【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】从冻干球生产肺炎链球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法
技术介绍
(1)专利
本专利技术涉及一种生产肺炎球菌荚膜多糖载体蛋白缀合物的方法，其中将特定肺炎球菌血清型的一种或多种活化的肺炎球菌多糖和载体蛋白分别以载体蛋白冻干球和一种或多种活化多糖冻干球的形式冻干。将预定量的载体蛋白冻干球和活化的多糖冻干球混合在一起，并将混合物在有机溶剂中重构以生产多糖载体蛋白缀合物。可以将各自包含特定血清型的多糖的多种缀合物用于生产用于疫苗的含有缀合物的组合的多价肺炎球菌免疫原性组合物。(2)相关领域的描述肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)是一种荚膜细菌，并且是全世界严重疾病的重要原因。1997年，美国疾病控制与预防中心(CDC)估计，美国每年有3,000例肺炎球菌脑膜炎、50,000例肺炎球菌菌血症、7,000,000例肺炎球菌中耳炎和500,000例肺炎球菌性肺炎。参见CentersforDiseaseControlandPrevention,MMWRMorbMortalWklyRep1997,46(RR-8):1-13。此外，这些疾病的并发症可能很严重，一些研究报道，肺炎球菌脑膜炎的死亡率高达8％，神经系统后遗症高达25％。参见Arditi等，1998,Pediatrics102:1087-97。事实证明，已获许可多年的多价肺炎球菌多糖疫苗在预防成年人，尤其是老年人和高危人群的肺炎球菌疾病方面具有不可估量的价值。然而，婴幼儿对未缀合的肺炎球菌多糖反应较差。细菌多糖是不依赖T细胞的免疫原，在婴儿...
【技术保护点】
1.一种制备组合物的方法，所述组合物包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌多糖，所述方法包括：/n(a)提供第一冻干球组合物和第二冻干球组合物，所述第一冻干球组合物包含来自肺炎链球菌血清型的一种或多种活化的肺炎链球菌多糖，所述第二冻干球组合物包含载体蛋白；/n(b)将一定量的所述第一冻干球组合物与一定量的所述第二冻干球组合物组合在一起，以提供具有所述一种或多种活化的多糖与所述载体蛋白的预定比率的冻干球混合物；/n(c)在有机溶剂中重构所述冻干球混合物并混合以提供重构的混合物；和/n(d)向所述重构的混合物中添加还原剂以生产缀合物溶液，所述缀合物溶液包含与一种或多种肺炎链球菌血清型的多糖缀合的载体蛋白。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180430 US 62/664,6211.一种制备组合物的方法，所述组合物包含与载体蛋白共价连接的肺炎链球菌多糖，所述方法包括：
(a)提供第一冻干球组合物和第二冻干球组合物，所述第一冻干球组合物包含来自肺炎链球菌血清型的一种或多种活化的肺炎链球菌多糖，所述第二冻干球组合物包含载体蛋白；
(b)将一定量的所述第一冻干球组合物与一定量的所述第二冻干球组合物组合在一起，以提供具有所述一种或多种活化的多糖与所述载体蛋白的预定比率的冻干球混合物；
(c)在有机溶剂中重构所述冻干球混合物并混合以提供重构的混合物；和
(d)向所述重构的混合物中添加还原剂以生产缀合物溶液，所述缀合物溶液包含与一种或多种肺炎链球菌血清型的多糖缀合的载体蛋白。
2.根据权利要求1所述的方法，其中通过选自冻干和辐射能真空(REV)脱水的升华干燥方法制备所述第一冻干球组合物和所述第二冻干球组合物。
3.根据权利要求1所述的方法，其中通过选自冻干和辐射能真空(REV)脱水的升华干燥方法制备所述第一冻干球组合物和所述第二冻干球组合物，其包括提供第一水溶液和第二水溶液，所述第一水溶液包含来自一种或多种肺炎链球菌血清型的活化的肺炎链球菌多糖，所述第二水溶液包含载体蛋白和缓冲剂，其中所述第一水溶液和所述第二水溶液包含约0.5％或更多的蔗糖，并且将所述第一水溶液和所述第二水溶液经过升华干燥方法，以生产所述第一冻干球组合物和所述第二冻干球组合物。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的组氨酸、琥珀酸盐、MES、MOPS、HEPES或乙酸盐缓冲剂。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一冻干球组合物和所述第二冻干球组合物具有小于6％的水分含量。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述有机溶剂是二甲基亚砜(DMSO)。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述重构在八分钟或更短时间内进行和所述混合在120分钟或更短时间内进行。
9.根据权利要求1所述的方法，其中所述缀合物溶液包含以重量对重量计以约0.6至约1.5的多糖与载体蛋白的比率缀合至所述载体蛋白的多糖。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述缀合物溶液包含小于所述溶液中总多糖的约15％的游离多糖量。
