后采用T4DNA连接酶进行连接，得到重组载体HBT-BRI1KD-GFP，该载体为进一步进行分子改造的背景载体，并制备转化子和提取重组质粒HBT-BRI1KD-GFP；
(2)重组蛋白表达载体的构建：将HBT-BRI...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡易，李琦，郭晋雅，李君浩，黄燕，张怀渝，唐自忠，王浩锋，
申请(专利权)人：四川农业大学，成都绿信诺生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51