11.根据权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种多糖是从选自以下的肺炎链球菌血清型获得：血清型1、2、3、4、5、6A、6B、6C、6D、6E、6G、6H、7F、7A、7B、7C、8、9A、9L、9N、9V、10F、10A、10B、10C、11F、11A、11B、11C、11D、11E、12F、12A、12B、13、14、15F、15A、15B、15C、16F、16A、17F、17A,18F、18A、18B、18C、19F、19A、19B、19C、20A、20B、21、22F、22A、23F、23A、23B、24F、24A、24B、25F、25A、27、28F、28A、29、31、32F、32A、33F、33A、33B、33C、33D、33E,34、35F、35A、35B、35C、36、37、38、39、40、41F、41A、42、43、44、45、46、47F、47A、48、CWPS1、CWPS2和CWPS3。
12.根据权利要求1所述的方法，其中所述载体蛋白是选自以下的灭活的细菌类毒素：破伤风类毒素、白喉类毒素、百日咳类毒素、细菌溶细胞素或肺炎球菌溶血素。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述灭活的细菌类毒素是CRM197。
14.根据权利要求1所述的方法，其中所述缀合物溶液是无菌过滤的。
15.根据权利要求1所述的方法，其中通过与氧化剂反应将所述肺炎链球菌多糖活化。
16.一种制备组合物的方法，所述组合物包含两种或更多种缀合物，每种缀合物含有与载体蛋白共价连接的来自一种或多种血清型的肺炎链球菌多糖，所述方法包括：
(a)提供
(i)两种或更多种第一水溶液，每种第一水溶液包含特定肺炎链球菌血清型的活化多糖，其中所述多糖已与氧化剂反应以提供所述活化多糖，且其中所述两种或更多种第一水溶液是不同的；或
(ii)两种或更多种第一水溶液，每种第一水溶液包含两种或更多种肺炎链球菌血清型的活化多糖，其中所述多糖已与氧化剂反应以提供所述活化多糖，且其中所述两种或更多种第一水溶液是不同的；
(b)提供两种或更多种第二水溶液，每种均包含载体蛋白和缓冲剂，其中两种或更多种第二水溶液的量对应于至少所述两种或更多种第一水溶液的量；
(c)在生产冻干球的升华干燥方法中分别干燥所述两种或更多种第一水溶液和所述两种或更多种第二水溶液以生产两种或更多种第一冻干球组合物和两种或更多种第二冻干球组合物，所述第一冻干球组合物各自包含干燥的多糖，所述第二冻干球组合物各自包含干燥的载体蛋白；
(d)独立地将一定量的第一冻干球组合物与一定量的第二冻干球组合物组合，以提供多种冻干球混合物，每种冻干球混合物具有预定比率的活化多糖与载体蛋白；
(e)在有机溶剂中重构所述多种冻干球混合物并混合，以提供多种重构的混合物；
(f)向所述多种重构的混合物中添加还原剂，以生产多种缀合物溶液；和
(g)将两种或更多种所述多种缀合物溶液组合，以生产包含两种或更多种缀合物的组合物，每种缀合物含有与载体蛋白共价连接的来自一种或多种血清型的肺炎链球菌多糖。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述升华干燥方法选自冻干和辐射能真空(REV)脱水。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述第一水溶液和所述第二水溶液包含约0.5％或更多蔗糖。
19.根据权利要求16所述的方法，其中所述有机溶剂是二甲基亚砜(DMSO)。
20.根据权利要求16所述的方法，其中所述重构在八分钟或更短时间内进行和所述混合在120分钟或更短时间内进行。
21.根据权利要求16所述的方法，其中每种缀合物溶液包含以重量对重量计以约0.6至约1.3的多糖与载体蛋白的比率缀合至所述载体蛋白的多糖。
22.根据权利要求16所述的方法，其中每种缀合物溶液包含小于所述溶液中总多糖的约15％的游离多糖量。
23.根据权利要求16所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的组氨酸、琥珀酸盐、MES、MOPS、HEPES或乙酸盐缓冲剂。
24.根据权利要求16所述的方法，其中所述缓冲剂是pH范围为5.0-7.0的磷酸盐或柠檬酸盐缓冲剂。
25.根据权利要求16所述的方法，其中所述一种或多种多糖是从选自以下的一种或多种肺炎链球菌血清型中获得：血清型1、2、3、4、5、6A、6B、6C、6D、6E、6G、6H、7F、7A、7B、7C、8、9A、9L、9N、9V、10F、10A、10B、10C、11F、11A、11B、11C、11D、11E、12F、12A、12B、13、14、15F、15A、15B、15C、16F、16A、17F、17A,18F、1...
【专利技术属性】
技术研发人员：P·L·阿尔，A·巴姆布哈尼，C·J·法雷尔，P·麦克休，M·C·琼斯，D·D·罗斯，J·R·西纳柯拉，J·斯坦布罗，M·P·沃森，E·温，M·A·温特斯，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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